環(huán)狀RNA與具核梭桿菌在結(jié)直腸癌進程中的研究進展

李君麗， 周鵬志

1.廣州醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 511400；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院消化內(nèi)科

結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)起源于結(jié)直腸黏膜上皮，是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，每年可導(dǎo)致約90萬人死亡，成為當(dāng)今世界上第二大致命癌癥，其致死率達9.2%，僅次于肺癌的18.4%[1]。因各個國家的癌癥譜不同、早期癌癥檢出率較低及我國某些地域的治療策略不達標(biāo)，我國有著更高的癌癥致死率，在2018年，我國CRC的發(fā)病率約12.2%，致死率達8.0%，且兩者均呈上升趨勢。此外，因人口增長和老齡化、生活方式西方化，未來幾年內(nèi)我國癌癥負(fù)擔(dān)總體上仍呈持續(xù)上升的趨勢[2]。目前認(rèn)為CRC與遺傳、環(huán)境(如飲食)等多種致病因素有關(guān)，是基因-環(huán)境共同作用的結(jié)果，但其確切的病因與發(fā)病機制仍有待進一步探明。環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)是一類普遍存在于真核細(xì)胞中參與基因表達調(diào)控的閉合環(huán)狀非編碼RNA，比線性mRNA更穩(wěn)定，其最主要作用是充當(dāng)競爭性內(nèi)源性RNA(ceRNA)/miRNA的海綿[3]。不同的circRNA可發(fā)揮致癌或抑癌作用，參與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)過程，與肺癌、膀胱癌、胃癌、肝癌、CRC等多種癌癥密切相關(guān)[3]。而具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum，F(xiàn)n)為口腔中的共生菌，可在CRC組織中富集，促進腸道腫瘤的形成[4]。近年來，miR-21被發(fā)現(xiàn)在CRC組織中異常表達，參與調(diào)控不同的靶基因和腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等過程，與CRC的進程顯著相關(guān)，被公認(rèn)為是CRC中重要的致癌基因[5]。深入研究發(fā)現(xiàn)，miR-21是Fn的下游靶點，F(xiàn)n通過介導(dǎo)TLR4/MYD88信號通路持續(xù)激活NF-κB，后者與miR-21的啟動子結(jié)合并增加其轉(zhuǎn)錄水平，進而促進小鼠CRC細(xì)胞的增殖和腫瘤的進展[6]。若CRC患者體內(nèi)同時富集Fn和高表達miR-21，其預(yù)后不良的高風(fēng)險也增加[6]。近期有研究試圖以circRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)為導(dǎo)向探討關(guān)于CRC診治的新手段[7]。Yuan等[8]通過體內(nèi)外試驗發(fā)現(xiàn)，circ_0026344可充當(dāng)miR-21的海綿來抑制CRC細(xì)胞的增殖和侵襲，同時促進細(xì)胞的凋亡。由此可見，對于富集Fn且高表達miR-21的CRC患者，circRNA可能是一種未來可期的治療靶點?，F(xiàn)對circRNA、Fn在CRC中的診治和預(yù)后價值作一概述，以期對CRC的臨床診治提供新的思路。

1 CRC概述

在全球常見癌癥中，CRC位居女性中的第二位、男性中的第三位，而男性的發(fā)病率和致死率均比女性高約25%[1, 9]。除了遺傳因素、男性和人口老齡化外，肥胖、攝入高脂肪低纖維的膳食、缺乏體育鍛煉、吸煙、飲酒、腸道菌群紊亂等不利因素也會增加罹患CRC的風(fēng)險[9-10]。腫瘤形成的兩個主要特征是血管生成和具有無限復(fù)制潛能的干細(xì)胞特性。目前研究認(rèn)為大多數(shù)CRC的癌細(xì)胞來源于干細(xì)胞或干細(xì)胞樣細(xì)胞[11]。從正常的腸黏膜上皮細(xì)胞逐漸發(fā)展為癌細(xì)胞，CRC的進程囊括了表觀遺傳變異和多種基因突變，如微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)、CpG島甲基化表型(CIMP)、18q雜合子丟失和BRAF、RAS等基因突變，其生物學(xué)過程復(fù)雜[12]。大多數(shù)CRC是由息肉引起，始于異常的隱窩，逐漸演變成癌前病變(如腺瘤、鋸齒狀息肉等)，最終發(fā)展為CRC，這一過程需要10～15年[9]。

