深靜脈血栓形成動(dòng)物模型現(xiàn)狀及展望

郭闐廷，張麗梅，王懸峰，石 錦，陳 曦，莫建文

（1. 贛南醫(yī)學(xué)院2018級(jí)碩士研究生；2. 贛南醫(yī)學(xué)院2017級(jí)碩士研究生；3. 贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，江西 贛州 341000）

靜脈血栓（Deep vein thrombosis，DVT）是多種因素引起的靜脈血栓性疾病，是目前臨床常見疾病并發(fā)癥之一。該病發(fā)病率高，危害性大。肺栓塞（Pulmonary embolism，PE）是DVT 的主要并發(fā)癥，是致殘和死亡的主要原因之一［1］。DVT 和PE 一起被稱為靜脈血栓栓塞（Venous thromboembolic events，VTE），是常見的心血管疾病，發(fā)病率僅次于心肌梗死和腦卒中［2］。靜脈血栓成因復(fù)雜，主要有遺傳因素、創(chuàng)傷、血液粘度增大、長(zhǎng)期固定、血管內(nèi)皮功能異常等。遺傳因素包括抗凝物質(zhì)合成障礙，如抗凝血酶、蛋白C（Protein C，PC）或蛋白S 缺乏，或凝血酶原G20210A 突變。繼發(fā)性危險(xiǎn)因素包括高齡、使用激素、創(chuàng)傷、懷孕、大手術(shù)、長(zhǎng)時(shí)間固定、癌癥和抗磷脂抗體綜合征［3］。DVT 治療主要包括抗凝治療和介入治療等。目前血栓的發(fā)生發(fā)展的具體信號(hào)傳導(dǎo)通路還不完全明確，研究血栓形成的信號(hào)傳導(dǎo)通路、標(biāo)志性的早期預(yù)警因子及預(yù)防、治療的藥物的研發(fā)都離不開動(dòng)物模型。所以如何高效合理建立靜脈血栓動(dòng)物模型有助于深入探索深靜脈血栓形成、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸的病理過程和分子機(jī)制，并有助于研究早期預(yù)警、治療方法和藥物選擇。

目前制備深靜脈血栓動(dòng)物模型的方法很多，主要是依據(jù)血流淤積、靜脈內(nèi)皮損傷和血液高凝狀態(tài)進(jìn)行制備DVT動(dòng)物模型［4］。具體選用何種動(dòng)物及制備方法需根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求和條件選擇。理想的靜脈動(dòng)物模型應(yīng)和人類發(fā)生血栓具有相似性，一般具有以下幾個(gè)方面的特點(diǎn)：（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人類的基因相似性：不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人的基因相似性不同，與人類基因越相似的意義越大。因?yàn)樯婕帮曫B(yǎng)成本和倫理問題能夠供選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限，其中嚙齒動(dòng)物最常使用。（2）動(dòng)物年齡：老年人相對(duì)于年輕人容易出現(xiàn)靜脈血栓。所以老年的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相對(duì)于幼年的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更加有意義［5］。（3）血管情況和實(shí)驗(yàn)操作的方便：人類的靜脈血栓往往發(fā)生在深靜脈，所以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血栓最好也能在深靜脈中產(chǎn)生并可以方便的進(jìn)行取材和實(shí)驗(yàn)。（4）符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的3R原則［5］。（5）可重復(fù)性。（6）經(jīng)濟(jì)性。

1 造模動(dòng)物的選擇

目前較為成熟的DVT 模型選用的動(dòng)物類型主要有以下幾種：新西蘭兔、比格犬、小型嚙齒類動(dòng)物（大鼠、小鼠）。不同的動(dòng)物由于生理結(jié)構(gòu)、生活習(xí)性、基因構(gòu)成等不同而各具特點(diǎn)。例如DVT 在人體的發(fā)展過程可以分為急性、亞急性、慢性，但在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如大鼠身上發(fā)生、發(fā)展就明顯較人類迅速［5-6］。見圖1。

