贛南地區(qū)耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌血清分型、耐藥機制及毒力的研究

戴 玥，萬臘根，賴蔚文，劉 洋

(1.南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330000；2.贛州市于都縣人民醫(yī)院，江西 贛州 342300)

克雷伯菌是一種革蘭陰性細菌，可引起多種類型的感染，包括肺炎，血液感染，傷口或手術(shù)部位感染和腦膜炎[1]。肺炎克雷伯菌可通過呼吸道和血液進行傳播，傳播速度快，致死率高。為深入探討贛南地區(qū)耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌血清分型、耐藥機制及毒力，本研究于2016年1月～2018年12月選取贛南地區(qū)六家醫(yī)院的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清樣品80例，對樣品進行PCR檢測，確定血清莢膜分型，確定毒力基因，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集2016年1月～2018年12月贛南地區(qū)六家醫(yī)院的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清80例，采用PCR法確定血清莢膜分型，進而進行多位點序列分析和脈沖場凝膠電泳分析，采用PCR法確定毒力基因[2-3]。本次研究經(jīng)過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2方法：①肺炎克雷伯菌血清分型研究：通過PCR檢測CR-KP菌株的莢膜血清分型，總結(jié)血清分型，確定哪種分型出現(xiàn)最多；②通過病例的回顧性分析，探究感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征；③進行血清抗性實驗和抗中性粒細胞吞噬實驗，研究贛南地區(qū)耐藥菌株之間是否存在耐藥基因的傳播[4]；④通過多位點序列分析探究贛南地區(qū)耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力因子的基因序列。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS17.0軟件，毒力分數(shù)呈偏態(tài)分布，采用秩和檢驗，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1贛南地區(qū)耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌血清分型：贛南地區(qū)耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌最常見的血清分型最廣泛的是K1型，16例占20%；K2 12例，約占15%；K57 11例，約占13.75%；K54 8例，約占10%；K3 5例，約占6.25%；K20 3例，約占3.75%；其他25例，約占31.25%。

2.2感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征：高黏液菌株鑒定 80株肺炎克雷伯菌拉絲試驗結(jié)果顯示僅 1 株陰性，陽性率達 98.75%，見表1。

2.3血清抗性實驗結(jié)果：80株分離菌株涂板法中,血清敏感的菌株為34株，中等敏感的菌株為28株,血清抗性菌株為16株。

2.4抗中性粒細胞吞噬實驗結(jié)果：0 min、10 min、15 min、20 min吞噬指數(shù)分別為0/1/2/2，尤其可見耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對中性粒細胞抗性較強。

2.5贛南地區(qū)耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力因子：K1血清型以rmpA、wcaG、aerobactin、kfu 和allS 5種毒力基因同時攜帶為主； 在K2、K20和K57血清型中rmpA + aerobactin是主要的毒力基因；K5型菌株主要攜帶rmpA+aerobactin + kfu；株K54型菌株主要攜帶rmpA + aerobactin+wcaG，詳見表2。

表1 感染碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的患者患病體征

表2 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力基因

3 討論

肺炎克雷伯菌是通常引起醫(yī)院感染的高致病性病原體，耐碳青霉烯KP難以用普通抗生素殺死，治療過程較長，死亡率高，其主要毒力因子與其血清莢膜相關(guān)，研究表明血清型K1和K2致病率最高，K7和K21致病率最低[2]。rmpA、camG是肺炎克雷伯菌最重要的毒力因子，其在抗吞噬作用，抑制早期炎性反應(yīng)，抗微生物肽抗性和抑制DC細胞成熟中起重要作用。 另外的肺炎克雷伯氏菌毒力因子可能與菌毛，外膜蛋白以及鐵元素獲取有關(guān)。為深入探討贛南地區(qū)肺炎克雷伯菌分型及毒力情況展開本次研究。結(jié)果表明，贛南地區(qū)耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌最常見的血清分型最廣泛的是K1型，約占20%，高黏液菌株鑒定 80株肺炎克雷伯菌拉絲試驗結(jié)果顯示僅 1 株陰性，陽性率達 98.75%，80株分離菌株涂板法中,血清敏感的菌株為34株，中等敏感的菌株為28株,血清抗性菌株為16株，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對中性粒細胞抗性較強，K1血清型以rmpA、wca G、aerobactin、kfu 和all S 5種毒力基因同時攜帶為主； 在K2、K20和K57血清型中rmp A + aerobactin是主要的毒力基因；K5型菌株主要攜帶rmp A+aerobactin + kfu；株K54型菌株主要攜帶rmpA + aerobactin+wca G。

綜上所述，贛南地區(qū)出現(xiàn)最高為K1型，耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌之間已經(jīng)存在一定的毒力基因遺傳現(xiàn)象。