抑癌基因PTEN在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性

吳春嬌 馬麗霞 王艷萍 柳影

(吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130012)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)在肺癌中最為常見，約占全部數(shù)量的80%～85%，其發(fā)病率和病死率常年居高不下〔1〕。隨著醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，NSCLC的治療已取得相當(dāng)進(jìn)展，但整體預(yù)后仍不樂觀，5年生存率未達(dá)15%〔2〕。研究表明，肺癌的發(fā)生發(fā)展與多因素的參與有關(guān)，是一個(gè)多階段過程，而細(xì)胞癌變的分子基礎(chǔ)多為原癌基因的激活與抑癌基因的失活，因此，基于肺癌相關(guān)基因的研究引起了廣泛重視。近年來隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的深入研究及分子生物學(xué)的快速發(fā)展，多種原癌基因和抑癌基因被發(fā)現(xiàn)。Li等〔3〕先后從人類第10q23.3染色體位點(diǎn)上分離克隆得到了3種新的抑癌基因，分別命名為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因、多進(jìn)展期癌中發(fā)生突變的基因(MMAC)1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β調(diào)節(jié)的上皮細(xì)胞富含的磷酸酶(TEP1)，后發(fā)現(xiàn)3者均定位于第10q23.3染色體，并且具相同編碼蛋白，證實(shí)為同一基因，統(tǒng)稱“PTEN”。PTEN是繼p53基因后新發(fā)現(xiàn)的又一腫瘤抑癌基因，目前該基因與NSCLC的關(guān)系眾說紛紜，但多項(xiàng)研究結(jié)果支持NSCLC中PTEN蛋白下降或缺失〔4～6〕，本研究觀察了NSCLC組織中PTEN的表達(dá)變化并進(jìn)行了相關(guān)性研究。

1 材料與方法

1.1臨床資料 入組選擇：2016年3～12月吉林省腫瘤醫(yī)院收治的NSCLC患者29例，其中男20例、女9例；年齡56～75歲，中位年齡63歲，其中>70歲10例；組織學(xué)類型為鱗癌12例、腺癌17例；分化程度為高分化8例、中分化3例、低分化18例；臨床分期依1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟TNM分期標(biāo)準(zhǔn)〔7〕分別為：Ⅰ期5例、Ⅱ期7例、Ⅲ期17例；患者術(shù)前未經(jīng)化療及其他抗腫瘤治療，均行腫瘤切除術(shù)，術(shù)中留取腫瘤組織標(biāo)本，同時(shí)留取相應(yīng)癌旁正常組織(取自距腫瘤組織邊緣不少于4 cm處)設(shè)為對(duì)照組。組織標(biāo)本以10%的中性甲醛固定，制備石蠟包埋切片。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人PTEN單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)，免疫組化及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 采用SP免疫組化法進(jìn)行PTEN檢測(cè)。所有操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行：檸檬酸緩沖液修復(fù)，濃縮型DAB試劑顯色，蘇木素復(fù)染。陽性對(duì)照組選擇已知受檢蛋白為陽性的病理切片；陰性對(duì)照組以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗完成檢測(cè)。中性樹膠封片。顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判定根據(jù)文獻(xiàn)〔8〕：顯色細(xì)胞比例及染色強(qiáng)度分別計(jì)1～3分，以兩項(xiàng)乘積≥3計(jì)為陽性；<3計(jì)為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1腫瘤組織及癌旁組織中PTEN表達(dá) PTEN的陽性產(chǎn)物主要表達(dá)在細(xì)胞核中，表現(xiàn)為細(xì)胞核染為棕黃色。腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織中PTEN蛋白的陽性表達(dá)率分別為34.48%(10/29)和68.97%(20/29),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2腫瘤組織中PTEN表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 PTEN表達(dá)與患者年齡、性別、病理分型及分期未見統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)，與腫瘤分化程度呈顯著相關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 PTEN在NSCLC 組織中的表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性(n)

3 討 論

目前發(fā)現(xiàn)與肺癌相關(guān)的原癌基因有鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Ras)基因、原癌基因蛋白質(zhì)c-Pim-1(Pim-1)基因、原癌基因人表皮生長(zhǎng)因子受體(Her)2基因等，均被證實(shí)在肺癌中呈高表達(dá)，而幾種抑癌基因如相關(guān)抑癌基因如P16、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(nm)23、P53、PTEN等在腫瘤發(fā)生早期均不同程度的失活或缺失異常，提示抑癌基因的異?？勺鳛榉伟┰缙谠\斷的生物標(biāo)志物之一，對(duì)肺癌的及時(shí)發(fā)現(xiàn)與治療意義重大〔9〕。

PTEN是目前發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因，被認(rèn)為是繼P53基因后突變率最高的腫瘤抑癌基因，PTEN可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和腫瘤組織內(nèi)血管生成，有效維持機(jī)體免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定與平衡，PTEN突變、純合性或雜合性缺失等均能引起其異常表達(dá)〔10,11〕。研究顯示，人類的多種腫瘤中出現(xiàn)PTEN基因失活，從而導(dǎo)致其喪失應(yīng)有的抑癌作用，而且PTEN的低表達(dá)或者異常缺失則導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥及對(duì)放療抵抗〔12,13〕；而PTEN的增加則可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)輻射的敏感性，聯(lián)合PTEN與γ射線照射療法可以有效抑制AKT的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞DNA的修復(fù)，提高腫瘤殺傷率〔14〕。PTEN基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展治療及預(yù)后中均起到重要作用〔15〕，雖然目前有關(guān)PTEN蛋白表達(dá)與肺癌相關(guān)性研究結(jié)論不一〔3,4〕，但都一定程度地反映了PTEN表達(dá)缺失與NSCLC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

研究證實(shí)，病情發(fā)展及預(yù)后受腫瘤的分化程度、臨床分期、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等諸多因素影響，本研究結(jié)果亦提示NSCLC患者腫瘤中PTEN水平與如上部分因素的相關(guān)性，表明PTEN的表達(dá)與NSCLC發(fā)生發(fā)展具重要關(guān)聯(lián)，有可能成為NSCLC的早期診斷與判斷病情發(fā)展及預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)因樣本數(shù)有限，關(guān)于PTEN與NSCLC組織學(xué)分型、臨床病理分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及PTEN與其他癌基因、抑癌基因的相互作用關(guān)系有待進(jìn)一步研究考證；對(duì)PTEN在NSCLC中的缺失機(jī)制及在亞細(xì)胞分布的調(diào)節(jié)機(jī)制、特別是miRNA對(duì)PTEN的調(diào)節(jié)機(jī)制及PTEN的抑癌機(jī)制和其與肺癌的相互作用等等方面都需進(jìn)一步深入研究，從而為肺癌的早期診斷和基因治療提供更多的思路與方法。