石蠟切片技術(shù)在開放性實驗教學中的應用

何琳莉 黃一凡

摘 要：在組織學和病理學研究中，石蠟切片技術(shù)是一種常用的實驗技術(shù)。為了實現(xiàn)對學生實驗動手能力的更好培養(yǎng)，更好地幫助其將所學理論知識與實踐緊密結(jié)合起來，文章試圖就石蠟切片技術(shù)在開放性實驗教學中的應用展開深入的研究探討，幫助學生將該技術(shù)的實驗原理、方法牢固掌握，從而為后續(xù)免疫組化開放性實驗的開展奠定堅實的基礎。

關(guān)鍵詞：病理學 石蠟切片技術(shù) 開放性實驗教學

在各種切片制作方法中，石蠟切片技術(shù)是一種應用最為普遍的技術(shù)。該技術(shù)不僅用于病理學、生命科學領域?qū)毎M織形態(tài)變化的觀察，在其他諸多學科領域中也獲得了較為廣泛的應用，在臨床手術(shù)中是一種不可或缺的重要診斷方法[1]。將石蠟切片技術(shù)應用到開放性實驗教學中來，幫助學生將切片的制作過程順利掌握，學會判斷切片質(zhì)量好壞。同時學生通過動手制作切片以及閱片，有助于將學生的積極性有效調(diào)動起來，以達到培養(yǎng)學生動手實踐能力的目的。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑和器材

試劑：10%甲醛水溶液、75%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠以及石蠟等。

材料：蓋玻片、載玻片、正常小白鼠腎組織標本。

器材：水浴箱、包埋機、烤箱以及萊卡輪轉(zhuǎn)切片機等。

1.2 實驗過程

取材固定、清晰脫水、透明浸蠟、包埋切片、染色封片等是石蠟切片技術(shù)的主要步驟[2]。第一步，教師將石蠟切片技術(shù)的原理、石蠟切片的詳細制作過程對學生進行一個細致的介紹，讓學生對該技術(shù)有一個大概的認識和了解;第二步，教師借助多媒體播放教學視頻讓學生觀看石蠟切片技術(shù)的整個操作步驟以及學習以怎樣的標準來對切片的質(zhì)量加以判斷;第三步，分小組在教師的安排下前往醫(yī)院病理科實地觀摩怎樣制作切片;第四步，在教師指導下于實驗室親自動手運用石蠟切片技術(shù)制作石蠟切片。

1.3 實驗步驟

（1）取材固定：取病理科闌尾手術(shù)標本作為實驗材料，組織厚度大概為0.2～0.3cm。然后使用10%甲醛對闌尾組織加以固定。固定的目的在于使實驗材料保持固有的結(jié)構(gòu)和形態(tài)[3]。

（2）清洗脫水：具體步驟是80%乙醇2h→95%乙醇Ⅰ2h→95%乙醇Ⅱ2h→無水乙醇Ⅰ30min→無水乙醇Ⅱ30min。這一步至關(guān)重要，主要目的是為了使組織材料的急劇收縮得以減少，應按照由低到高濃度遞增這樣的順序進行。

（4）透明浸蠟：二甲苯透明0.5h→石蠟Ⅰ1h→石蠟Ⅱ1h→石蠟Ⅲ1h→浸蠟（設置溫度為58℃）。

（5）包埋切片：學生在教師的指導下疊包埋用的材料，然后進行包埋。包埋的時候需要注意順時針對盛有石蠟和組織材料的小瓶輕輕搖晃，搖晃之后倒入事先疊好的包埋材料中，然后把包埋材料緩緩浸入事先準備好的冷水之中，不能完全浸入，直到表層石蠟凝固為止，隨后包埋好的蠟塊再使用刀片加以修整。

（6）染色封片：具體步驟是二甲苯Ⅰ0.25h→二甲苯Ⅱ0.25h→無水乙醇Ⅰ2min→無水乙醇Ⅱ2min→95%乙醇Ⅰ1min→80%乙醇Ⅰ1min→自來水沖洗1min→蘇木素、蒸餾水洗0.25h→蒸餾水洗→1%鹽酸乙醇加以分化→自來水沖洗→1%稀氨水予以返藍→流動自來水沖洗→蒸餾水洗→0.5%伊紅2min→自來水沖洗→80%乙醇20s→95%乙醇30s→無水乙醇Ⅰ1min→無水乙醇Ⅱ1min→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ3min→最后使用中性樹膠予以封片。染色的主要目的在于讓細胞組織內(nèi)不同結(jié)構(gòu)能夠呈現(xiàn)出不一樣的顏色，便于學生觀察。

2 結(jié)果

本次開放性實驗教學中，石蠟切片技術(shù)的教學過程開展順利，達到了預期的教學效果。相較于以前只可以從書本上看到動物組織的顯微結(jié)構(gòu)，此時通過教師的講授、觀看教學視頻、實地參觀最后再在教師的引導下自己動手操作。由于是學生自己動手制作出來的切片，所以使學生對該技術(shù)產(chǎn)生了更加深刻的印象，極大地提升了學生對開放性實驗的參加興趣。石蠟切片技術(shù)操作簡便，同時有著較強的實用性，將其應用到開放性實驗教學中來，有著尤為深遠的意義。

3 討論

在傳統(tǒng)的實驗教學中，大多是學生肉眼觀察已經(jīng)制作好的大體標本或者是在顯微鏡下觀察已經(jīng)事先染色好的組織切片，這樣的教學模式自然很容易使得學生認為太過枯燥無味，未能將實驗教學注重培養(yǎng)學生實驗操作能力的特點很好地體現(xiàn)出來。而將石蠟切片技術(shù)應用到開放性實驗教學中來，讓學生能夠親自動手參與到組織制片以及HE染色過程中來，無疑更容易將學生的學習興趣很好地調(diào)動起來。同時，在自己動手實驗這個過程中，也有利于學生對照所學知識來判斷切片的質(zhì)量，了解每一張切片背后都有一個復雜的制作過程，使學生更加真切地認識到組織切片的來之不易，以及其在臨床診斷中的重要性，畢竟直接關(guān)乎到病人病情的診斷。

項目名稱：2017年川北醫(yī)學院開放性實驗項目;項目編號：川北醫(yī)教[2017]7號：10。

參考文獻：

[1] 劉浩，董文文，鐘勝華，等.快速石蠟切片技術(shù)在病理檢驗中的臨床價值[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2019，29（12）：88-89.

[2] 王秀文.石蠟切片法中染色技術(shù)的改良[J].植物研究，2015，35（01）：158-160.

[3] 金銀姬，陳立本，劉曉慶，等.快速石蠟切片技術(shù)在病理檢驗中的應用[J].動物醫(yī)學進展，2012，33（12）：211-213.

川北醫(yī)學院病理教研室（川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科） （四川省南充市 637000）