小續(xù)命湯改善心肺復(fù)蘇后大鼠神經(jīng)功能及腦保護(hù)作用*

周生花，李華，郭燕可，張國(guó)妮

（1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，鄭州 450046；2.安陽(yáng)市中醫(yī)院，安陽(yáng) 455000）

心臟驟停是院外卒死的主要原因。據(jù)報(bào)道心臟驟?；颊咧袃H24.4%接受了心肺復(fù)蘇，接受心肺復(fù)蘇患者中僅5%可恢復(fù)自主循環(huán)，而精神功能良好患者出院率僅1%[1]。因此，該病嚴(yán)重威脅人類生命與健康。雖然目前已有標(biāo)準(zhǔn)心肺復(fù)蘇流程用于積極治療心臟驟停，但是心臟驟停后腦組織血管灌流停滯引發(fā)的腦損傷仍是患者死亡的主要原因[2]。目前臨床治療心臟驟停引起的腦損傷主要有鈣通道阻滯劑、抗氧化劑、糖皮質(zhì)激素等藥物，但此類藥物均非腦損傷治療特效藥，療效并不能令人滿意[3]。因此如何防治心肺復(fù)蘇后腦損傷仍需要進(jìn)一步研究。

小續(xù)命湯主要成分有防風(fēng)、麻黃、桂枝、人參等，是治療缺血性腦卒中的傳統(tǒng)藥方。有研究表明，小續(xù)命湯可減輕腦缺血大鼠腦損傷，具有腦神經(jīng)保護(hù)作用[4]。但是小續(xù)命湯對(duì)在心肺復(fù)蘇后大鼠腦損傷是否有療效相關(guān)報(bào)道較少。據(jù)報(bào)道，氧化應(yīng)激在心肺復(fù)蘇后腦損傷過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。胞漿蛋白伴侶分子（Keap1）-核因子 E2相關(guān)因子（Nrf2）/血紅素氧合酶1（HO-1）是機(jī)體重要內(nèi)源性抗氧化通路，參與腦組織抗氧化應(yīng)激反應(yīng)[6]。有研究表明，小續(xù)命湯可抑制腦缺血大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕腦損傷[7]。但是小續(xù)命湯是否影響Keap1-Nrf2/HO-1信號(hào)通路發(fā)揮療效相關(guān)研究較少。因此探究小續(xù)命湯對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦保護(hù)作用及對(duì)Keap1-Nrf2/HO-1通路的影響具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 63只7～9周齡無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)SD雄鼠，體質(zhì)量200～250 g，購(gòu)自上海靈暢生物科技有限公司，許可證號(hào)：生產(chǎn)許可SCXK（滬）2018-0003；小續(xù)命湯有效成分組粉末購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所篩選中心；二甲基亞砜（DMSO）、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒購(gòu)自北京Solarbio公司，大鼠腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自上酶聯(lián)生物科技有限公司；熒光定量預(yù)混液購(gòu)自北京諾貝萊生物科技有限公司；引物合成委托武漢金開(kāi)瑞公司；鼠 Keap1、Nrf2、HO-1、內(nèi)參（β-actin）一抗和兔抗鼠二抗均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