早期CRC往往缺乏特異的臨床表現(xiàn)和可觀的生物標(biāo)志物，延誤了病情的發(fā)現(xiàn)，以致當(dāng)臨床確診時大多數(shù)患者已處于中晚期，大大降低了其生存期限和生存質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計，癌灶局部擴散的CRC患者的5年生存率為80%～90%；而當(dāng)癌灶發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移后，晚期CRC患者的生存期限明顯下降，其5年生存率僅有12%[13]。被多個國家的權(quán)威指南或共識所推薦的以免疫化學(xué)法糞便隱血試驗(FIT)和結(jié)腸鏡檢查為基礎(chǔ)的兩步法CRC篩查方案逐漸改變了這一現(xiàn)狀。開展CRC篩查可發(fā)現(xiàn)癌前病變和早期的CRC，將CRC扼殺在萌芽中，顯著降低了CRC的發(fā)病率和致死率[14-15]。但CRC逐漸趨于年輕化，Kasi等[16]研究發(fā)現(xiàn)，50歲以下的CRC患者數(shù)呈上升趨勢，其中以直腸癌和左半結(jié)腸癌尤為常見。隨著當(dāng)今臨床醫(yī)療技術(shù)水平的逐步發(fā)展，針對CRC的治療策略也出現(xiàn)了多元化和個體化，包括內(nèi)鏡局部切除和手術(shù)病灶切除，術(shù)前低分期放療和全身治療，局部和轉(zhuǎn)移性疾病的廣泛手術(shù)，轉(zhuǎn)移的局部消融治療，以及姑息性化療、靶向治療、免疫治療等[9, 13]。其中，手術(shù)切除仍是CRC治療的基石，而手術(shù)切除聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)的輔助化療方案(如FOLFOX)是最常見的CRC治療選擇，并可顯著延長患者無病生存期(DFS)和總生存期(OS)[9, 13, 17]。盡管如此，化療方案僅對50%的患者產(chǎn)生治療效果，使CRC最終發(fā)展為復(fù)發(fā)性和難治性疾病，從而導(dǎo)致其死亡率高[18]。因此，CRC仍是一個形勢嚴(yán)峻的健康問題，診斷與治療的時機是決定其預(yù)后的關(guān)鍵因素。早期診斷并及時、有效地采取合理的治療方案，對延長患者生命期限、提高患者生存質(zhì)量、降低國家癌癥負(fù)擔(dān)等具有重要的意義。目前亟待一種更有效的手段對CRC進行早期篩查和治療。

2 circRNA與CRC

circRNA被發(fā)現(xiàn)在癌癥的進程中起著不可或缺的作用，是繼lncRNA、miRNA等之后新的腫瘤熱點分子。與相應(yīng)的癌旁組織有所不同，circRNA被發(fā)現(xiàn)在CRC組織中異常表達[8]。circRNA參與調(diào)控CRC的多個生物學(xué)過程，干預(yù)CRC的預(yù)后，有望成為CRC治療的新靶點及其診治、預(yù)后等方面的良好生物標(biāo)志物，但相關(guān)機制有待進一步探明。