圖1 靜脈血栓模型動(dòng)物選擇影響因素

1.1 小型嚙齒類動(dòng)物鼠類在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中應(yīng)用最為廣泛。在DVT 動(dòng)物模型中使用多為Wistar 大鼠、SD 大鼠、C57BL/6 小鼠等。其優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在：（1）標(biāo)準(zhǔn)“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物”的先天遺傳性狀、后天繁育條件、微生物攜帶狀況、營(yíng)養(yǎng)需求及環(huán)境因素等方面都受到全面控制，既能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、精確性、均一性、可重復(fù)和可比較性，又可保護(hù)接觸和使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人員的健康；（2）遺傳背景明確，模型性狀顯著且穩(wěn)定，質(zhì)量和規(guī)格可較隨意選擇；（3）品種多，基因多樣性豐富，容易復(fù)制出各種相似于人類不同階段、不同疾病條件下的模型［7］；（4）相應(yīng)的檢測(cè)試劑全面，且相對(duì)價(jià)格合理可接受。缺點(diǎn)：（1）個(gè)體較小，靜脈小、靜脈壁薄，在動(dòng)物造模過程中對(duì)實(shí)驗(yàn)人員操作要求高［5］；（2）管腔小，如需進(jìn)行超聲介入等研究存在一定的困難。

1.2 新西蘭兔在DVT 造模中也常使用新西蘭兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。其優(yōu)點(diǎn)是：（1）體型適中，性情溫順；（2）相對(duì)于鼠類，兔類的深靜脈血管血量充足，壓力較高，所以造模后血栓形成迅速，且容易形成充滿整個(gè)血管的血栓；（3）兔類血管管徑相對(duì)粗，方便進(jìn)行超聲、介入等研究。缺點(diǎn)：（1）兔類動(dòng)物體型相對(duì)鼠類大，飼養(yǎng)成本高；（2）屬于封閉群動(dòng)物，缺少規(guī)范的近交系；（3）由于兔類喜活動(dòng)，且早期栓子易脫落造成肺栓塞干擾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行；（4）兔類活動(dòng)能力強(qiáng)不容易用固定的方法形成栓子。

1.3 比格犬犬類動(dòng)物體型大，優(yōu)、缺點(diǎn)明顯。優(yōu)點(diǎn)；（1）體型大，血管粗，便于操作，血栓形成快速可靠［8］；（2）手術(shù)耐受性好，較少死亡，可以進(jìn)行慢性血栓形成及變化方面的研究［8］；（3）血管條件較好，可以應(yīng)用介入等方式進(jìn)行造模，較好的模擬人類血栓，且便于進(jìn)行超聲、手術(shù)、介入、溶栓等臨床治療研究［9］。缺點(diǎn)：（1）兇猛、肉食性、喜活動(dòng)，所以飼養(yǎng)成本和難度較大；（2）研究用的試劑相對(duì)較少，成本高［9］。

1.4 其他大型動(dòng)物如豬、靈長(zhǎng)類動(dòng)物等有較大的靜脈多用于研究介入技術(shù)或超聲多普勒對(duì)血栓的動(dòng)態(tài)觀察，但從種系角度看與人類不甚接近，且造價(jià)昂貴，人員占用多，術(shù)后管理困難，死亡率高等缺點(diǎn)，應(yīng)用較為局限，目前較少應(yīng)用。

2 造模血管選擇

現(xiàn)有的DVT 動(dòng)物模型在研究中使用模型動(dòng)物的靜脈廣泛，常見的有下腔靜脈、髂內(nèi)靜脈、股靜脈、頸內(nèi)靜脈、頸外靜脈等，腸系膜小靜脈或提睪小靜脈也有少量報(bào)道?，F(xiàn)有報(bào)道中下腔靜脈（Inferior vena cava，IVC）使用最為廣泛。其具有手術(shù)操作方便，給藥處理簡(jiǎn)單，造模方法較多，數(shù)據(jù)收集整理方便等優(yōu)點(diǎn)［10］。

3 DVT的造模方法

健康的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身存在抗凝機(jī)制，自發(fā)形成DVT 的概率極低，目前DVT 造模方法均通過模擬DVT 形成主要原因：靜脈壁損傷、血液高凝狀態(tài)、血液流動(dòng)緩慢。主要通過手術(shù)創(chuàng)傷、化學(xué)藥物、電解固定等方法模擬其中一種或幾種原因來實(shí)現(xiàn)。

