重樓皂苷Ⅶ對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖、遷移與侵襲作用及機(jī)制研究

何 昊，劉 楊，錢小英，靳曼菲，鄭 蕾*，成 昭

重樓皂苷Ⅶ對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖、遷移與侵襲作用及機(jī)制研究

何 昊1，劉 楊2，錢小英1，靳曼菲1，鄭 蕾1*，成 昭1

1. 西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西 西安 710021 2. 空軍軍醫(yī)大學(xué) 藥學(xué)系，陜西 西安 710032

研究重樓皂苷Ⅶ對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖、遷移與侵襲作用及機(jī)制。采用MTT法檢測(cè)重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞存活率的影響；觀察重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞形態(tài)的影響；采用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室法考察重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞凋亡的影響；采用Western blotting法檢測(cè)重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、B細(xì)胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-associated X protein，Bax）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP）、DNA酶抑制物（inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease，ICAD）和程序性死亡分子配體-1（programmed death ligand 1，PD-L1）蛋白表達(dá)的影響。重樓皂苷Ⅶ可抑制PANC-1細(xì)胞存活率，顯著抑制PANC-1細(xì)胞遷移和侵襲能力（＜0.01），顯著誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡（＜0.05、0.01），顯著升高PANC-1細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3、PARP、Bax表達(dá)水平（＜0.01），顯著降低pro-PARP、ICAD、Bcl-2、PD-L1蛋白表達(dá)水平（＜0.05、0.01）。重樓皂苷Ⅶ能夠抑制PANC-1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并可能通過下調(diào)PD-L1表達(dá)誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡。

重樓皂苷Ⅶ；胰腺癌PANC-1細(xì)胞；增殖；凋亡；程序性死亡分子配體-1

胰腺癌發(fā)病率位居腫瘤第10位，死亡率位居第4位，患者的5年生存率僅有9%[1]。2017年我國(guó)新增約8.36萬(wàn)胰腺癌新發(fā)病例和8.51萬(wàn)死亡病例[2]。胰腺癌惡性程度高、侵襲轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，且由于胰腺的解剖位置較深，早期臨床癥狀隱匿不易診斷，超過85%患者初次診斷時(shí)癌細(xì)胞已經(jīng)出現(xiàn)局部浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移，預(yù)后效果不佳[3]。手術(shù)結(jié)合化療是目前胰腺癌臨床治療的主要手段，但由于胰腺癌細(xì)胞的特性，傳統(tǒng)化療藥物極易出現(xiàn)耐藥性，因此，抗胰腺癌的新藥開發(fā)迫在眉睫。中藥及其活性成分具有良好的抗腫瘤作用。重樓為百合科植物云南重樓Smith var．(Franch.) Hand- Mazz.或七葉一枝花Smith var.(Franch.) Hara的干燥根莖，主要分布于云南、四川、陜西等地，性微寒、味苦[4]。七葉一枝花為秦巴山區(qū)特色太白七藥之一，為清熱解毒類中藥，用于治療癰瘡、咽喉腫痛、毒蛇咬傷等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，甾體皂苷為重樓中發(fā)揮主要藥效作用的成分，其苷元主要為薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元2類，重樓皂苷Ⅶ為具有偏諾皂苷元的皂苷類化合物，具有良好的抗腫瘤活性[5-6]。本研究考察了重樓皂苷Ⅶ對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響，為重樓皂苷用于抗腫瘤治療提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 細(xì)胞

PANC-1細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)。

1.2 藥品與試劑

重樓皂苷Ⅶ（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，批號(hào)76296?75?8）購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清、青鏈霉素混合液購(gòu)自美國(guó)HyClone公司；四甲基偶氮唑藍(lán)噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Hoechst 33258染料購(gòu)自美國(guó)MedChemExpress公司；Matrigel基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)BD公司；Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Corning公司；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20180406）購(gòu)自上海七海復(fù)泰生物科技有限公司；RIPA細(xì)胞裂解液、BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自陜西先鋒生物科技有限公司；程序性死亡分子配體-1（programmed death ligand 1，PD-L1）蛋白抗體（批號(hào)00071664）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）抗體（批號(hào)00027610）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP）抗體（批號(hào)00022011）、DNA酶抑制物（inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease，ICAD）抗體（批號(hào)00021351）、B細(xì)胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）抗體（批號(hào)00045121）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-associated X protein，Bax）抗體（批號(hào)00039510）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體（批號(hào)10004129）購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司；羊抗鼠二抗（批號(hào)115?035?003）購(gòu)自美國(guó)Jackson ImmunoResearch Laboratories。