2.1 circRNA簡述circRNA最早在20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)于RNA病毒中。因缺乏可靠的檢測手段，circRNA曾被一度認(rèn)為是RNA異常剪接表達的副產(chǎn)物，其生物學(xué)功能被忽視并沉寂于科研圈中相當(dāng)長一段時間。近十年來，隨著高通量測序和生物信息學(xué)分析等技術(shù)和方法的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)，哺育動物細(xì)胞中存在內(nèi)源性非編碼的circRNA，其特點是豐富、穩(wěn)定、保守、特異[3]。與有5′-帽端結(jié)構(gòu)和3′-尾端結(jié)構(gòu)的線性RNA不同，circRNA通常是通過前體mRNA(pre-mRNA)的反剪接機制或外顯子跳躍性產(chǎn)生，以共價鍵形式構(gòu)成一首尾相連的獨特閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，既無5′-3′端的極性，也無多聚腺苷酸尾部，因而不易被RNA核酸外切酶或RNase R降解[19]。根據(jù)circRNA的組成，目前將其分為四類：ecircRNA (exonic circRNA，為轉(zhuǎn)錄本的反向剪切形成)、elcircRNA (exon-intron circRNA，為內(nèi)含子保留的轉(zhuǎn)錄本反向剪切形成)、ciRNA (circular intronic RNA，套索內(nèi)含子從pre-mRNA切除后進一步形成)和tricRNA (tRNA intronic circRNA，為pre-tRNA剪切后形成)[19-21]。circRNA具有作為ceRNA/miRNA的海綿、調(diào)節(jié)選擇性剪接或轉(zhuǎn)錄或翻譯、調(diào)控親代基因的表達、充當(dāng)RNA結(jié)合蛋白(RBP)的海綿作用或蛋白質(zhì)支架、被翻譯成肽或蛋白(由于分析和驗證方法的局限性，目前報道較少)、產(chǎn)生一些偽基因等多種生物學(xué)功能，為人類基因組的“暗物質(zhì)”提供了新的見解[22]。目前大多數(shù)研究著重于探索circRNA的生物發(fā)生的相關(guān)機制，對細(xì)胞最終如何降解circRNA的機制尚不清楚，相關(guān)研究實驗也寥寥無幾，推測細(xì)胞中可能存在一種或多種區(qū)別于RNA核酸外切酶和RNase R的核糖核酸酶參與circRNA的降解過程。最近，Liu等[23]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)一種分泌的circRNA內(nèi)切酶——RNase L，可以對circRNA產(chǎn)生降解作用。深入研究發(fā)現(xiàn)，circRNA主要存在于外泌體和血漿中，可作用于細(xì)胞的多個生物學(xué)過程，如分化、增殖、侵襲、遷移、凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、癌變等，因而參與人體多種疾病的發(fā)生和進展，如神經(jīng)退行性疾病等，尤其是在腫瘤中起著關(guān)鍵性作用，可能是致癌因子，也可能是抑癌因子，但其相關(guān)作用機制尚未完全明確[24-27]。

2.2 與CRC有關(guān)的circRNA多種circRNA可在CRC組織中異常表達，參與癌細(xì)胞的發(fā)生和進展過程，并影響其對化療藥物的敏感性，從而改變CRC患者的生存情況。本文總結(jié)了目前研究報道的與CRC相關(guān)的circRNA，發(fā)現(xiàn)大部分circRNA主要通過ceRNA/miRNA的海綿參與CRC的進程。進一步探明circRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的相互作用，有望為CRC的靶向治療提供新的依據(jù)(見表1)。

表1 目前經(jīng)研究報道的與CRC相關(guān)的circRNA

2.2.1 circRNA與CRC的發(fā)生和進展：circRNA與CRC的發(fā)生和進展過程有著密不可分的聯(lián)系。不同的circRNA在CRC組織中差異性表達，并通過不同的代謝通路對癌細(xì)胞發(fā)揮著雙重調(diào)控作用，既可能是原癌基因，也可能是抑癌基因。大多數(shù)CRC的發(fā)生和進展與Wnt信號通路有關(guān)，Grasso等[50]發(fā)現(xiàn)，Wnt信號基因在所有CRC亞型中均發(fā)生顯著突變，與CRC的免疫抑制密切相關(guān)。Wang等[28]通過qRT-PCR首次驗證了hsa_circ_0071589在CRC組織中表達上調(diào)，利用siRNA轉(zhuǎn)染CRC細(xì)胞株(HCT116細(xì)胞)而敲除hsa_circ_0071589后可抑制癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，進而推測hsa_circ_0071589可能是CRC的原癌基因。此外，他們還通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0071589可通過充當(dāng)miR-600的海綿作用來促進zeste基因增強子同源物2(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)的表達[28]。EZH2是多聚梳抑制復(fù)合體2中具有酶活性的亞基，在腫瘤免疫、形成、轉(zhuǎn)移、新陳代謝等方面有重要作用，EZH2超表達是多種實體腫瘤晚期和轉(zhuǎn)移性的標(biāo)志[51]。相反，另一組研究人員Wang等[48]通過qRT-PCR首次發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0014717在CRC組織中表達顯著下調(diào)，且與CRC的TNM分期、遠處轉(zhuǎn)移、預(yù)后不佳密切相關(guān)；過表達hsa_circ_0014717可顯著抑制癌細(xì)胞的增殖、集落形成，體外誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，體內(nèi)抑制轉(zhuǎn)移瘤生長。此外，他們通過免疫印跡法和qRT-PCR發(fā)現(xiàn)p16基因的mRNA和蛋白質(zhì)在hsa_circ_0014717過表達的CRC細(xì)胞(HCT116和HT29細(xì)胞)中顯著表達，敲除p16可逆轉(zhuǎn)hsa_circ_0014717介導(dǎo)的CRC細(xì)胞的生長抑制，進而推測hsa_circ_0014717通過明顯上調(diào)p16的表達來促進細(xì)胞周期阻滯，且hsa_circ_0014717可能是CRC的抑癌基因。由此可見，異常表達的circRNA在調(diào)控CRC的發(fā)生和進展過程中發(fā)揮著不可或缺的作用，這促使臨床上發(fā)展以circRNA為導(dǎo)向的新穎的CRC治療切入點成為可能。