RM-6240BD多通道生理信號(hào)采集系統(tǒng)購(gòu)自成都儀器廠；CPT-100D探針溫度計(jì)購(gòu)自四川成都泰盟儀器公司；ALC-V8S小動(dòng)物呼吸機(jī)購(gòu)自上海奧爾科特生物技術(shù)有限公司；KWD-808Ⅱ電針儀購(gòu)自常州市武進(jìn)長(zhǎng)城醫(yī)療器械有限公司；Synergy2酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Biotek公司；TGL-20M高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自山東科博科學(xué)儀器有限公司；LightCycler 96實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀購(gòu)自美國(guó)羅氏公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 將63只SPF級(jí)SD雄鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組（8只）和建模組（55只），建模組大鼠均按照如下方法建立心肺復(fù)蘇模型：使用10%水合氯醛麻醉大鼠，分離大鼠股動(dòng)脈和股靜脈，選取約1 cm長(zhǎng)度結(jié)扎阻斷血流，并分別插入股動(dòng)脈導(dǎo)管和股靜脈導(dǎo)管。導(dǎo)管結(jié)三通轉(zhuǎn)換器，連接在壓力傳感器上，可通過(guò)多通道生理信號(hào)采集系統(tǒng)觀察動(dòng)脈波形。將大鼠氣管插管后接連小動(dòng)物呼吸機(jī)。在大鼠四肢皮下采集信號(hào)檢測(cè)大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖。使用經(jīng)皮心外膜電刺激法建立大鼠心臟驟停動(dòng)物模型[8]。當(dāng)動(dòng)脈血壓在電刺激10 s后迅速下降至25 mm Hg（1 mm Hg≈0．133 kPa，下同）以下，且血壓波形接近直線，或暫停電刺激后心電圖表現(xiàn)出心室顫動(dòng)、心搏停止，則判定為心臟驟停。大鼠出現(xiàn)心臟驟停后，持續(xù)電刺激3 min后停止電刺激和特殊干預(yù)。觀察3 min，觀察期間若大鼠自主恢復(fù)心率且平均動(dòng)脈壓高于25 mm Hg，則認(rèn)為建模失敗。將心臟驟停建模成功的大鼠進(jìn)行常規(guī)心肺復(fù)蘇，待大鼠心率恢復(fù)竇性心律，動(dòng)脈壓高于60 mm Hg并維持10 min以上則認(rèn)為大鼠恢復(fù)自主循環(huán)。若胸外按壓及機(jī)械通氣時(shí)長(zhǎng)超過(guò)10 min大鼠仍未恢復(fù)自主循環(huán)，則認(rèn)為心肺復(fù)蘇失敗。將建模成功的大鼠隨機(jī)分為5組，小續(xù)命湯高、中、低劑量組、二甲基亞砜（DMSO）組和模型組。余下8只大鼠記作對(duì)照組，如上述進(jìn)行手術(shù)操作但不進(jìn)行電刺激致心臟驟停和心肺復(fù)蘇。大鼠心肺復(fù)蘇后10 min，小續(xù)命湯高、中、低劑量組灌胃300、150、75mg/kg小續(xù)命湯。DMSO組灌胃100mg/kg的DMSO。連續(xù)治療7 d后，觀察以下指標(biāo)。

大鼠神經(jīng)功能評(píng)分：分別在治療前后對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分細(xì)則見(jiàn)表1。

表1 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Neurological function score standard of rats

大鼠腦海馬組織病理學(xué)觀察：通過(guò)HE染色觀察大鼠腦海馬組織病理變化。斷頭法處死大鼠后，取大鼠腦海馬組織，4%多聚甲醛固定過(guò)夜后，進(jìn)行石蠟包埋。將組織蠟塊切成厚度為4 μm切片，經(jīng)過(guò)脫蠟、復(fù)水后按照HE染色試劑盒進(jìn)行染色，乙醇梯度脫水，二甲苯透明化處理后封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察。

大鼠腦海馬組織中氧化應(yīng)激生化指標(biāo)檢測(cè)：通過(guò)ELISA檢測(cè)大鼠腦海馬組織中MDA和SOD濃度。取大鼠腦海馬組織，加少許液氮研磨勻漿，1 000×g離心10 min后取上清液。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔按照ELISA試劑盒操作步驟操作。加入終止液后，立即在450 nm波長(zhǎng)處讀出各孔光吸收（OD）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔OD值與蛋白濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并依照OD值計(jì)算各樣本孔蛋白濃度。

大鼠腦海馬組織中Keap1、Nrf2和HO-1信使核糖核酸（mRNA）表達(dá)檢測(cè)：通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)大鼠腦海馬組織中Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA表達(dá)水平。取大鼠腦海馬組織研磨勻漿，加入Trizol提取組織總核糖核酸（RNA），并反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)的脫氧核糖核酸（cDNA）。從美國(guó)國(guó)家生物信息中心（NCBI）上查找Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA序列并設(shè)計(jì)上下游引物，Keap1上游引物為：5’-TTAGGATGCCTCGAATAGCAT-3’，下游引物為：5’-TGCTTTCGCAATCGTAGACC-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度 122 bp，Nrf2 上游引物為：5’-GATGCTTCCAGATACGATAAC-3’，下游引物為：5’-CTTACAATCCAGGTAGCAAT-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為 103 bp，HO-1 上游引物為：5’-GTCTCCTAGAGGCTTACAAG-3’，下游引物為：5’-TGTCGCAACTTAGCTACGATCA-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為119 bp。持家基因β-actin上游引物為：5’-AGAGCTTGATTACGAAGTAG-3’，下游引物為：5’-TCCTCAATGGATGACGTAGAC-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為121 bp。退火溫度56 bp，40 個(gè)循環(huán)。按照 2-ΔΔCt計(jì)算 Keap1、Nrf2 和 HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