1.3 儀器

3111型CO2培養(yǎng)箱、Multiskan GO自動(dòng)全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、MicroPure超純水機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；IX73倒置熒光顯微鏡（日本Nikon公司）；CJ-2S104超凈工作臺(tái)（天津泰斯特儀器有限公司）；AX224ZH分析電子天平（美國(guó)OHAUS公司）；Accuri C6流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）；ChemiDoc XRS＋化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

PANC-1細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.2 重樓皂苷Ⅶ母液的配制

重樓皂苷Ⅶ溶于DMSO配制成100 mmol/L母液，分裝保存于?20 ℃冰箱。臨用時(shí)用DMEM高糖培養(yǎng)基稀釋至不同濃度。

2.3 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞存活率的影響

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，用DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，以1×105/mL接種于96孔板中，100 μL/孔，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。設(shè)置對(duì)照組及重樓皂苷Ⅶ（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00 μmol/L）組，棄去培養(yǎng)基，給藥組分別加入100 μL不同濃度的重樓皂苷Ⅶ溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)基，PBS緩沖液洗滌2次，每孔加入100 μL MTT溶液（0.5 mg/mL），于37 ℃孵育4 h，棄去上清液，每孔加入150 μL DMSO，采用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的吸光度（），計(jì)算細(xì)胞存活率。

2.4 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞形態(tài)的影響

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，用DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，以1.5×105/mL接種于6孔板中，2 mL/孔，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。設(shè)置對(duì)照組及重樓皂苷Ⅶ（0.5、1.0、2.0 μmol/L）組，棄去培養(yǎng)基，給藥組分別加入2 mL不同濃度的重樓皂苷Ⅶ溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)基，PBS緩沖液洗滌2次，加入2 mL 70%冰乙醇固定30 min，PBS緩沖液洗滌，加入2 mL Hoechst 33258染液（5 μg/mL），避光染色15 min，PBS緩沖液洗滌，于倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照。

2.5 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞遷移和侵襲的影響

2.5.1 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞水平遷移能力的影響 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，用DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，以1.5×105/mL接種于6孔板中，2 mL/孔，待細(xì)胞貼壁后，棄去培養(yǎng)基。設(shè)置對(duì)照組及重樓皂苷Ⅶ（0.5、1.0、2.0 μmol/L）組，給藥組分別加入2 mL不同濃度的重樓皂苷Ⅶ溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于0、12、24、48 h在倒置顯微鏡下觀察并拍照。

2.5.2 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞垂直遷移能力的影響 Transwell小室置于24孔板中，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，用DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，以2×105/mL接種于Transwell小室中。設(shè)置對(duì)照組及重樓皂苷Ⅶ（0.5、1.0、2.0 μmol/L）組，給藥組Transwell小室下室分別加入600 μL不同濃度的重樓皂苷Ⅶ溶液（重樓皂苷Ⅶ母液以20%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基稀釋），對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。棄去Transwell小室中培養(yǎng)基，PBS緩沖液洗滌，甲醇固定20 min，0.1%結(jié)晶紫溶液染色3 min，PBS緩沖液洗滌，用棉簽擦去小室內(nèi)細(xì)胞，于顯微鏡下觀察細(xì)胞。

2.5.3 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞侵襲能力的影響 Transwell小室置于24孔板中，按照1∶3將Matrigel膠用預(yù)冷的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋，40 μL/孔，均勻鋪于Transwell小室底部，于培養(yǎng)箱中孵育5 h，棄去小室內(nèi)殘余液體。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，用DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，以4×105/mL接種于Transwell小室中。后續(xù)操作同“2.5.2”項(xiàng)步驟。

2.6 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞凋亡的影響

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，以1.5×105/mL接種于6孔板中，2 mL/孔，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。設(shè)置對(duì)照組及重樓皂苷Ⅶ（0.5、1.0、2.0 μmol/L）組，棄去培養(yǎng)基，給藥組分別加入2 mL不同濃度的重樓皂苷Ⅶ溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)基，收集細(xì)胞，按照Annexin V-FITC/PI雙染試劑盒說明書染色，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)樣分析。

