促紅細(xì)胞生成素對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡及對(duì)cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)的影響△

伍金雷，許 衛(wèi)，陳永權(quán)，謝文杰，陳晞明，陳盛強(qiáng)，張銀霞

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院心內(nèi)科，廣州510150；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，廣州510150；3.廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗(yàn)學(xué)院，廣州510150）

促紅細(xì)胞生成素對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡及對(duì)cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)的影響△

伍金雷1，許 衛(wèi)1，陳永權(quán)1，謝文杰1，陳晞明1，陳盛強(qiáng)2，張銀霞3

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院心內(nèi)科，廣州510150；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，廣州510150；3.廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗(yàn)學(xué)院，廣州510150）

目的觀察促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）對(duì)慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌細(xì)胞的抗凋亡作用及對(duì)活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表達(dá)的影響。方法將36只雄性成年SD大鼠隨機(jī)分為3組，分別為假手術(shù)（Sham）組（n=12）、EPO組（n=12）和對(duì)照（Control）組（n=12）；其中EPO組和Control組大鼠使用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立慢性心力衰竭模型，術(shù)后第8周EPO組經(jīng)腹腔注射3 000 U/kg EPO，3次/周，連續(xù)4周；Sham組、Control組經(jīng)腹腔注射等量等次0.9%氯化鈉溶液。術(shù)后第4周、8周、12周行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)大鼠心功能。術(shù)后第12周末全部大鼠禁食24 h后處死，取心肌組織切片采用蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察心肌組織細(xì)胞形態(tài)，采用Tunel法觀察心肌細(xì)胞凋亡及計(jì)算凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI）；采用Western blot法檢測(cè)心肌cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)情況。結(jié)果超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示，造模大鼠術(shù)后第4周時(shí)出現(xiàn)心室肥厚，術(shù)后第8周時(shí)出現(xiàn)左心室射血功能減退；EPO組干預(yù)4周后較Control組左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）明顯升高（P<0.05），收縮末期室間隔厚度（IVSs）、收縮末期左心室后壁厚度（LVPWs）、舒張末期室間隔厚度（IVSd）、舒張末期左心室后壁厚度（LVPWd）明顯降低（P<0.05）。EPO組AI相比Control組顯著降低（23.87%±1.45%vs.35.58%±2.81%，P<0.01）；與Sham組比較，Control組cleaved Caspase-3 OD值明顯增加（0.3 145±0.0 308 vs.0.9 007±0.0 339，P<0.01）；與EPO組相比，Control組減少（0.4 893±0.0 683 vs.0.9 007±0.0 339，P<0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論EPO可明顯改善慢性心力衰竭大鼠的心功能，減少心肌細(xì)胞凋亡，對(duì)心肌具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)相關(guān)。

促紅細(xì)胞生成素；心力衰竭；心肌凋亡；cleaved caspase-3蛋白

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）作為多種心血管疾病的最終發(fā)展結(jié)果，不僅嚴(yán)重影響著患者的健康水平及生活質(zhì)量，而且給患者家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1］。近來(lái)有研究證明，促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）對(duì)急性心肌梗死、急性心力衰竭大鼠心肌均具有保護(hù)作用［2-3］。但是目前而言，EPO對(duì)治療CHF的相關(guān)研究尚少見報(bào)道。本研究擬通過(guò)建立大鼠CHF模型并以EPO干預(yù)，觀察超聲心動(dòng)圖、心肌細(xì)胞組織形態(tài)、心肌細(xì)胞凋亡率以及凋亡相關(guān)基因cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)，探討EPO是否具有抗CHF心肌凋亡作用及其可能的機(jī)制，為CHF的臨床治療提供一個(gè)新的方向。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng) 物 8～12周齡無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)成年雄性SD大鼠共40只，體質(zhì)量（241.40±16.70）g，購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有大鼠均在相同的條件下飼養(yǎng)，自由飲水和取食。飼料購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2 藥品及試劑 EPO（10 000 U/mL）購(gòu)自沈陽(yáng)三生制藥公司，TUNEL試劑盒購(gòu)自Roche公司，cleaved Caspase-3抗體購(gòu)自Cell Signaling Technolo?gy（USA），β-actin抗體購(gòu)自ProteinTech Group，Inc（USA）。

