ARCHITECT C16000全自動生化分析儀檢測血清胱抑素C的性能評價

薛云松，鄧德耀，李麗莉，周林華，李宜錚，顧津伊，劉建梅

云南省第二人民醫(yī)院檢驗科，云南昆明 650000

血清胱抑素C(Cys C)是一種含122個氨基酸，相對分子質(zhì)量為13 000的蛋白質(zhì),屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中[1]。血液循環(huán)中的Cys C僅能通過腎小球濾過而被清除體外，其可作為反映腎小球濾過率(GFR)的理想標(biāo)志物[2-3]。目前較多研究發(fā)現(xiàn)，早期腎損傷時Cys C水平明顯升高，其可作為早期監(jiān)測腎功能的首選指標(biāo)[4-6]。此外，Cys C不受性別、年齡、飲食等因素的影響，相比于血清肌酐能更準(zhǔn)確、更早期地反映腎功能的變化情況,具有較好的臨床應(yīng)用價值，因此，Cys C檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性也極為重要。根據(jù)WS/T 420-2013[7]和CNAS-CL02：2012[8]中的相關(guān)要求，檢測系統(tǒng)在用于常規(guī)工作前應(yīng)對其分析性能進行驗證，證實其能夠滿足預(yù)期檢測要求。本研究對本實驗室中ARCHITECT C16000全自動生化分析儀檢測Cys C的性能進行了評價，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院20例就診患者和120例健康體檢者的血液標(biāo)本，離心分離血清，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2儀器與試劑 美國雅培公司生產(chǎn)的ARCHITECT C16000全自動生化分析儀。日本積水醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的Cys C檢測試劑、配套校準(zhǔn)品及配套質(zhì)控品，所有試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均在有效期內(nèi)。

1.3方法

1.3.1檢測前準(zhǔn)備 參數(shù)設(shè)置和操作程序嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。每天開機后進行日常維護，檢測配套質(zhì)控品，質(zhì)控合格后再進行項目檢測。質(zhì)控出現(xiàn)異常時，及時查找原因并糾正，然后再進行質(zhì)控，質(zhì)控合格后才能進行項目檢測。

1.3.3正確度驗證 廠商校準(zhǔn)品正確度驗證：參考美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI) EP15-A2[10]，使用廠商提供的有注冊證(具有溯源性)的5個水平不同批號校準(zhǔn)品(S1、S2、S3、S4、S5)，分別重復(fù)檢測3次，計算平均值作為最終檢測值，并將其與靶值進行比較，計算相對偏移=(檢測值-靶值)/靶值×100%，相對偏移的絕對值要小于1/2室間質(zhì)評允許總誤差(12.50%)。檢測系統(tǒng)正確度驗證：根據(jù)WS/T 492-2016[11]相關(guān)要求，將本實驗室的檢測系統(tǒng)定為待評系統(tǒng),已通過ISO 15189實驗室認(rèn)可的另一家醫(yī)院的檢測系統(tǒng)定為參比系統(tǒng)，將20例本院就診患者的血清標(biāo)本(Cys C水平覆蓋檢測方法的可報告范圍)用于驗證，每天5例，兩個系統(tǒng)各檢測1次，連續(xù)檢測4 d。以參比系統(tǒng)的檢測值為橫軸，待評系統(tǒng)的檢測值為縱軸，進行相關(guān)性曲線擬合。計算兩個系統(tǒng)檢測值間的相對偏移=(待評系統(tǒng)檢測值-參比系統(tǒng)檢測值)/參比系統(tǒng)檢測值×100%，相對偏移的絕對值要小于1/2室間質(zhì)評允許總誤差(12.50%)。

1.3.4分析測量范圍驗證 參考NCCLS EP6-A[12]和文獻[13]，將廠商提供的Cys C高水平標(biāo)本(H)和來自臨床的Cys C低水平標(biāo)本(L)按5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配制成6個待評價標(biāo)本。每個標(biāo)本檢測2次,第1次按標(biāo)本水平由低到高的順序檢測，第2次按標(biāo)本水平由高到低的順序檢測。計算各標(biāo)本2次檢測的平均值，以平均值作為實測值。按照公式(CL×VL+CH×VH)/VL+VH計算預(yù)期值，其中CL代表L的水平，CH代表H的水平，VL代表L的體積，VH代表H的體積。將實測值與預(yù)期值比較，進行曲線擬合，計算線性回歸方程Y=aX+b。檢測結(jié)果要滿足相關(guān)系數(shù)r≥0.975，斜率為0.97～1.03。