3.1 下腔靜脈結(jié)扎法下腔靜脈結(jié)扎法原理為：通過手術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下腔靜脈阻塞造成：（1）局部血管損傷，暴露血管內(nèi)皮下組織因子；（2）局部造成低氧環(huán)境和炎癥反應(yīng)的發(fā)生，靜脈內(nèi)皮細(xì)胞變性，細(xì)胞漿內(nèi)大量空泡形成，細(xì)胞水腫呈球形等因素；（3）損傷后炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及各種細(xì)胞因子釋放［11］。常用于鼠類和兔類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。操作方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，沿腹白線切開進(jìn)入腹腔，將小腸用一塊濕紗布包裹保護(hù)后推置于動(dòng)物右側(cè)腹腔，顯露下腔靜脈及其主要屬支，于左腎靜脈下方結(jié)扎下腔靜脈，后還納腸管并關(guān)閉腹腔［10-11］。張惠明等［12］采用改良下腔靜脈結(jié)扎法（簡(jiǎn)易懸吊術(shù)）制備動(dòng)物模型，具有成活率高，造模成功率高，經(jīng)病理檢驗(yàn)符合人體靜脈血栓形成急性期的病理變化，在下腔靜脈結(jié)扎后2 h左右開始形成血栓。其適用于大部分品系鼠種，可以進(jìn)行靜脈壁與血栓之間關(guān)系的動(dòng)態(tài)研究，為預(yù)防和治療深靜脈血栓提供生物力學(xué)參數(shù)，也用于研究藥物體內(nèi)抑制血栓形成的作用及機(jī)制。

3.2 下腔靜脈狹窄法通過外力加壓下腔靜脈致血流減少，導(dǎo)致層狀血栓形成，在保證血栓形成穩(wěn)定性的同時(shí)，保持近心端通暢［10，13］。操作方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，取腹部正中切口并將小腸牽至腹外，不結(jié)扎周圍分支。用外科神經(jīng)血管鉗在15 s內(nèi)鉗夾腎靜脈以下的下腔靜脈2 次，再用1 根5-0 縫線縱向置于下腔靜脈腹面，另1根4-0絲線繞在下腔靜脈和縫線周圍，之后移除縫線，讓血液流過［13］。另外一種改進(jìn)法是：沒有外力加壓，但結(jié)扎側(cè)分支，保持后側(cè)分支開放，將1 根30 號(hào)的針頭與下腔靜脈用7-0縫線一并綁繞，再移除針頭造成血管大約90%的狹窄［14］。該方法成栓原因?yàn)檠芸s窄和內(nèi)皮損傷，且移除針管后血管部分再通，所以，BFILL 等認(rèn)為該法適用于研究深靜脈血栓啟動(dòng)機(jī)制研究和動(dòng)態(tài)分析溶栓藥物機(jī)制［15］。BRANDT 等認(rèn)為下腔靜脈屬支會(huì)影響實(shí)驗(yàn)過程中DVT 的形成，這使得血管解剖及血液流變學(xué)成為制備DVT 動(dòng)物模型中的重要因素［16］。張智輝等增加對(duì)腎靜脈段至髂靜脈分叉水平的下腔靜脈段分支結(jié)扎，明顯提高DVT 形成的概率，更符合臨床特點(diǎn)，改為縮窄下腔靜脈+結(jié)扎腎靜脈至髂靜脈的下腔靜脈各分支，聯(lián)合利用血管阻斷夾的方法，可建立穩(wěn)定的大鼠DVT 模型［17］。運(yùn)用狹窄法建立下腔靜脈血栓模型，造模結(jié)束至造模后6 h是血栓形成的起始期，造模后6～48 h是血栓形成的穩(wěn)定期，造模后3 d開始進(jìn)入血栓消退期，至21 d 血栓完全消退，下腔靜脈再通。因血管腔不完全栓塞更有利于觀察血栓形成、溶解、再通全過程，因而研究血栓溶解和再通的實(shí)驗(yàn)中常選擇該方法。