1.2 方 法

1.2.1 分組及模型建立 40只成年雄性SD大鼠隨機(jī)挑選出12只為假手術(shù)（Sham）組（n=12），其余大鼠通過(guò)行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)提高大鼠心臟后負(fù)荷，建立CHF模型。簡(jiǎn)述如下：術(shù)前禁食24 h，稱體質(zhì)量，10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射（3 mL/kg）麻醉，打開腹腔、暴露左腎靜脈，左腎靜脈和下腔靜脈交點(diǎn)上方約10～15 mm處鈍性分離筋膜，暴露腹主動(dòng)脈，用4-0絲線穿過(guò)分離的腹主動(dòng)脈，在腹主動(dòng)脈上放置預(yù)處理磨鈍后的7號(hào)輸液針頭（直徑0.7 mm），與腹主動(dòng)脈平行，結(jié)扎后拔針，拔針時(shí)以稍有緊箍感為宜，使腹主動(dòng)脈縮窄達(dá)60%～70%，收納臟器，關(guān)閉腹腔。待大鼠蘇醒后即經(jīng)腹腔注射阿米卡星（0.2 mL/d）抗感染，連續(xù)3 d。術(shù)后正常飼養(yǎng)并觀察8周，制成CHF模型。Sham組：在分離的腹主動(dòng)脈相同部位穿線但不結(jié)扎，余建模流程同建模組。

1.2.2 模型分組和干預(yù) 術(shù)后第8周，將造模成功的存活CHF大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分成EPO組（n= 12）和將10 000 U/mL EPO用0.9%氯化鈉溶液稀釋成1 000 U/mL，EPO組大鼠經(jīng)腹腔注射EPO（3 000 U/kg），3次/周，連續(xù)4周［4］。Control組（n=12）經(jīng)腹腔注射等量0.9%氯化鈉溶液，3次/周，連續(xù)4周。Sham組處理同Control組。術(shù)后第12周各組大鼠無(wú)死亡。

1.2.3 超聲心動(dòng)圖檢查 在術(shù)后第4周、8周、12周行超聲心動(dòng)圖檢查大鼠心功能情況。禁食24 h后，10%水合氯醛腹腔注射（3 mL/kg）麻醉、備皮，應(yīng)用超聲心動(dòng)儀（ie33型號(hào)，PHILIPS公司）及7.5 MHz高頻線控探頭（PHILIPS公司）進(jìn)行超聲檢測(cè)。檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）、舒張末期室間隔厚度（end-diastolicinterventricular septum thickness，IVSd）、舒張末期左心室后壁厚度（end-diastolic left ventricular posterior wall thickness，LVPWd）、收縮末期室間隔厚度（endsystolic interventricular septum thickness，IVSs）、收縮末期左心室后壁厚度（end-systolic left ventricular posterior wall thickness，LVPWs）。

1.2.4 心內(nèi)采血和心肌組織標(biāo)本處理 術(shù)后第12周全部大鼠完成超聲心動(dòng)圖檢查后，10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射（3 mL/kg）麻醉，暴露胸腔，1 mL注射器從心尖進(jìn)針采血1 mL，注入抗凝管待送檢血常規(guī)，然后剪取心尖部約5 mm×5 mm×5 mm心肌組織，放入預(yù)冷至4℃的磷酸鹽緩沖液（PBS）中沖洗至溶液無(wú)血色，置于液氮中速凍后存于-80℃超低溫冰箱，待分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)用；剩余部分心臟組織經(jīng)預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液溶液灌注3 min，再經(jīng)4%多聚甲醛溶液灌注固定20～30 min后剪取心臟，置于4%多聚甲醛緩沖液固定，常規(guī)石蠟包埋，制成3～4 μm厚石蠟切片，待用。

1.2.5 病理檢查 經(jīng)上述步驟制成的石蠟切片中，各組中隨機(jī)選擇3張切片，采用蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色后置于200倍光鏡下觀察，鏡下觀察各組心肌組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。

1.2.6 TUNEL原位末端標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 從石蠟切片中，各組隨機(jī)選擇3張切片，按照TUNEL試劑盒操作方法處理，在熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞并采取圖像，再進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，每張切片在高倍鏡（×400）下隨機(jī)讀取6個(gè)不重疊視野，細(xì)胞核染成棕色者計(jì)為陽(yáng)性細(xì)胞。計(jì)數(shù)后，計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI）=單視野凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/單視野總細(xì)胞計(jì)數(shù)×100%，取其平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.7 Western blot法測(cè)定cleaved Caspase-3蛋白表達(dá) 心肌組織經(jīng)研磨、裂解后用酶標(biāo)儀測(cè)蛋白濃度，根據(jù)所測(cè)得的蛋白濃度上樣總蛋白質(zhì)量為120 μg，經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分離后，采用電印跡轉(zhuǎn)移法將蛋自質(zhì)轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，麗春紅S染色，根據(jù)所需目標(biāo)條帶剪膜，用質(zhì)量濃度為5%的脫脂奶粉的TBS-T溶液室溫封閉2 h后，分別加入兔抗Caspase單克隆抗體和β-actin抗體，4℃孵育過(guò)夜，室溫下TBS-T溶液洗膜后加入兔（鼠）二抗孵育2 h，用TBS-T溶液洗膜后與ECL試劑反應(yīng)5 min，膠片曝光，掃描膠片，用Quantity One軟件計(jì)算條帶光密度（OD）值，以cleaved Caspase-3與β-actin條帶的OD積分比值來(lái)評(píng)定的cleaved Caspase蛋白的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 建模、EPO干預(yù)前后超聲心動(dòng)圖指標(biāo)的變化