1.3.5臨床可報告范圍驗證 參考NCCLS EP6-A[12]，將Cys C高水平標(biāo)本按2、4、8、10、20、30倍進行稀釋，檢測稀釋后的標(biāo)本，重復(fù)檢測3次，計算稀釋后平均值，實際值為稀釋后平均值×稀釋倍數(shù)。將實際值與理論值進行比較，計算平均稀釋回收率=實際值/理論值×100%，平均稀釋回收率在80%～120%時的最大稀釋倍數(shù)為可接受的最大稀釋倍數(shù)。臨床可報告范圍上限=可接受的最大稀釋倍數(shù)×分析測量范圍上限。

1.3.6抗干擾性能驗證 參考WS/T 416-2013[14]，收集不含干擾物或干擾物水平極低的Cys C正常水平標(biāo)本和Cys C異常水平標(biāo)本各1份，備用。干擾物的選擇參照廠商的試劑說明書,選擇成品的游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、血紅蛋白及乳糜。將干擾物配制成不同水平的溶液，游離膽紅素水平為4、8、12、16、20 mg/dL；結(jié)合膽紅素水平為4、8、12、16、20 mg/dL；血紅蛋白水平為100、200、300、400、500 mg/dL；乳糜水平為600、1 200、1 800、2 400、3 000 FTU。將上述不同水平的干擾物和收集的Cys C正常水平和異常水平標(biāo)本以1∶9的比例混合，混勻后進行檢測。另將生理鹽水與收集的Cys C正常水平和異常水平標(biāo)本以1∶9的比例混合，混勻后作為對照進行檢測。每個標(biāo)本重復(fù)檢測3次，第1次按干擾物水平由低到高的順序檢測，第2次按干擾物水平由高到低的順序檢測，第3次再按干擾物水平由低到高的順序檢測。計算含干擾物標(biāo)本檢測值與對照標(biāo)本檢測值間的相對偏差=(含干擾物標(biāo)本檢測值-對照標(biāo)本檢測值)/對照標(biāo)本檢測值×100%，相對偏差的絕對值小于廠商標(biāo)準(zhǔn)(10.00%)為結(jié)果可接受。

1.3.7生物參考區(qū)間驗證 參考CLSI C28-A2[15]，將120例健康體檢者的血清標(biāo)本用于驗證參考區(qū)間的適用性。檢測健康體檢者血清Cys C水平，按Dixon方法檢查并剔除離群值，超出參考區(qū)間的Cys C檢測結(jié)果不超過10.00%時則通過驗證。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用Excel2007進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗證結(jié)果 低水平質(zhì)控品、高水平質(zhì)控品及混合血清標(biāo)本的批內(nèi)CV均小于1/4室間質(zhì)評允許總誤差(6.25%)，批間CV均小于1/3室間質(zhì)評允許總誤差(8.33%)，也均小于廠商標(biāo)準(zhǔn)(10.00%)。見表1。

表1 精密度驗證結(jié)果

2.2正確度驗證結(jié)果

2.2.1廠商校準(zhǔn)品正確度驗證結(jié)果 5個水平校準(zhǔn)品檢測值與靶值相對偏移的絕對值均小于1/2室間質(zhì)評允許總誤差(12.50%)。見表2。

表2 廠商校準(zhǔn)品正確度驗證結(jié)果

2.2.2檢測系統(tǒng)正確度驗證結(jié)果 參比系統(tǒng)和待評系統(tǒng)的檢測值具有很好的相關(guān)性，R2=0.999 5，見圖1。參比系統(tǒng)和待評系統(tǒng)檢測值相對偏移的絕對值小于1/2室間質(zhì)評允許總誤差(12.50%)，兩個系統(tǒng)檢測結(jié)果一致性好。見表3。

表3 檢測系統(tǒng)正確度驗證結(jié)果

2.3分析測量范圍驗證結(jié)果 實測值與預(yù)期值的線性回歸方程為Y=1.000X+0.094，r=0.999 1，r≥0.975，斜率在0.97～1.03，表明檢測結(jié)果可接受。Cys C的檢測結(jié)果在0.14～9.91 mg/L呈線性，故Cys C的分析測量范圍為0.14～9.91 mg/L。