目前CRC的常見腫瘤標(biāo)志物有CEA、糖類抗原等，主要靠抽血檢出，但腫瘤標(biāo)志物升高并不代表機體一定存在腫瘤，還需要結(jié)合相關(guān)的影像學(xué)檢查或活組織切片等。此外，CEA和糖類抗原等也在食管癌、胃癌、胰腺癌、膽管癌、肺癌等多種癌癥中升高，缺乏可觀的特異性。Wang等[48]通過hsa_circ_0014717在CRC組織和癌旁組織中的表達情況建立了ROC曲線(AUC=0.683，95%CI：0.578～0.776，P=0.001)，發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0014717在CRC中具有較高的診斷學(xué)價值，推斷其有望成為診斷CRC的潛在生物標(biāo)志物。circRNA異常表達正逐漸成為影響癌癥患者OS的獨立危險因素[52-53]。Li等利用生存分析證實，當(dāng)circRNA可能是原癌基因時，其表達上調(diào)與CRC患者的OS縮短密切相關(guān)(HR=2.66，95%CI：2.03～3.50，P=0.000)；而當(dāng)circRNA可能是抑癌基因時，其表達下調(diào)與CRC患者的OS延長息息相關(guān)(HR=0.30，95%CI：0.17～0.53，P=0.00)[54]。就CEA或CA19-9陰性的CRC患者而言，其血漿中的circ-CCDC66、circ-ABCC1、circ-STIL可能是有效的診斷性生物標(biāo)志物；而將circRNA與傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物(如CEA和CA19-9)結(jié)合有望提高CRC診斷的靈敏性和特異性，尤其是針對早期CRC[55]。因此，憑借獨特的生物學(xué)結(jié)構(gòu)和功能，circRNA有望成為CRC早期篩查與診斷的生物標(biāo)志物，以及判斷其預(yù)后的指標(biāo)。

2.2.2 circRNA與CRC耐藥：化療是目前治療晚期CRC的有效方法，而5-FU和OXP是其重要的治療選擇。然而，癌細(xì)胞可對5-FU和OXP產(chǎn)生耐藥性，化療耐藥最終導(dǎo)致CRC患者出現(xiàn)病情惡化、復(fù)發(fā)甚至死亡的高風(fēng)險，與CRC預(yù)后不良相關(guān)，這是臨床上CRC化療過程中需要克服的主要障礙。

過去大量研究均已證實，lncRNA、miRNA與各種癌癥的耐化療機制相關(guān)；而circRNA作為目前癌癥界新興的明星分子，被越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，其異常表達在骨肉瘤、甲狀腺癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病、惡性膠質(zhì)瘤、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、胃癌、CRC等多種癌癥中參與調(diào)控癌細(xì)胞的化療耐藥過程[56-57]，這提示circRNA可能是突破癌細(xì)胞耐化療的關(guān)鍵分子。如circ-PVT1可在胃癌中發(fā)揮致瘤作用，且circ-PVT1在耐紫杉醇的胃癌細(xì)胞和組織中表達上調(diào)，通過海綿化miR-124-3p增強ZEB1的表達，從而促進化療耐藥的發(fā)生[57]?，F(xiàn)研究circRNA調(diào)控CRC耐化療的相關(guān)機制仍處于萌芽階段。Xiong等[58]首次發(fā)現(xiàn)并報道了circRNA參與調(diào)控CRC細(xì)胞對5-FU耐藥的作用機制，并根據(jù)KEGG通路分析結(jié)果認(rèn)為circRNA參與介導(dǎo)癌癥信號通路或癌癥相關(guān)的信號通路，如放線菌-細(xì)胞骨架通路、局灶粘連信號通路、Wnt信號通路等，使擊破CRC耐藥這一障礙成為可能。Zhang等[30]也發(fā)現(xiàn)circHIPK3在復(fù)發(fā)的CRC患者的組織中表達上調(diào)，靶向miR-637/STAT3/Bcl-2/beclin1軸，通過自噬作用促進CRC對OXP產(chǎn)生耐藥性；circHIPK3還與腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和生存相關(guān)，有望成為推斷化療患者預(yù)后的預(yù)測因子，進一步擴充了CRC研究領(lǐng)域的新視野。