術(shù)后第4周，Sham組與建模組大鼠LVEF差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；建模組LVPWd、IVSd、LVPWs、IVSs顯著升高（P<0.05），表明建模組大鼠心臟發(fā)生心肌肥厚。術(shù)后第8周，建模組大鼠LVEF顯著下降（P<0.01），LVPWs、IVSs、LVPWd、IVSd仍高于Sham組（P<0.05），表明建模組大鼠經(jīng)結(jié)扎縮窄腹主動(dòng)脈后發(fā)生心力衰竭，CHF模型建立成功。術(shù)后第12周，相比Sham組（圖1-A），Control組大鼠LVEF進(jìn)一步下降（P<0.05），LVPWs、IVSs、LVPWd、IVSd進(jìn)一步增高（P<0.05），見圖1-B，側(cè)面反映Control組大鼠心力衰竭進(jìn)一步加重。與Control組比較，EPO組大鼠LVEF明顯增加（P<0.05），LVPWs、IVSs、LVPWd、IVSd明顯降低（P<0.05），表明EPO干預(yù)CHF大鼠能夠逆轉(zhuǎn)其心室肥厚、改善心功能，詳見圖1-C、表1。

圖1 各組大鼠超聲心動(dòng)圖檢查圖像（A：sham組；B：Control組；C：EPO組）

表1 各組術(shù)后第4、8、12周超聲心動(dòng)圖檢查指標(biāo)比較 （±s）

表1 各組術(shù)后第4、8、12周超聲心動(dòng)圖檢查指標(biāo)比較 （±s）

注：*P<0.05，**P<0.01；與Sham組比較，aP<0.01；與Control組比較，bP<0.05

組別Sham組建模組t值Sham組建模組t值Sham組Control組EPO組F值周數(shù)n 4 4 8 8 1 2 12 24 12 24 12 12 12 12 12 LVPWs（cm）0.276±0.005 0.355±0.015 5.467＊＊0.297±0.020 0.381±0.021 5.237＊＊0.310±0.039 0.439±0.009a0.354±0.008b10.177＊＊IVSs（cm）0.278±0.007 0.327±0.060 2.420＊0.311±0.008 0.364±0.022 3.265＊＊0.334±0.017 0.392±0.010a0.375±0.019b5.755＊LVPWd（cm）0.171±0.008 0.264±0.012 3.136＊0.192±0.009 0.294±0.025 3.148＊＊0.206±0.013 0.307±0.011a0.243±0.014b13.584＊＊IVSd（cm）0.167±0.004 0.228±0.013 2.283＊0.187±0.008 0.242±0.020 2.515＊0.199±0.011 0.271±0.008a0.215±0.015b7.322＊＊LVEF 0.884 8±0.1832 0.826 0±0.1305 1.409 0.865 7±0.1453 0.655 7±0.1672 8.426＊＊0.8235±0.1378 0.6063±0.2721a0.716 6±0.3482ab32.308＊＊

2.2 各組蘇木素-伊紅染色結(jié)果比較

Sham組大鼠心肌細(xì)胞染色清晰、排列整齊而緊密，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核致密、清晰可見，呈橢圓形或長(zhǎng)桿形，顯藍(lán)色，見圖2-A。Control組心肌細(xì)胞較肥大、細(xì)胞間間隙增寬、排列紊亂，可見間質(zhì)增生、纖維化，細(xì)胞核著色不均，心肌肌節(jié)增多、肌纖維間疏松水腫，見圖2-B。相比Control組，EPO組心肌細(xì)胞排列紊亂、間質(zhì)增生水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集的表現(xiàn)有所減輕，見圖2-C。

圖2 光鏡下心肌組織切片（HE，×200；A：Sham組；B：Control組；C：EPO組）

2.3 各組心肌細(xì)胞凋亡的變化

Sham組細(xì)胞核染為藍(lán)色，清晰可見，邊界清楚。見圖3-A。Control組可見大量棕色深染的固縮、聚集呈棒狀的細(xì)胞核（箭頭所示），為發(fā)生凋亡的細(xì)胞核，見圖3-B。EPO組深染棕色細(xì)胞核較Control組明顯減少，見圖3-C。與Sham組比較，Control組AI顯著增加；與Control組比較，EPO組 AI有所降低，但仍高于Sham組（P<0.01），見表2。

