錯(cuò)配修復(fù)（ＭＭＲ）蛋白（ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＭＳＨ２和ＭＳＨ６）表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性分析

黃金長(zhǎng) 肖英 黃雪梅

[摘要] 目的 分析錯(cuò)配修復(fù)（MMR）蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性。 方法 選取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宮內(nèi)膜癌（UCEC）患者，采用免疫組化法對(duì)4種蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并將4種MMR蛋白中1種及以上表達(dá)缺失判定為錯(cuò)配修復(fù)基因缺陷（dMMR），全部陽(yáng)性則判定為錯(cuò)配修復(fù)基因完整（pMMR）。檢測(cè)UCEC患者M(jìn)MR蛋白缺失情況并對(duì)其與病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析。 結(jié)果 4種MMR蛋白表達(dá)均定位于腫瘤細(xì)胞核，可作為內(nèi)對(duì)照;dMMR組與pMMR組年齡、病理組織學(xué)類型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表現(xiàn)為dMMR組發(fā)病年齡低、腫瘤分期低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移少見。 結(jié)論 dMMR子宮內(nèi)膜癌比例較低，且MLH1和PM52蛋白表達(dá)缺失與MSH2和MSH6相比較為多見。MLH1和PMS2、MSH2和MSH6常協(xié)同表達(dá)或缺失。MMR蛋白與UCEC臨床病理特征關(guān)系密切。MMR蛋白對(duì)預(yù)測(cè)UCEC的惡性程度、臨床預(yù)后及UCEC發(fā)病機(jī)制方面有指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌;錯(cuò)配修復(fù);免疫組化;病理特征

[Abstract] Objective To analyze the correlation between expressions of mismatch repair（MMR） proteins and clinicopathological features and prognosis of endometrial carcinoma. Methods A total of 70 patients with uterine corpus endometrial carcinoma（UCEC） admitted to our hospital from February 2018 to May 2020 were selected， and the expression of four types of MMR proteins was detected by immunohistochemistry. The loss of expression of one or more of the four types of MMR proteins（MLH1， PMS2， MSH2 and MSH6） was judged as different mismatch repair（dMMR） gene defect， and all positive MMR proteins were judged as a complete mismatch repair gene（pMMR）. The MMR protein deletion in patients with UCEC was detected and its relationship with pathological features was analyzed. Results The expression of four MMR proteins were located in tumor nuclei and could be used as internal control.There were statistically significant differences between the dMMR group and the pMMR group in onset age， histological type， clinical stage and lymph node metastasis， etc，the difference was statistically significant（P<0.05）. In the dMMR group，the age of onset was low， the stage of tumor was low， and lymph node metastasis was rare. Conclusion The rate of endometrial carcinoma in dMMR is low， and the loss of MLH1 and PM52 protein expression is more common than MSH2 and MSH6.The MLH1 and PMS2， MSH2 and MSH6 are often co-expressed or absent. MMR protein is closely related to the clinicopathological features of UCEC. MMR protein has guiding significance in aspects of predicting the malignant degree， clinical prognosis and pathogenesis of UCEC.

[Key words] Endometrial carcinoma; Mismatch repair; Immunohistochemistry; Pathological features

子官內(nèi)膜樣腺癌中的錯(cuò)配修復(fù)（Mismatch repair，MMR）蛋白缺陷患者具有一些顯著不同于傳統(tǒng)Ⅰ型與Ⅱ型癌的特征，腫瘤具有顯著的宿主炎癥反應(yīng)，主要表現(xiàn)為腫瘤周圍淋巴細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞炎癥，伴微囊性、伸長(zhǎng)及碎片狀（Microcystic，elongated and fragmented，MELF）浸潤(rùn)方式。子宮內(nèi)膜樣腺癌通常伴有纖維黏液樣間質(zhì)或富含炎性細(xì)胞間質(zhì)：特殊的病理形態(tài)常具有隱弊性。兩者在病理形態(tài)上有一定的相似性，且伴MELF浸潤(rùn)的子宮內(nèi)膜樣腺癌與錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失均與FIGO分期、子宮深肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高及淋巴管血管侵犯相關(guān)[1-2]。本研究采用免疫組化法對(duì)（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者標(biāo)本進(jìn)行MMR蛋白MLH1、MSH2、MSH6及PMS2檢測(cè)，并對(duì)其與臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宮內(nèi)膜癌（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者，年齡53～76歲，平均（64.59±3.28）歲。所有患者均行病理學(xué)活檢切片檢查，并經(jīng)兩位資深病理醫(yī)師進(jìn)行診斷。其中錯(cuò)配修復(fù)基因缺陷（Deficent mismatch repair，dMMR）患者24例，錯(cuò)配修復(fù)基因完整（Proficient mismatch repair，pMMR）患者46例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合子宮內(nèi)膜癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：失訪患者;不愿配合患者。

本研究在赫爾辛基宣言下，其研究?jī)?nèi)容、研究方法、研究意義均通過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)進(jìn)行審批，并最終同意本次研究進(jìn)行。同時(shí)，所有患者與患者家屬對(duì)本次研究詳細(xì)過(guò)程與研究意義均已知曉，并在患者及家屬同意下，自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