目前，我們對CRC耐化療的機制仍知之甚少，導(dǎo)致當(dāng)今的治療策略難以干預(yù)其中。外泌體是由哺乳動物的各種體細(xì)胞通過胞吐作用過程釋放的納米微泡，可用于細(xì)胞間通訊。癌細(xì)胞可分泌大量外泌體至體循環(huán)中，而外泌體在癌癥的進程中發(fā)揮著侵襲、血管生成、免疫調(diào)節(jié)、耐藥等多效性作用，這些外泌體可經(jīng)液體活檢提取出來，未來有望用于癌癥篩查[59]。外泌體可將耐藥癌細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)移至藥敏細(xì)胞中，以擴大癌細(xì)胞的耐藥能力。如在胃癌中，外泌體可將miR-155-5p轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中進而增加對紫杉醇的耐藥性[60]；來自癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的外泌體可將lncRNA H19轉(zhuǎn)移到CRC細(xì)胞中以增強對草酸鉑的耐藥能力[61]。另外，由CRC細(xì)胞釋放的外泌體也可干擾腫瘤的耐藥性[62]。而circRNA可在外泌體中富集[24]。Hon等[63]首次報道胞外囊泡來源的circRNA在CRC中具有耐藥性，并從FOLFOX耐藥的HCT116細(xì)胞系分泌的外泌體中發(fā)現(xiàn)了105個上調(diào)的circRNA和34個下調(diào)的circRNA；其中circ-0000338在耐藥的HCT116細(xì)胞系及外泌體中的表達均顯著上調(diào)，敲除circ-0000338可改善CRC細(xì)胞的耐藥性；此外，通過qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)來源于CRC的外泌體可選擇性地將circ-0000338從耐藥癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到藥敏的對應(yīng)細(xì)胞中，以調(diào)節(jié)CRC細(xì)胞的耐藥性，進而提出circ-0000338可能在耐化療的CRC中具有多重調(diào)控作用。由此可見，在CRC的研究領(lǐng)域中，探明circRNA與癌細(xì)胞耐化療之間的分子機制對CRC的診治有著舉足輕重的作用，差異表達的circRNA可能是改善化療耐藥的治療靶點，也可能是評估化療患者的預(yù)后因子，但仍需要更深入的研究來闡明。

3 Fn與CRC

作為消化系統(tǒng)中一種常見的惡性腫瘤性疾病，CRC是由多因素和多階段綜合產(chǎn)生的，而腫瘤也逐漸形成繁復(fù)的機制來抵御機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)[64]。腸道微生物群包含1014個微生物，呈明顯的個體化特征而被稱為人體的“第二指紋”，通過各種復(fù)雜的機制調(diào)控腸道環(huán)境的平衡，影響著人體的免疫系統(tǒng)和健康狀況[65-66]。據(jù)統(tǒng)計，大腸的細(xì)菌密度(每毫升約1012個細(xì)菌)遠高于小腸的細(xì)菌密度(每毫升約102個細(xì)菌)，而值得注意的是，大腸的癌癥風(fēng)險是小腸的12倍[65]?？梢姡c道微生物中的一些菌群影響著CRC的進程。Chen等[67]利用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)證實Fn在CRC組織中富集。進一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)n參與CRC的發(fā)生、進展和耐藥等過程，可能是CRC易感性的潛在“啟動點”，而CRC組織中Fn的DNA數(shù)目可能將是CRC患者預(yù)后不良的生物標(biāo)志物[68-70]。