大鼠腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平：通過(guò)蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)大鼠腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平。取大鼠腦海馬組織加少許液氮研磨勻漿，加入細(xì)胞裂解液提取組織總蛋白。進(jìn)行蛋白凝膠電泳。轉(zhuǎn)膜，使用5% BSA封閉室溫封閉2 h后，加一抗4℃孵育過(guò)夜，更換二抗室溫孵育2 h，顯色。分析條帶灰度值并以β-actin為內(nèi)參，分析Keap1、Nrf2和HO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過(guò)SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多樣本間比較使用單因素方差分析，組間兩兩比較使用SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分 55只建模大鼠建立心臟驟停動(dòng)物模型均建模成功，心肺復(fù)蘇過(guò)程中有41只成功回復(fù)自助循環(huán)，其中14只大鼠均復(fù)蘇失敗。在治療期間，又出現(xiàn)了模型組、小續(xù)命湯高劑量組各1只大鼠死亡，推測(cè)其原因可能與復(fù)蘇后心肺功能不全有關(guān)。大鼠分組情況為：對(duì)照組8只，模型組9只，DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組各8只。

大鼠神經(jīng)功能評(píng)分DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組均低于治療前（P＜0.05），治療前模型組、DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組均高于對(duì)照組（P＜0.05）。治療后，模型組高于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組和小續(xù)命湯高、中、低劑量組均低于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均低于DMSO組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠治療前后神經(jīng)功能評(píng)分（±s）Tab.2 Neurological function scores of rats in groups before and after treatment（±s）

表2 各組大鼠治療前后神經(jīng)功能評(píng)分（±s）Tab.2 Neurological function scores of rats in groups before and after treatment（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與 DMSO組比較，△P＜0.05；與治療前比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 評(píng)分（分）治療前 治療后對(duì)照組 8 - -模型組 9 33.56±3.68* 30.77±5.67*DMSO 組 8 34.63±4.32* 10.50±4.54#▲小續(xù)命湯高劑量組 8 34.38±3.14* 7.63±2.78#△▲小續(xù)命湯中劑量組 8 33.87±2.99* 10.75±3.16#△▲小續(xù)命湯低劑量組 8 33.00±4.03* 18.75±3.32#▲

2.2 大鼠腦海馬區(qū)組織病理學(xué)觀察 對(duì)照組腦海馬區(qū)組織神經(jīng)元排列緊密且整齊，形態(tài)正常，無(wú)明顯病變。模型組可見(jiàn)神經(jīng)元排列稀疏且凌亂，神經(jīng)元出現(xiàn)明顯水腫，細(xì)胞核腫脹，胞漿空泡樣變。DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組病變均出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 治療后大鼠腦海馬區(qū)病理學(xué)觀察（HE，×200）Fig.1 Pathological observation of hippocampus tissues in groups after treatment（HE，× 200）

2.3 大鼠腦海馬組織中氧化應(yīng)激生化指標(biāo)檢測(cè) 大鼠腦海馬組織MDA含量模型組高于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組和小續(xù)命湯高、中、低劑量組均低于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均低于DMSO組（P＜0.05）；SOD 含量模型組低于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組和小續(xù)命湯高、中、低劑量組均高于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均高于DMSO組（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠治療后腦海馬組織中氧化應(yīng)激生化指標(biāo)檢測(cè)（±s）Tab.3 Biochemical indexes of oxidativestress in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

表3 各組大鼠治療后腦海馬組織中氧化應(yīng)激生化指標(biāo)檢測(cè)（±s）Tab.3 Biochemical indexes of oxidativestress in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與 DMSO組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) MDA（nmol/mg） SOD（U/mg）對(duì)照組 8 5.97±0.31 206.58±10.65模型組 9 9.35±0.36* 134.35±12.56*DMSO 組 8 8.36±0.49# 161.89±10.71#小續(xù)命湯高劑量組 8 6.71±0.34#△ 192.62±16.58#△小續(xù)命湯中劑量組 8 7.79±0.39#△ 173.90±14.22#△小續(xù)命湯低劑量組 8 8.46±0.42# 158.18±9.49#

2.4 大鼠腦海馬組織中 Keap1、Nrf2和 HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量檢測(cè) Keap1 mRNA相對(duì)表達(dá)量模型組低于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組和小續(xù)命湯高、中、低劑量組均低于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均低于DMSO組（P＜0.05）；Nrf2和HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量模型組高于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組均高于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均高于DMSO組（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠治療后腦海馬組織中Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.4 Relative expressions of Keap1，Nrf2 and HO-1 mRNA in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