所有標(biāo)本均采用4%中性甲醇液進(jìn)行固定，并采用石蠟進(jìn)行包埋、HE染色。免疫組化采用Max Vision二步法，石蠟切片脫蠟、水化后PBS沖洗，過(guò)氧化物酶阻斷劑封閉內(nèi)源性過(guò)氧化酶活性，加入一抗，室溫孵育，加入生物素標(biāo)記的二抗，加入鏈霉素抗生物素的過(guò)氧化酶溶液，孵育后滴加DAB顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封片。MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均定位于細(xì)胞核。在對(duì)照組織（即腫瘤周圍的正常上皮細(xì)胞、腫瘤內(nèi)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞核著色）中～強(qiáng)陽(yáng)性前提下可作為內(nèi)對(duì)照。將4種MMR蛋白中的1種及以上表達(dá)缺失判定為dMMR組，全部陽(yáng)性判定為pMMR組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，各組間MMR蛋白表達(dá)與UCEC臨床病理特征參數(shù)關(guān)系采用Pearson χ2檢驗(yàn)。MLH1和PMS2缺失表達(dá)與MSH2和MSH6缺失表達(dá)采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMR蛋白表達(dá)情況

4種MMR蛋白表達(dá)均定位于腫瘤細(xì)胞核，可作為內(nèi)對(duì)照。見表1。子宮內(nèi)膜樣腺癌MLH1、MSH6、PMS2蛋白缺失免疫組的圖片見封三圖5～7。

2.2 MMR蛋白表達(dá)與UCEC臨床病理特征的關(guān)系

dMMR組與pMMR組病理年齡、病理組織學(xué)類型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

MMR蛋白缺陷患者具有一些顯著不同于傳統(tǒng)Ⅰ型與Ⅱ型癌的特征，腫瘤具有顯著的宿主炎癥反應(yīng)，主要表現(xiàn)為腫瘤周圍淋巴細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)潮巴細(xì)胞炎癥。伴微囊性、MELF浸潤(rùn)方式子宮內(nèi)膜樣腺癌通常伴有纖維黏液樣間質(zhì)或富含炎性細(xì)胞間質(zhì)，特殊的病理形態(tài)常具有隱弊性。兩者在病理形態(tài)上有一定的相似性，且伴MELF浸潤(rùn)的子宮內(nèi)膜樣腺癌與錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失均與FIGO分期、子宮深肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高及淋巴管血管侵犯相關(guān)。

UCEC是臨床中較為常見的惡性腫瘤，對(duì)患者健康造成嚴(yán)重威脅。通常情況下，UCEC患者到癌癥晚期大多都不會(huì)出現(xiàn)明顯臨床癥狀，極易導(dǎo)致患者預(yù)后不良。雖然在早期可通過(guò)手術(shù)或放化療對(duì)患者進(jìn)行治療，但UCEC患者只有少數(shù)可在早期得到確診[3-4]。

MMR系統(tǒng)在臨床中首先從大腸桿菌中被發(fā)現(xiàn)，其主要依靠MutH、MutL、MUtS等基因編碼酶分子，對(duì)堿基發(fā)生的錯(cuò)配進(jìn)行矯正。人體MMR系統(tǒng)也可用于對(duì)DNA期間發(fā)生的堿基錯(cuò)配進(jìn)行修復(fù)，從而有效的對(duì)基因組的穩(wěn)定進(jìn)行維持。本研究顯示，MMR基因發(fā)生突變或蛋白缺失的情況發(fā)生時(shí)，會(huì)導(dǎo)致基因突變的發(fā)生率增加，從而促使腫瘤的發(fā)生[5-6]。

邱春華等[7]的研究顯示，當(dāng)MMR蛋白進(jìn)行基因錯(cuò)配修復(fù)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生不同的作用，包括識(shí)別、結(jié)合、水解錯(cuò)配的堿基對(duì)等，且彼此結(jié)合并產(chǎn)生相互之間的影響。而MSH2蛋白則可與MSH6或者是MSH3蛋白相互結(jié)合，從而化為二聚體。而MSH2-MSH6異二聚體可識(shí)別、結(jié)合單個(gè)錯(cuò)配堿基對(duì)或重復(fù)單核苷酸繼而在錯(cuò)配部位形成相互作用，形成滑動(dòng)夾，這一過(guò)程需要消耗一定的能量。隨后核酸內(nèi)切酶活性的異二聚體則與MutS-DNA等酶與抗原共同作用行錯(cuò)配堿基修復(fù)，合成新的DNA鏈。因此，研究認(rèn)為，MMR在基因修復(fù)過(guò)程中，可通過(guò)對(duì)不同的聚體、抗原、酶等相互作用，通過(guò)對(duì)能量進(jìn)行消耗，從而達(dá)到對(duì)DNA鏈進(jìn)行修復(fù)的目的[8-9]。

臨床上，根據(jù)子宮內(nèi)膜癌特點(diǎn)可將其分為遺傳性與散發(fā)性兩種，而散發(fā)性是臨床中較為常見的類型[10-11]。在對(duì)患者的臨床診斷中，免疫組織化學(xué)法已被廣泛運(yùn)用于臨床診斷中，且具有較高的可靠性[12-13]。

本研究中，針對(duì)錯(cuò)配修復(fù)蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達(dá)與UCEC臨床病理特征與預(yù)后相關(guān)性進(jìn)行研究，得出以下研究結(jié)果：4種MMR蛋白表達(dá)均定位于腫瘤細(xì)胞核，可作為內(nèi)對(duì)照;dMMR組與pMMR組年齡、病理組織學(xué)類型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。通過(guò)本次研究可為臨床診斷提供可靠參考價(jià)值，能通過(guò)MMR蛋白表達(dá)對(duì)患者錯(cuò)配修復(fù)基因是否存在缺失進(jìn)行判斷，從而為患者預(yù)后判斷提供一定的參考依據(jù)[14-15]。

綜上所述，錯(cuò)配修復(fù)蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達(dá)與UCEC臨床病理特征與預(yù)后相關(guān)性，能為UCEC患者預(yù)后提供可靠的參考依據(jù)。

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（收稿日期：2020-09-07）