2.4 Western blot法檢測(cè)心肌cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)

與Sham組比較，Control組cleaved Caspase-3/ β-actin相對(duì)表達(dá)量（OD）值明顯升高；與Control組比較，EPO組cleaved Caspase-3相對(duì)表達(dá)量值顯著降低，但高于Sham組（P<0.05），見圖4、表2。

圖3 光鏡下心肌細(xì)胞凋亡組織切片（TUNEL，×400；A：Sham組；B：Control組；C：EPO組）

圖4 Western blot檢測(cè)各組大鼠建模12周心肌cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)情況

表2 各組cleaved Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)量及心肌細(xì)胞AI比較 ［n=12，±s］

表2 各組cleaved Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)量及心肌細(xì)胞AI比較 ［n=12，±s］

組別Sham組Control組EPO組F值cleaved Caspase-3/-actin 0.3 145±0.0 308 0.9 007±0.0 339 0.4 893±0.0 683 153.438**AI（%）8.03±0.89 35.58±2.81a23.87±1.45ab53.128**

3 討論

心力衰竭是各種病因?qū)е碌囊孕呐K收縮和（或）舒張功能受損為特點(diǎn)的器質(zhì)性心臟病的終末階段，是心臟病患者死亡的重要原因之一。近年來(lái)，隨著人們對(duì)心力衰竭發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)不斷深入，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡作為一種不同于壞死的細(xì)胞損傷機(jī)制，參與了CHF的病理生理過(guò)程［4］，是心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一［5］。心肌細(xì)胞凋亡可使心肌細(xì)胞數(shù)量減少，當(dāng)心肌細(xì)胞數(shù)量減少至一定程度，則影響了心臟的正常舒縮功能，最終引致心肌肥大、心室壁變薄、心腔擴(kuò)大等心室重構(gòu)表現(xiàn)。心肌細(xì)胞凋亡與炎性細(xì)胞因子、交感神經(jīng)活性增加、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)激活等多因素的作用最終導(dǎo)致CHF。新近研究發(fā)現(xiàn)，EPO除了具有造血作用外，還具有抗凋亡、抗氧化、抗炎、減輕水腫、促進(jìn)新生血管生成等細(xì)胞保護(hù)作用（神經(jīng)、血管平滑肌、子宮等非造血組織）［6］。而且有研究表明，EPO受體在心血管系統(tǒng)有廣泛的表達(dá)。然而，EPO能否通過(guò)抗細(xì)胞凋亡作用改善CHF心功能、逆轉(zhuǎn)心室肥厚的研究，國(guó)內(nèi)、外少見報(bào)道。本研究對(duì)大鼠采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立CHF模型。腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)是建立壓力超負(fù)荷心力衰竭模型常用的方法，在腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)術(shù)后6周大鼠出現(xiàn)失代償性心力衰竭［7］，本研究在腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后第8周（EPO干預(yù)前）行超聲心動(dòng)圖表明造模大鼠心臟肥厚、LVEF降低，這與以往的研究相同［7］，表明CHF模型建立成功。術(shù)后第12周（EPO干預(yù)后），EPO組較Control組心功能參數(shù)上，LVPWs、 IVSs、LVPWd、IVSd及LVEF明顯改善，表明EPO能改善心力衰竭大鼠心功能，逆轉(zhuǎn)心室肥厚。本研究結(jié)果顯示，與Sham組相比，Control組心功能顯著降低，細(xì)胞AI顯著升高，cleaved Caspase-3表達(dá)顯著增加；EPO干預(yù)后，EPO組心功能較Control組改善，細(xì)胞AI較Control組減輕，cleaved Caspase-3表達(dá)顯著減少。該研究結(jié)果不僅證實(shí)心肌細(xì)胞凋亡是CHF的發(fā)生、發(fā)展及惡化的重要環(huán)節(jié)，同時(shí)還表明EPO干預(yù)可有效改善CHF大鼠的心功能，該作用可能與抑制凋亡相關(guān)蛋白cleaved Caspase-3的表達(dá)，減少心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)。