2.7 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞Caspase-3、PARP、ICAD、Bcl-2、Bax和PD-L1蛋白表達(dá)的影響

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1細(xì)胞，以1.5×105/mL接種于T25培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24 h，棄去培養(yǎng)基。設(shè)置對(duì)照組、重樓皂苷Ⅶ（1 μmol/L）組，給藥組加入2 mL重樓皂苷Ⅶ溶液，對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)0、12、24、48 h，收集細(xì)胞，按照RIPA裂解液說明書提取蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度，加入上樣緩沖液于100 ℃加熱變性。蛋白樣品經(jīng)12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂牛奶封閉2 h，洗滌后分別加入Caspase-3、PARP、ICAD、Bcl-2、Bax和PD-L1抗體，4 ℃孵育過夜，洗滌后加入羊抗鼠二抗，于室溫孵育2 h，洗滌后加入ECL發(fā)光液，采用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞存活率的影響

如圖1所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ組細(xì)胞存活率降低，呈劑量相關(guān)性，重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞的半抑制濃度（50% inhibitory concentration，IC50）值為（1.27±0.18）μmol/L，因此選擇0.5、1.0、2.0 μmol/L重樓皂苷Ⅶ進(jìn)行后續(xù)研究。

圖1 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞存活率的影響()

3.2 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞形態(tài)的影響

如圖2所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，出現(xiàn)顆粒狀凋亡小體，鏡下可見核濃縮和核碎裂。

3.3 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞遷移和侵襲的影響

如圖3所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ組PANC-1細(xì)胞遷移率顯著降低（＜0.01），且呈劑量和時(shí)間相關(guān)性；如圖4所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ組從小室上層透過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)顯著減少（＜0.01），呈劑量相關(guān)性，表明重樓皂苷Ⅶ可抑制PANC-1細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

3.4 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞凋亡的影響

如圖5、表1所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ（0.5 μmol/L）組中末期凋亡細(xì)胞比例顯著升高（＜0.01），重樓皂苷Ⅶ（1.0、2.0 μmol/L）組早期凋亡細(xì)胞和中末期凋亡細(xì)胞比例均顯著升高（＜0.05、0.01）表明重樓皂苷Ⅶ可誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡。

3.5 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞Caspase-3、PARP、ICAD、Bcl-2、Bax和PD-L1蛋白表達(dá)的影響

如圖6所示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ組Cleaved Caspase-3、PARP、Bax蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.01），pro-PARP、ICAD、Bcl-2蛋白表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05、0.01），且呈時(shí)間相關(guān)性，表明重樓皂苷Ⅶ可促進(jìn)PANC-1細(xì)胞凋亡。如圖7所示，重樓皂苷Ⅶ組PD-L1蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.01），呈時(shí)間相關(guān)性，表明重樓皂苷Ⅶ誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞死亡可能與下調(diào)PD-L1表達(dá)相關(guān)。

圖2 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞形態(tài)的影響 (×200)

與對(duì)照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

圖4 重樓皂苷VII對(duì)PANC-1細(xì)胞垂直遷移 (A、C) 及侵襲(B、D) 的影響()

圖5 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞凋亡的影響

表1 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞凋亡的影響()

與對(duì)照組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01control group

圖6 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響()

圖7 重樓皂苷Ⅶ對(duì)PANC-1細(xì)胞中PD-L1蛋白表達(dá)的影響()

4 討論

胰腺癌侵襲性強(qiáng)，早期易轉(zhuǎn)移，患者生存率較低。天然產(chǎn)物是抗腫瘤藥物研發(fā)的重點(diǎn)來源[6]，從中藥中尋找具有抗胰腺癌作用的活性成分具有重要意義。重樓皂苷Ⅶ為中藥重樓中的主要活性成分，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅶ具有較好的抗腫瘤作用，能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移與侵襲，并可通過抑制磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）和核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[7]。本研究結(jié)果顯示，重樓皂苷Ⅶ可抑制PANC-1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡。