3.1 Fn簡述Fn是一種革蘭氏陰性無芽孢厭氧菌，為口腔中常見的共生定植菌，是機會致病菌，常常被發(fā)現(xiàn)于人體不同部位的混合感染和慢性炎癥中，如牙周炎、齒齦炎、胰腺炎、肝膿腫、宮內(nèi)感染、炎癥性腸病(IBD)等。Fn上的黏附素和毒力蛋白是促進其增殖和侵襲的重要因素[71]。Fn中含有一種黏附素——FadA，可與血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣黏蛋白(E-cadherin)結(jié)合，從而增加內(nèi)皮的通透性，進而促進Fn轉(zhuǎn)移[72]。Fap2，為Fn中的另一種黏附素，能識別腫瘤組織中過表達的一種糖殘基Gal-GalNAc，來調(diào)控聚集和血細(xì)胞凝集的作用[73]。Fn富集導(dǎo)致一系列特定的腫瘤相關(guān)的分子機制的發(fā)生，包括MSI、CIMP和BRAF、CHD7、CHD8、TP53的基因突變等，與口腔癌、胃癌、胰腺癌、CRC等多種癌癥密切相關(guān)[68，74-75]。錯配修復(fù)基因突變或啟動子甲基化導(dǎo)致錯配修復(fù)基因功能缺失，引起含有錯配堿基核苷酸插入或錯配缺失的DNA分子不能正常修復(fù)，引起廣泛的MSI，這在CRC患者體內(nèi)常發(fā)生。Fn與MSI相互作用影響機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，且Fn可促進高MSI的CRC細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[76]。此外，F(xiàn)n調(diào)控腫瘤的免疫微環(huán)境，通過下調(diào)T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫來促進結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生[77]。一方面，F(xiàn)n可募集髓源性抑制細(xì)胞進入腫瘤的微環(huán)境中，而髓源性抑制細(xì)胞可抑制T細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡；另一方面，F(xiàn)n上的毒力因素也可抑制T細(xì)胞的增殖[78]。這表明Fn對抗腫瘤的免疫微環(huán)境產(chǎn)生抑制的作用。在腫瘤的進程中，F(xiàn)n富集、高MSI、低水平T細(xì)胞浸潤之間相輔相成，發(fā)揮著重要的推動作用。經(jīng)小鼠實驗證實，F(xiàn)n感染能增加癌細(xì)胞的增殖、侵襲和形成轉(zhuǎn)移瘤的能力[6]。因此，F(xiàn)n可影響腫瘤的進程，也有望成為一個新的治療靶點或預(yù)后指標(biāo)。

3.2 Fn可能是CRC的致癌菌近十年來，探明Fn與CRC之間的關(guān)系走在科學(xué)研究的前沿，隨著相關(guān)研究日益增加，F(xiàn)n潛藏在CRC中的“神秘身份”逐漸被揭開——Fn可能是CRC的致癌菌。經(jīng)qPCR等方法發(fā)現(xiàn)CRC組織中Fn的豐度從直腸至盲腸逐漸增加[79]，且Fn富集于CRC組織和癌前病變中，包括腺瘤[68]，這暗示Fn豐度與病變部位相關(guān)。

大量研究試圖探明Fn在CRC中致癌的作用機制。Rubinstein等[80]研究表明，F(xiàn)n在正常組織、腺瘤、腺癌中逐漸增長，而FadA在Fn中高度保守，同樣地，F(xiàn)adA在正常組織、腺瘤、腺癌中呈階梯式增長。他們還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)adA與E-cadherin結(jié)合，并激活β-catenin信號通路，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子、致炎基因、致癌基因、Wnt基因的表達增加和CRC細(xì)胞的增殖，進而提升Fn在CRC中的致癌作用。此外，他們還發(fā)現(xiàn)一旦FadA與CRC細(xì)胞結(jié)合足以啟動Wnt基因和致癌基因，但激活致炎基因還需要網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)下FadA內(nèi)在化作用的參與。另外，Chen等[67]還證實，在CRC組織中，F(xiàn)n利用TLR4/P-PAK1網(wǎng)絡(luò)來激活β-catenin信號通路。TLR4，為Toll樣受體家族成員，是革蘭氏陰性菌上脂多糖的受體，與腸道腫瘤形成有一定關(guān)系；而PAK1參與CRC的轉(zhuǎn)移[67, 81]。Abed等[73]證實Gal-GalNAc在正常組織、腺瘤、腺癌中的生物合成逐漸增加，CRC組織中過表達的Gal-GalNAc能被Fn表面的Fap2識別并結(jié)合，進而促進Fn在CRC組織中富集。更深入研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ap2能介導(dǎo)Fn侵襲CRC細(xì)胞，在此過程中還能誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子IL-8、CXCL1的分泌，進而促進CRC細(xì)胞遷移，這與CRC的進程密切相關(guān)[82]。由此推測，靶向Fn上的FadA、Fap2或宿主上皮的Gal-GalNAc有望降低Fn在CRC組織中的致瘤作用。