3.3 股靜脈結(jié)扎法股靜脈結(jié)扎法原理類似于下腔靜脈結(jié)扎法，但死亡率相對(duì)較低，且方便研究深靜脈血栓和肺栓塞之間聯(lián)系。操作方法是采用微血管夾阻塞股靜脈，通過阻斷一側(cè)股靜脈的血流來形成DVT，也可以于通過不同時(shí)間點(diǎn)的栓子注入另一側(cè)股靜脈導(dǎo)致肺栓塞，來研究DVT 與肺動(dòng)脈血栓和肺血管內(nèi)皮細(xì)胞激活之間的關(guān)系［18］。季穎群等［19］采用單純阻滯左股靜脈血流加注入凝血酶的方法制備DVT 動(dòng)物模型，觀察大鼠腫脹發(fā)生率和股靜脈血栓陽(yáng)性率，認(rèn)為此方式可以降低血栓自溶率，提高深靜脈血栓、肺栓塞的建模成功率。該方法擾亂了內(nèi)皮細(xì)胞的功能，產(chǎn)生各種血栓型組織因子（如炎癥因子IL-6 等）［20］。此種方法提供了研究DVT與PE之間的關(guān)聯(lián)關(guān)系的模型，且相較其他人工注入栓子形成PE的方法更加符合病理生理。

3.4 化學(xué)法（氯化鐵法）氯化鐵法通過影響血管的通透性導(dǎo)致血栓形成。文獻(xiàn)報(bào)道的操作方法是：在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，在腹部做一正中切口顯露下腔靜脈，將周圍組織與起自腎下靜脈到髂腰靜脈水平之間下腔靜脈段分離，用1 塊2 mm×4 mm 大小的濾紙?jiān)?.5%氯化鐵溶液里浸泡，制備成氯化鐵濾紙片。造模時(shí)將氯化鐵濾紙覆蓋在下腔靜脈表面2～3 min［21］。另有文獻(xiàn)報(bào)道：在頸內(nèi)靜脈或腸系膜靜脈上覆蓋經(jīng)氯化鐵溶液處理過的過濾紙也能形成微血管血栓［22］。這類化學(xué)法產(chǎn)生的模型所產(chǎn)生的血栓形成率高，但血栓較小且不能保證完全栓塞血管?；瘜W(xué)法由于應(yīng)用有毒藥物，術(shù)后動(dòng)物常死亡，無法觀察長(zhǎng)期變化。且由于藥物作用不均一，血栓形成的情況重復(fù)性相對(duì)較差，故目前應(yīng)用較少［22-23］。

3.5 電解下腔靜脈法電解法的原理是直流電作用于血管，刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)。具體操作方法是：首先麻醉動(dòng)物并顯露下腔靜脈及其屬支，結(jié)扎下腔靜脈周圍部分屬支。分別用1個(gè)針頭，連接到1個(gè)鍍銀的銅線并插入皮下組織（陰極）和尾部的下腔靜脈（陽(yáng)極），施加250 μA 的直流電15 min，引起內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)形成血栓錨，并認(rèn)為造模2 d 后是急性DVT，14 d 后是慢性DVT。CULMER 等用該法來制備DVT動(dòng)物模型來研究P選擇素對(duì)于不同年齡段的小鼠之間的不同［24］。此法建模過程中血管溫度穩(wěn)定，血流影響小，類似于臨床上的深靜脈血栓形成條件，對(duì)局部組織刺激較小，適合研究血栓形成位置局部的細(xì)胞因子等變化。

3.6 促凝物質(zhì)干預(yù)法促凝物質(zhì)干預(yù)法就是通過增加局部血液中促凝因子，促進(jìn)血栓形成。操作方法有：局部注射促凝劑或糖皮質(zhì)激素等藥物，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液高凝狀態(tài)而產(chǎn)生DVT。此法能夠減輕手術(shù)刺激模擬非手術(shù)、創(chuàng)傷等條件下出現(xiàn)深靜脈血栓。蘇暢等［25］用此法進(jìn)行DVT 動(dòng)物造模，采用自身對(duì)照研究，肌注3%戊巴比妥鈉麻醉成功后將犬仰臥固定在操作臺(tái)上，任選一側(cè)股靜脈區(qū)備皮，消毒、鋪單，結(jié)扎股靜脈的近、遠(yuǎn)端，并向腔內(nèi)注入生理鹽水5 mL稀釋的凝血酶100 U。經(jīng)彩色超聲證實(shí)深靜脈血栓的形成，并通過超聲彈性成像能有效地反映不同時(shí)期血栓的彈性硬度，可以根據(jù)血栓的彈性硬度來初步判斷血栓形成及分期［25］。筆者認(rèn)為該模型較好模擬了臨床因長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素及腫瘤等非外傷手術(shù)等因素造成的自發(fā)性深靜脈血栓。

