氣相色譜法測(cè)定乳酸左氧氟沙星中三種有機(jī)溶劑的殘留量

王杰，劉緒平，段和祥，鄢雷娜，肖欽欽，陳希

江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

藥物中殘留的有機(jī)溶劑不僅沒有療效，還可能增加藥物的毒副作用，影響藥物的穩(wěn)定性，為了保護(hù)患者免受藥物中殘留有機(jī)溶劑的傷害［1］，人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）規(guī)定，必須對(duì)藥物中的殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，以保障用藥安全［2］。左氧氟沙星是新一代喹諾酮類合成抗菌藥，適用于敏感菌所致的呼吸、消化、泌尿、生殖系統(tǒng)、皮膚軟組織及外科、耳鼻喉科、眼科、口腔科的各種急、慢性細(xì)菌感染［3］。根據(jù)原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的工藝資料，獲知其工藝過程中使用甲醇、乙醇、三氯甲烷，參考《中國藥典》2015 年版四部通則0861“殘留溶劑測(cè)定法”［4］，采用氣相色譜頂空進(jìn)樣程序升溫法同時(shí)測(cè)定樣品中三種有機(jī)溶劑的殘留量，并進(jìn)行了方法學(xué)考察［5］。

1 儀器與試藥

Agilent 7890B 型氣相色譜儀［氫火焰離子化（FID）檢測(cè)器，7697A 頂空進(jìn)樣器］；MS205DU 型電子天平（美國Mettler 公司）；甲醇、乙醇、三氯甲烷、二甲基亞砜均為色譜純（美國 Sigma-Aldrich 公司）。

乳酸左氧氟沙星原料（廠家A 批號(hào)：018C225- 190901；廠家B 批號(hào)：DK24-1806171-Ⅵ；廠家C批號(hào)：2018C225-190901）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-WAX（30 m×0.53 mm×1.0 μm）石英毛細(xì)管柱；柱溫：初始溫度60 ℃，保持4 min，以20 ℃/min 升溫至200 ℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；FID 檢測(cè)器溫度：240 ℃；載氣：氮?dú)猓∟2）；恒流流速：3.0 mL/min；分流比3∶1；頂空瓶平衡溫度85 ℃，平衡時(shí)間30 min，進(jìn)樣量1 mL。

2.2 溶液配制

2.2.1 空白溶液精密量取0.1%二甲基亞砜5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，作為空白溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液精密稱取三氯甲烷61.85 mg，置10 mL 量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為三氯甲烷儲(chǔ)備液；精密稱取甲醇306.1 mg、乙醇500.4 mg，置10 mL 量瓶中，精密加入三氯甲烷儲(chǔ)備液1 mL，加水定容至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置100 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液精密稱取乳酸左氧氟沙星原料藥（批號(hào)：018C225-190901）約0.5 g，置20 mL 頂空瓶中，精密加0.1%二甲基亞砜5 mL，搖勻，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖。結(jié)果空白溶劑無干擾，供試品中無雜峰影響測(cè)定：甲醇、乙醇、三氯甲烷在該色譜條件下分離度好，分離效能較高。詳見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性圖譜

2.4 線性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，在所示各線性范圍內(nèi)，甲醇、乙醇和三氯甲烷的線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 線性回歸結(jié)果表

2.5 檢測(cè)限與定量限

取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，以水為溶劑逐步稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖，以信噪比3∶1 確定檢測(cè)限，以信噪比10∶1 確定定量限。得甲醇、乙醇和三氯甲烷的定量限分別為1.43、0.62和0.077 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.43、0.19 和0.023 μg/mL。均遠(yuǎn)小于ICH Q3C 最大限度的30%。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，共6 份，分別置20 mL 頂空瓶中，密封，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖。計(jì)算測(cè)得峰面積，考察精密度。結(jié)果甲醇、乙醇、三氯甲烷的RSD 分別為2.7%、1.6%、2.4%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取乳酸左氧氟沙星約0.5 g，共6 份，分別置20 mL 頂空瓶中中，精密加0.1%二甲基亞砜5 mL，搖勻，密封，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記色譜圖，甲醇、乙醇、三氯甲烷均未檢出。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取混合對(duì)照儲(chǔ)備液0.8、1.0、1.2 mL，分別置100 mL 量瓶中，制成相當(dāng)于對(duì)照品溶液濃度的80%、100%、120% 的溶液。精密稱取乳酸左氧氟沙星約0.5 g，共9 份，置20 mL 頂空瓶中，分別精密加入80%、100%、120% 的溶液5 mL，每個(gè)濃度平行制備3 份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算回收率，平均回收率分別為100.7%、99.2%、100.6%，RSD 分別為0.5%、0.4%、0.9%，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.9 樣品測(cè)定

分別精密稱取不同廠家的乳酸左氧氟沙星約0.5 g，按“2.2.3”制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜圖，測(cè)定有機(jī)溶劑殘留量，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，三個(gè)廠家乳酸左氧氟沙星中甲醇、乙醇、三氯甲烷均未檢出。

3 討論

采用頂空進(jìn)樣法可增加有機(jī)物檢出的靈敏度和準(zhǔn)確度［6］，從而更加嚴(yán)格地控制藥物中有機(jī)溶劑的殘留量，提高藥品質(zhì)量。乳酸左氧氟沙星在水中的溶解度較好，由于三氯甲烷不溶于水，因此配制三氯甲烷對(duì)照品溶液時(shí)，第一步用DMSO 作為溶劑，后續(xù)配制以水做溶劑，從而增加三氯甲烷的溶解性。且本法中加0.1%二甲基亞砜不影響待測(cè)有機(jī)溶劑的檢測(cè)，故選以0.1%二甲基亞砜作溶劑。由于本實(shí)驗(yàn)中的待測(cè)溶劑的沸點(diǎn)均低于80 ℃，并且溶劑為0.1%二甲基亞砜，因此確定頂空瓶平衡溫度為80 ℃；對(duì)頂空瓶平衡時(shí)間進(jìn)行篩選，實(shí)驗(yàn)表明平衡30 min 后頂空瓶?jī)?nèi)可以達(dá)到氣液平衡，待測(cè)溶劑峰面積基本保持不變，因此選80 ℃下平衡30 min；三種待測(cè)溶劑以DB-WAX 為色譜柱，進(jìn)行程序升溫，分離度良好，故選用DB-WAX 為色譜柱。

藥品中有機(jī)溶劑殘留種類因生產(chǎn)工藝不同而異。參照人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)組織（ICH）［7］和我國藥典［4］規(guī)定，三氯甲烷為I 類有機(jī)溶劑，甲醇、乙醇為Ⅲ類有機(jī)溶劑，安全限度分別為0.3%和0.5%、0.006% 。從測(cè)定結(jié)果看，3 批樣品均符合2015 年版《中國藥典》四部的限度要求。