表4 各組大鼠治療后腦海馬組織中Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.4 Relative expressions of Keap1，Nrf2 and HO-1 mRNA in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與 DMSO組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) Keap1 Nrf2 HO-1對(duì)照組 8 1.22±0.14 0.48±0.06 0.59±0.08模型組 9 0.97±0.12* 0.68±0.11* 0.74±0.09*DMSO 組 8 0.83±0.09# 0.74±0.12# 0.87±0.10#小續(xù)命湯高劑量組 8 0.49±0.08#△ 1.33±0.18#△ 1.88±0.13#△小續(xù)命湯中劑量組 8 0.73±0.11#△ 1.01±0.14#△ 1.41±0.12#△小續(xù)命湯低劑量組 8 0.85±0.13# 0.78±0.10# 0.92±0.15#

2.5 大鼠腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平 Keap1蛋白表達(dá)水平模型組低于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組和小續(xù)命湯高、中、低劑量組均低于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均低于DMSO組（P＜0.05）；Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平模型組高于對(duì)照組（P＜0.05），DMSO組、小續(xù)命湯高、中、低劑量組均高于模型組（P＜0.05），小續(xù)命湯高、中劑量組均高于DMSO組（P＜0.05），見(jiàn)圖2、表5。

圖2 大鼠腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)檢測(cè)Fig.2 Protein expressions of Keap1，Nrf2 and HO-1 in rat hippocampus

表5 各組大鼠治療后腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.5 Relative expressions of Keap1，Nrf2 and HO-1 proteins in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

表5 各組大鼠治療后腦海馬組織Keap1、Nrf2和HO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量（±s）Tab.5 Relative expressions of Keap1，Nrf2 and HO-1 proteins in hippocampus of rats in groups after treatment（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與 DMSO組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) Keap1 Nrf2 HO-1對(duì)照組 8 0.82±0.12 0.33±0.05 0.74±0.15模型組 9 0.70±0.09* 0.59±0.07* 0.97±0.14*DMSO 組 8 0.63±0.08# 0.71±0.10# 1.19±0.17#小續(xù)命湯高劑量組 8 0.32±0.05#△ 1.14±0.17#△ 2.10±0.09#△小續(xù)命湯中劑量組 8 0.48±0.06#△ 0.89±0.12#△ 1.65±0.14#△小續(xù)命湯低劑量組 8 0.60±0.08# 0.68±0.09# 1.22±0.11#

3 討論

心跳驟停心肺復(fù)蘇成功患者中常出現(xiàn)預(yù)后不良，主要表現(xiàn)為認(rèn)知障礙、運(yùn)動(dòng)障礙、甚至植物狀態(tài)等神經(jīng)系統(tǒng)功能異常，對(duì)患者及社會(huì)帶來(lái)巨大負(fù)擔(dān)[9]。心肺復(fù)蘇后患者腦保護(hù)的重要性逐漸被重視。心臟驟停后心肺復(fù)蘇所引起的腦損傷與腦缺血再灌注有關(guān)[10]。心臟驟停后，腦血流中斷導(dǎo)致腦組織出現(xiàn)缺血缺氧癥狀并產(chǎn)生大量氧自由基，心肺復(fù)蘇血流再灌注后，氧自由基會(huì)引起嚴(yán)重腦損傷[11]。雖然隨著技術(shù)的提高，心肺復(fù)蘇成功率逐漸提升，但針對(duì)心肺復(fù)蘇后腦損傷的治療相關(guān)藥物較少[12]。有研究指出DMSO有腦保護(hù)作用，對(duì)心肺復(fù)蘇后腦損傷有一定的防治效果，但是效果仍難以滿意[13]。故而本研究選用DMSO作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

中醫(yī)認(rèn)為患者因各種原因引起心跳和呼吸驟停，則為病邪直入腦府，圍困腦神，腦絡(luò)瘀滯，腦髓失養(yǎng)，腦神萎頓，進(jìn)而腦髓腦絡(luò)失其主宰，導(dǎo)致功能障礙。治療要以虛實(shí)辨證為核心，以開(kāi)閉醒神為方法，補(bǔ)虛益氣，回陽(yáng)固脫[14]。

小續(xù)命湯成分有防風(fēng)、麻黃、桂枝、人參、附子、杏仁、生姜、川芎、芍藥、黃芩、防己、甘草。防風(fēng)可祛風(fēng)解表，止痙；麻黃可發(fā)汗解表，宣肺平喘。桂枝可調(diào)和營(yíng)衛(wèi)，溫經(jīng)活血、溫陽(yáng)化氣、平?jīng)_降逆；人參可大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫、安神益智。附子可回陽(yáng)救逆，補(bǔ)火助陽(yáng)；杏仁可止降氣止咳，平喘潤(rùn)肺；生姜可活血驅(qū)寒，回陽(yáng)通脈；川芎可活血通脈，行氣止痛；芍藥可養(yǎng)血和營(yíng)，緩急止痛；黃芩可清熱解毒，瀉火燥濕；防己可祛風(fēng)止痛，利水消腫；甘草可清熱解毒，緩急止痛；諸藥聯(lián)用可溫經(jīng)通陽(yáng)，扶正祛風(fēng)[15]。