3.7 機(jī)械損傷法血管內(nèi)皮損傷和血管、肌肉、骨骼等組織聯(lián)合損傷都容易造成患者出現(xiàn)深靜脈血栓。目前研究手術(shù)和創(chuàng)傷造成的深靜脈血栓多用創(chuàng)傷模擬法進(jìn)行造模。

3.7.1 人工造成靜脈內(nèi)皮的損傷法通過血管夾在靜脈壁外直接鉗夾造成對(duì)靜脈內(nèi)壁的損傷；或者用刮匙對(duì)靜脈內(nèi)壁造成損傷。有學(xué)者在阻斷下腔靜脈后，快速注入生理鹽水，造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，恢復(fù)血流25 min 后觀察到血栓形成；或用蚊式鉗在股靜脈不同位置分別鉗夾3 s，并用髖關(guān)節(jié)“人”字石膏固定的方法來制備DVT 動(dòng)物模型［20］。該方法常用于研究深靜脈血栓和炎癥及炎癥因子之間的關(guān)系。

3.7.2 機(jī)械擊打裝置法通過物理創(chuàng)傷可建立具有骨科臨床特點(diǎn)的創(chuàng)傷性肢體DVT 動(dòng)物模型，操作方法是用定量打擊裝置進(jìn)行擊打造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨折或損傷組織并固定模擬臨床上創(chuàng)傷—固定這一過程。具體方法是用一定能量擊打造成的骨折，行髖關(guān)節(jié)“人”字石膏固定，7 d 后用肉眼和光鏡觀察DVT 形成。張英等借助專用擊打裝置擊打髖部，并用石膏固定4 周，血栓形成率81.8%［26］。胡海瀾等采用瞬間擊打能量為5 J 能量的定量打擊裝置進(jìn)行打擊，髖部“人”字石膏固定的方式造模，其血栓發(fā)生率卻只有51.7%［27］，該方法造模成功率差異較大，但較為符合臨床實(shí)踐中創(chuàng)傷引起的深靜脈血栓形成原因。目前仍有大量學(xué)者使用該法進(jìn)行抗凝藥物機(jī)理研究和相關(guān)基因及信號(hào)傳導(dǎo)通路研究［20，28］。

3.8 基因工程動(dòng)物法

3.8.1 特定基因敲除動(dòng)物某些基因出現(xiàn)突變，造成凝血功能增強(qiáng)是形成特發(fā)性血栓形成的潛在原因之一，如V 因子或G20210A 凝血酶原突變活化蛋白C（APC resistance，APC resistance）［29-30］。有學(xué)者通過基因技術(shù)產(chǎn)生具有類似凝血因子V突變的小鼠，模型動(dòng)物有纖維蛋白沉積和血栓形成的傾向。這些基因敲除小鼠為進(jìn)一步研究血栓形成提供了一個(gè)有效工具，可用以研究血栓形成機(jī)制和相關(guān)藥物研發(fā)。

3.8.2 病毒轉(zhuǎn)染干預(yù)基因動(dòng)物模型CLEUREN等的綜述分析了不同凝血因子［如血栓調(diào)節(jié)蛋白、蛋白C（PC）、組織因子（TF）通路抑制劑］或內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體突變的小鼠在靜脈血栓形成研究中的潛在作用［31］。SAFDAR 開發(fā)了一個(gè)新動(dòng)物模型，在該模型中，使用siRNA 抑制抗凝血酶和PC 的產(chǎn)生［32］，該模型中小鼠腿部、肝臟和頭部血栓形成及纖維蛋白沉積和血液中纖維蛋白原水平下降［33］。病毒阻斷凝血因子表達(dá)常用于來研究基于遺傳的靜脈血栓形成。