PD-1/PD-L1是一對(duì)免疫共刺激因子，PD-1表達(dá)于T細(xì)胞表面和初級(jí)B細(xì)胞表面，PD-L1作為其配體，在腫瘤細(xì)胞及浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞均有表達(dá)。正常情況下，PD-1通過PD-L1發(fā)揮免疫調(diào)控作用，PD-1/PD-L1通路的激活可減少免疫反應(yīng)對(duì)正常組織的損傷，避免自身免疫疾病[8-9]。PD-1/PD-L1還可參與腫瘤免疫逃逸，其激活可降低腫瘤局部微環(huán)境T細(xì)胞的免疫效應(yīng)，使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫監(jiān)視和殺傷，促進(jìn)腫瘤發(fā)生；阻斷PD-1/PD-L1通路可逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫微環(huán)境，增強(qiáng)內(nèi)源性抗腫瘤免疫效應(yīng)[10]。腫瘤細(xì)胞能夠通過上調(diào)PD-L1表達(dá)來逃避T細(xì)胞識(shí)別，從而逃避免疫殺傷[8,11]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，重樓皂苷Ⅶ可顯著上調(diào)PANC-1細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3、PARP、Bax表達(dá)水平，顯著降低pro-PARP、ICAD、Bcl-2、PD-L1蛋白表達(dá)水平，表明重樓皂苷Ⅶ可誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞凋亡。

綜上所述，重樓皂苷Ⅶ能夠抑制PANC-1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，誘導(dǎo)其凋亡，同時(shí)可能通過下調(diào)PD-L1蛋白表達(dá)參與免疫調(diào)節(jié)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect and mechanism of polyphyllin VII on proliferation, migration and invasion of pancreatic cancer PANC-1 cells

HE Hao1, LIU Yang2, QIAN Xiao-ying1, JIN Man-fei1, ZHENG Lei1, CHENG Zhao1

1. School of Pharmacy, Xi’an Medical University, Xi’an 710021, China 2. School of Pharmacy, Air Force Medical University, Xi’an 710032, China

To study the effect and mechanism of polyphyllin Ⅶ on proliferation, migration and invasion of human pancreatic cancer PANC-1 cells.MTT assay was used to detect the effect of polyphyllin Ⅶ on viability of PANC-1 cells. Effect of polyphyllin Ⅶ on morphology of PANC-1 cells was observed. Effect of polyphyllin Ⅶ on cell migration and invasion were detected by wound scratch assay and Transwell chamber. Effect of polyphyllin Ⅶ on apoptosis was detected by flow cytometry. Western blotting was used to detect the effect of polyphyllin Ⅶ on expressions of cysteine protease-3 (Caspase-3), B-cell lymphoma-2 (Bcl-2), Bcl-associated X protein (Bax), poly ADP-ribose polymerase (PARP), inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease (ICAD), and programmed death ligand 1 (PD-L1) in PANC-1 cells.Survival rate of PANC-1 cells was inhibited, migration and invasion of PANC-1 cells were significantly inhibited (< 0.01), cell apoptosis was significantly induced (< 0.05, 0.01), expressions of apoptosis-related proteins Cleaved Caspase-3, PARP, Bax were significantly increased (< 0.01), and expressions of pro-PARP, ICAD, Bcl-2, and PD-L1 were significantly reduced by polyphyllin Ⅶ(< 0.05, 0.01).Polyphyllin Ⅶcan inhibit proliferation, migration and invasion of PANC-1 cells, and may induce PANC-1 cell apoptosis by down-regulating PD-L1 expression.

polyphyllin Ⅶ; PANC-1 cells; proliferation; apoptosis; programmed death ligand 1

R285.5

A

0253 - 2670(2021)07 - 1981 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.07.015

2020-11-10

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（81603265）；陜西省創(chuàng)新人才推進(jìn)計(jì)劃-青年科技新星項(xiàng)目（2019KJXX-057）；陜西省高校青年杰出人才支持計(jì)劃（05041904）；陜西省科技廳面上項(xiàng)目（2021JM-489）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目（201911840017）

何 昊（1985—），副教授，博士，從事中藥抗腫瘤及免疫研究。Tel: (029)86177545 E-mail: hehao313@163.com

鄭 蕾，副教授，博士。Tel: (029)86177548 E-mail: zhengleixa@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]