有研究表明，心力衰竭時(shí)予EPO干預(yù)可介導(dǎo)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮抑制心肌細(xì)胞凋亡和改善心臟功能的作用。其中主要有PI-3K-Akt途徑［8］，而本研究的主要研究對(duì)象凋亡蛋白剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 cleaved Caspase-3是經(jīng)PI-3KAkt途徑調(diào)控的細(xì)胞凋亡終末執(zhí)行因子，可以激活核內(nèi)核酸酶裂解DNA片段從而觸發(fā)凋亡，在細(xì)胞凋亡發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用［9-11］。因此，抑制cleaved Caspase-3表達(dá)可有效減少心肌細(xì)胞凋亡，從而對(duì)CHF的治療發(fā)揮積極的影響。而本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)指標(biāo)cleaved Caspase-3表達(dá)減少說(shuō)明EPO干預(yù)CHF可抑制心肌細(xì)胞凋亡，從而減輕心肌細(xì)胞的損傷，改善心力衰竭。其機(jī)制可能與EPO激活caspase家族上游調(diào)控因子發(fā)揮抗心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用相關(guān)［12］。

綜上所述，在CHF模型大鼠中，EPO具有抗心肌凋亡，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)、改善心功能的作用，這與相關(guān)研究結(jié)論一致［13-14］。EPO通過(guò)減少凋亡相關(guān)蛋白cleaved Caspase-3的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用，由于細(xì)胞凋亡及抗細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑眾多且復(fù)雜，本研究未能闡明EPO下調(diào)cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)的具體信號(hào)途徑及EPO作用相關(guān)的受體位點(diǎn)，有待今后進(jìn)一步的研究揭示。

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Erythropoietin effect on expression of cleaved Caspase-3 protein in rat with chronic heart failure

WU Jin-lei1，XU Wei1，CHEN Yong-quan1，XIE Wen-jie,CHEN Xi-ming1，CHEN Sheng-qiang2，ZHANG Yin-xia3
（1.Department of Cardiology，The Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510150，China；2.The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510150，China；3.The King Med Shool of Laboratory Medicine，Guangzhou 510150，China）

ObjectivesAnti-apoptotic effects of chronic heart failure（CHF）was observed in rat cardiomyocytes erythropoietin（EPO）and its effect on protein cleaved cysteine-containing aspartate-specific proteases（cleaved Cas?pase-3）expression.MethodsFirstly，36 male adult SD rats were randomly divided into three groups as sham-operat?ed（Sham）group（n=12），EPO group（n=12）and control（Control）group（n=12）.CHF model was built by abdomi?nal aortic coarctation in EPO group and Control group.EPO group received 3 000 U/kg EPO by intraperitoneal injection 3 times/week for 4 weeks in 8 weeks postoperatively.Sham group and Control group received equal normal saline in dos?age and frequency.Respectively，after 4 weeks，8 weeks，12 weeks cardiac function were checked by echocardiography. After 12 weeks，all rats were sacrificed after 24 h fasting.Myocardial tissue section was used to observe cell morphology by hematoxylin and eosin（HF）staining.Myocardial apoptosis was observed by Tunel assay and apoptosis index（AI）was calculated.And myocardial cleaved Caspase-3 protein expression was examined by Western blot assay.ResultsEchocardiography showed CHF rats had ventricular hypertrophy in 4 weeks postoperatively，and had de?creased left ventricular ejection fraction（LVEF）in 8 weeks postoperatively.Compared with Control group，LVEF was significantly higher（P<0.05），end-systolic interventricular septum thickness（IVSs），end-systolic left ventricular pos?terior wall thickness（LVPWs），end-diastolic interventricular septum thickness（IVSd），end-diastolic left ventricular posterior wall thickness（LVPWd）was significantly lower（P<0.05）in EPO group in 4 weeks postoperatively.AI in EPO group was significantly lower than that in Control group（23.87%±1.45%vs.35.58%±2.81%，P<0.01）.Compared with Sham group，cleaved Caspase-3 OD values significantly increased in Control group（0.3 145±0.0 308 vs.0.9 007± 0.0 339，P<0.01）.Compared with Control group，cleaved Caspase-3 OD values in EPO group significantly decreased（0.4 893±0.0 683 vs.0.9 007±0.0 339，P<0.01）.ConclusionsEPO can improve heart function in rats with CHF，in?hibition of cardiomyocyte apoptosis，and can reduce express of cleaved Caspase-3.

erythropoietin；heart failure；cardiac apoptosis；cleaved Caspase-3 protein

R541.6

A

：1007-9688（2017）02-0209-06

10.3969/j.issn.1007-9688.2017.02.22

2016-05-26）

廣東省科技廳項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2013B022000103）。

伍金雷（1991-），男，在讀碩士研究生，住院醫(yī)師，研究方向?yàn)楣谛牟》乐巍?/p>

陳晞明，E-mail：13903004891@163.com