4 其他血栓模型

4.1 復(fù)發(fā)性靜脈血栓形成模型發(fā)生過一次DVT發(fā)作的患者，經(jīng)治療后，仍有血栓復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)［34］。目前常用的深靜脈血栓動(dòng)物模型都集中在研究原發(fā)性血栓形成這個(gè)方向，關(guān)于DVT 復(fù)發(fā)機(jī)制的信息非常有限。2014 年，HARA 等［34］提出了一種復(fù)發(fā)性靜脈血栓的造模方法。通過結(jié)扎頸靜脈2天誘發(fā)原發(fā)性血栓形成，12 天內(nèi)再次結(jié)扎血管。這一過程導(dǎo)致了兩個(gè)明顯不同的血栓形成，一個(gè)是舊血栓，小而有血管再通現(xiàn)象，另一個(gè)是新血栓，大而閉塞，富含纖維蛋白和中性粒細(xì)胞。該方法造模后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的靜脈壁出現(xiàn)類似于人類DVT 復(fù)發(fā)的典型征象。該模型反映了深靜脈血栓復(fù)發(fā)患者的實(shí)際情況。另有研究采用兩種模型聯(lián)合模擬復(fù)發(fā)性DVT［35］，首次由電解下腔靜脈誘導(dǎo)血栓形成，3 周后通過EIM或IVC結(jié)扎再次引發(fā)血栓形成。該模型常用于研究血栓形成后膠原蛋白、金屬蛋白酶的變化。目前這兩個(gè)模型是研究復(fù)發(fā)性深靜脈血栓形成的主要手段。

4.2 肺栓塞模型肺栓塞是深靜脈血栓最危險(xiǎn)的并發(fā)癥，一旦發(fā)生死亡率極高［1］。所以在臨床上極為重視。目前學(xué)界認(rèn)為肺栓塞是由于深靜脈血栓脫落并隨著血流運(yùn)動(dòng)到肺動(dòng)脈造成肺動(dòng)脈或其分支急性栓塞引起肺功能和右心功能障礙的臨床綜合征［36］。目前制作肺栓塞動(dòng)物模型的方法主要有兩種：（1）通過誘發(fā)形成深靜脈血栓，再促使其進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)造成栓塞。在該模型中，由氯化鐵在股靜脈中誘發(fā)血栓，并評(píng)估肺栓子的數(shù)量［37］。有研究認(rèn)為肺栓塞和初始深靜脈血栓的大小相關(guān)，通過進(jìn)行研究栓子數(shù)目和栓子平均截面積來研究栓塞的程度［38］。（2）通過靜脈注射栓子如自體取血制成血栓或注射外源性栓子如明膠海綿等，部分研究者會(huì)向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物體內(nèi)注射促凝物質(zhì)如氨甲環(huán)酸等［39］。促進(jìn)血栓形成。常見的判斷造模有效的方法為通過觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否出現(xiàn)呼吸困難來初步判斷。也有通過測(cè)定肺動(dòng)脈契壓［39］和處死后病理切片來進(jìn)行研究。該模型可以用于不同的動(dòng)物且成功率較高，也用于超聲等影像學(xué)［40］和血清學(xué)研究［41］。

5 展 望

目前建立深靜脈血栓模型，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和建模方法眾多，各有利弊，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)室條件進(jìn)行選擇。嚙齒類動(dòng)物成本低、品系多、研究透徹，但體型較小操作難度大，不適用于超聲、介入等對(duì)血管內(nèi)徑有一定要求的實(shí)驗(yàn)。新西蘭兔、比格犬、小香豬等大中型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)手術(shù)耐受好、血管管徑大、可耐受較復(fù)雜手術(shù)，可用于超聲、介入等研究，但飼養(yǎng)成本高，管理困難。其他如恒河猴、狒狒等靈長(zhǎng)類動(dòng)物造模最符合人類疾病情況，但飼養(yǎng)成本巨大，倫理要求高。造模方法：下腔靜脈結(jié)扎等方法成功率高，對(duì)血管影響大，并不能完全模擬臨床實(shí)踐中自然形成的深靜脈血栓；促凝藥物法可模擬高凝狀態(tài)形成血栓；機(jī)械打擊法最符合骨科創(chuàng)傷后血栓形成的臨床過程，但是目前造模成功概率不穩(wěn)定；化學(xué)法本身有毒性，且造模栓子較小，應(yīng)用少?；蚬こ虅?dòng)物常見為嚙齒類動(dòng)物，作用靶點(diǎn)準(zhǔn)確，說服性較好。近年來醫(yī)學(xué)科學(xué)迅速發(fā)展，為了更好地研究和治療靜脈血栓性疾病，動(dòng)物模型的應(yīng)用越來越廣泛，新的技術(shù)和方法層出不窮。但最基本的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和造模方法原則依然是符合3R原則，且對(duì)實(shí)驗(yàn)最為有利。