有研究表明，小續(xù)命湯可通過(guò)保護(hù)線粒體完整性，抑制神經(jīng)元凋亡對(duì)腦缺血再灌注大腦神經(jīng)元起保護(hù)作用[16]。其中人參皂苷、桂枝、甘草酸二銨等中藥成分均可對(duì)腦缺血損傷有治療效果[17-19]。據(jù)報(bào)道小續(xù)命湯可顯著降低大鼠缺血腦組織中MDA含量和提高SOD活性，減輕缺血腦組織氧化應(yīng)激損傷[20]。本研究結(jié)果顯示，心肺復(fù)蘇大鼠腦組織MDA濃度升高而SOD含量減少，經(jīng)過(guò)小續(xù)命湯治療后，MDA濃度降低而SOD升高，與上述報(bào)道結(jié)果一致，表明小續(xù)命湯可減輕心肺復(fù)蘇大鼠腦氧化應(yīng)激損傷。此外神經(jīng)功能評(píng)分和HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，小續(xù)命湯還可提高大鼠神經(jīng)功能，減輕大鼠腦病理?yè)p傷。本研究中小續(xù)命湯低劑量組的腦保護(hù)作用與DMSO組相近，而小續(xù)命湯中劑量組、高劑量組的腦保護(hù)作用均優(yōu)于DMSO組，表明DMSO和小續(xù)命湯均對(duì)心肺復(fù)蘇大鼠有腦保護(hù)作用，但小續(xù)命湯的作用呈劑量依賴性，且中、高劑量的小續(xù)命湯作用優(yōu)于DMSO，提示小續(xù)命湯在心肺復(fù)蘇患者中可能具有理想的腦保護(hù)作用，有望在臨床中推廣應(yīng)用。

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致腦缺血損傷的重要因素，Keap1-Nrf2/HO-1信號(hào)通路是機(jī)體內(nèi)源性抗氧化途徑，發(fā)揮重要抗氧化應(yīng)激作用[21-22]。Keap1是一種阻遏蛋白，可負(fù)性調(diào)節(jié)Nrf2。在正常生理狀態(tài)下，Keap1和Nrf2結(jié)合，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生的大量活性氧可導(dǎo)致Keap1空間結(jié)構(gòu)改變，進(jìn)而與Nrf2分離[23]。游離的Nrf2可調(diào)控下游HO-1表達(dá)，HO-1是一種抗氧化蛋白酶，與腦缺血損傷密切相關(guān)[24]。有研究表明，敲除HO-1基因的小鼠在腦缺血時(shí)受到的腦損傷較野生型小鼠比更嚴(yán)重[25]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，心肺復(fù)蘇模型組大鼠腦組織中Keap1 mRNA和蛋白水平與對(duì)照組比較均降低，Nrf2和OH-1mRNA和蛋白水平與對(duì)照組比較均出現(xiàn)升高，推測(cè)可能與機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)激活自身抗氧化保護(hù)機(jī)制，減少Keap1對(duì)Nrf2的抑制，進(jìn)而刺激Nrf2和OH-1的表達(dá)，但這種內(nèi)源性上調(diào)HO-1不能對(duì)抗腦氧化應(yīng)激反應(yīng)引起的腦損傷。而使用小續(xù)命湯治療后，Keap1表達(dá)顯著低于模型小鼠，Nrf2和OH-1表達(dá)顯著高于模型小鼠，由此推測(cè)，小續(xù)命湯可通過(guò)激活Keap1-Nrf2/HO-1信號(hào)通路抗氧化作用，減輕心肺復(fù)蘇后大鼠腦損傷。

綜上所述，小續(xù)命湯可改善心肺復(fù)蘇后大鼠神經(jīng)功能，減輕大鼠腦損傷，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，推測(cè)其機(jī)制可能與激活Keap1-Nrf2/HO-1信號(hào)通路，下調(diào)Keap1 mRNA和蛋白表達(dá)水平，上調(diào)Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平有關(guān)。本研究?jī)H從氧化應(yīng)激的角度分析小續(xù)命湯的藥理作用，小續(xù)命湯是否影響其他信號(hào)通路本研究尚未涉及，因此有待進(jìn)一步研究。