2.4臨床可報告范圍驗證結(jié)果 當(dāng)稀釋倍數(shù)為20倍及以下時，平均稀釋回收率在80%～120%，因此，本實驗室待評系統(tǒng)檢測Cys C可接受的最大稀釋倍數(shù)為20倍，見表4。臨床可報告范圍上限=可接受的最大稀釋倍數(shù)×分析測量范圍上限=20×9.91(mg/L)=198.20 mg/L。

表4 臨床可報告范圍驗證結(jié)果

圖1 參比系統(tǒng)和待評系統(tǒng)檢測值的相關(guān)性曲線

2.5抗干擾性能驗證結(jié)果 含不同水平游離膽紅素(4、8、12、16、20 mg/dL)、結(jié)合膽紅素(4、8、12、16、20 mg/dL)、血紅蛋白(100、200、300、400、500 mg/dL)及乳糜(600、1 200、1 800、2 400、3 000 FTU)標(biāo)本的檢測值與對照標(biāo)本檢測值相對偏差的絕對值均小于廠商標(biāo)準(zhǔn)(10.00%)。見表5、6。

表5 含不同水平干擾物的Cys C正常水平標(biāo)本與對照標(biāo)本檢測值的相對偏差(%)

表6 含不同水平干擾物的Cys C異常水平標(biāo)本與對照標(biāo)本檢測值的相對偏差(%)

2.6生物參考區(qū)間驗證結(jié)果 120例健康體檢者血清Cys C水平為0.57～1.20 mg/L。有4例健康體檢者血清Cys C水平在參考區(qū)間(0.57～1.05 mg/L)外，超出參考區(qū)間的Cys C檢測結(jié)果不超過10.00%，通過驗證。

3 討 論

Cys C是堿性低分子蛋白質(zhì)，其水平隨GFR的下降而上升，其評價GFR的靈敏度和特異度為89%～97%[16]。Cys C診斷腎功能輕、中度下降的靈敏度高于血清肌酐[17]。膠乳凝集法檢測Cys C的原理為：標(biāo)本中的Cys C和鼠抗人Cys C單克隆抗體致敏膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，通過測定吸光度的變化來反映標(biāo)本Cys C水平。

新的檢測試劑應(yīng)用于臨床之前,應(yīng)在實驗室的檢測系統(tǒng)下對廠商聲明的基本性能進行評價,證實其能夠達到所要求的性能標(biāo)準(zhǔn)。檢測系統(tǒng)的分析性能能夠滿足臨床要求是醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可和檢測結(jié)果互認(rèn)的基礎(chǔ)。本研究對ARCHITECT C16000全自動生化分析儀檢測Cys C的性能進行了驗證，以判斷其是否能滿足臨床需要。

精密度是反映檢測系統(tǒng)性能的最基本指標(biāo)，本研究精密度驗證結(jié)果顯示，低水平質(zhì)控品、高水平質(zhì)控品及混合血清標(biāo)本的批內(nèi)CV均小于1/4室間質(zhì)評允許總誤差(6.25%)，批間CV均小于1/3室間質(zhì)評允許總誤差(8.33%)，也均小于廠商聲明的10.00%，說明該檢測系統(tǒng)的Cys C檢測結(jié)果具有較好的重復(fù)性。正確度用不同批號的校準(zhǔn)品進行驗證，相對偏移的絕對值均小于1/2室間質(zhì)評允許總誤差(12.50%)。此外，本實驗室檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果與通過ISO 15189實驗室認(rèn)可的檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果也具有較好的一致性。分析測量范圍驗證是反映檢測方法性能特征的重要指標(biāo)，也是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的重要條件，本實驗室Cys C分析測量范圍為0.14～9.91 mg/L，與廠商聲明的(0.10～10.00 mg/L)接近；r≥0.975，斜率在0.97～1.03，表明檢測結(jié)果可接受，可滿足臨床標(biāo)本檢測需求?？山邮艿淖畲笙♂尡稊?shù)為20倍，臨床可報告范圍上限為198.20 mg/L，在該范圍內(nèi)的稀釋標(biāo)本檢測結(jié)果可靠,符合臨床要求。本研究所選用的不同水平游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、血紅蛋白和乳糜不會干擾Cys C正常與異常水平標(biāo)本的檢測結(jié)果(相對偏差的絕對值均小于10.00%)。120例健康體檢者中有4例血清Cys C水平在參考區(qū)間外，但超出參考區(qū)間的Cys C檢測結(jié)果不超過10.00%，可以認(rèn)為目前使用的Cys C參考區(qū)間適用于本實驗室。

綜上所述，ARCHITECT C16000全自動生化分析儀檢測Cys C的性能能夠滿足臨床需求。