化療失敗源于藥物抵抗，這是導(dǎo)致CRC患者復(fù)發(fā)的最主要的原因。Fn在CRC復(fù)發(fā)的組織中豐度也較高，且Fn富集提示CRC患者可能有更低的無復(fù)發(fā)生存率，與CRC復(fù)發(fā)的預(yù)后不良相關(guān)[83-84]。Fn可通過TRL4/NF-κB通路上調(diào)BIRC3的表達而抑制caspase-3(為哺乳動物細(xì)胞凋亡通路下游關(guān)鍵的死亡蛋白酶)的生物學(xué)功能，最終促進CRC對5-FU產(chǎn)生耐藥性[85]。此外，Yu等[84]發(fā)現(xiàn)Fn通過靶向固有免疫途徑TLR4和MYD88而選擇性降低miR-18a和miR-4802表達水平，來刺激自噬相關(guān)蛋白ULK1和ATG7的表達，進而激活癌癥的自噬途徑，最終可導(dǎo)致CRC對5-FU和OXP產(chǎn)生耐藥效應(yīng)。Lu等[85]利用慢病毒和siRNA敲低技術(shù)證實，F(xiàn)n還可通過ANO1信號通路阻礙5-FU和OXP所觸發(fā)的CRC細(xì)胞凋亡，進而產(chǎn)生耐藥效應(yīng)。可見，F(xiàn)n是CRC復(fù)發(fā)和化療耐藥的潛在危險因素。

Komiya等[86]通過研究證實，CRC患者瘤內(nèi)的Fn來源于口腔，暗示消化道可能是Fn傳播的一潛在性途徑。而另一項研究發(fā)現(xiàn)Fn也可經(jīng)血液傳播的方式定植于CRC病灶中[73]。最近，流行病學(xué)研究也開始著手探討暴露因素及生活方式(如飲食習(xí)慣、使用抗生素等)在CRC進程中對Fn富集產(chǎn)生的影響作用[87-88]。高纖維的膳食攝入與Fn富集發(fā)生CRC的低風(fēng)險相關(guān)[87]。另外，使用甲硝唑處理結(jié)腸癌異種移植的小鼠可減少Fn的負(fù)載、癌細(xì)胞的增殖、瘤體的生長[89]。因此，未來的治療手段有望通過干預(yù)機體中Fn的水平來阻礙CRC的進程。對于Fn富集的CRC患者，標(biāo)準(zhǔn)的治療策略將需要把抗Fn治療也考慮在其中。

4 小結(jié)與展望

綜上所述，我國CRC的發(fā)病率和致死率仍處于較高水平，形勢不容樂觀，目前亟待一種更有效的診治策略來改善CRC患者的生存情況。circRNA、Fn均具有各自獨特的優(yōu)勢。circRNA具有高度穩(wěn)定性、豐富性、特異性等特征，可在CRC中異常表達；而Fn可能是CRC的致癌菌，可在CRC中富集。circRNA、Fn均通過多種不同的信號通路參與CRC的發(fā)生、進展和耐藥等過程，有望成為潛在的CRC診斷和預(yù)后評估的新型生物標(biāo)志物及治療靶點。此外，對于同時富集Fn和高表達miR-21的CRC患者，circRNA有望成為潛在的治療靶點。盡管我們在circRNA、Fn兩個領(lǐng)域中已取得一些進展，但仍處于剛起步階段，實際應(yīng)用于臨床診治還需走很長的路，未來需要加大對circRNA、Fn在CRC進程中的研究，而我院消化內(nèi)科正努力挖掘潛藏在三者之間的作用機制，推斷Fn可能通過介導(dǎo)circRNA/miRNA途徑而影響CRC的進程。