白云參化學(xué)成分的研究

萬 勇，鐘國豪，袁銘銘，謝二磊*

(1.江西省藥品檢查員中心，江西 南昌 330029；2.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029)

白云參為桔?？平疱X豹屬植物大花金錢豹CampanumoeajavanicaBI.的根[1]，始載于《植物名實圖考》[2]，具有健脾益氣、補肺生津之功效，用于心悸、多汗、白帶、乳汁稀少、小兒疳積、遺尿，脾虛泄瀉、肺虛咳嗽。近年來，對白云參的化學(xué)成分和藥理活性研究很少[3-4]，主要為炔烴及其糖苷等，為了尋找其活性成分，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，更好地開發(fā)和利用該植物資源，本實驗對其正丁醇部分的化學(xué)成分進行研究，從中分離鑒定了11個化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Micromass ZabSpec質(zhì)譜儀(美國Micromass公司)；Varian UNITY INOVA 600超導(dǎo)核磁共振儀(美國Varian公司)；Ultimate3000 DGLC型HPLC色譜儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)；1260infinityⅡ型HPLC色譜儀和1260infinityⅡPrep型制備液相色譜儀(美國Agilent公司)；Büchi中壓液相制備色譜儀(瑞士步琪公司)；C18反相填料(日本YMC公司)；EYELA SB-1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本EYELA公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州億通分析儀器制造有限公司)；柱層析硅膠(100～200目)和薄層層析硅膠(青島海洋化工廠)；水為超純水、氘代試劑CD3OD、DMSO-d6(美國劍橋公司)；其他所用試劑均為分析純或色譜純。

白云參藥材由南昌弘益藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)江西省藥品檢驗檢測研究院萬林春副主任中藥師鑒定為桔?？平疱X豹屬植物白云參CampanumoeajavanicaBI.的干燥根。標本保存在江西省藥品檢驗檢測研究院標本館。

2 提取與分離

白云參藥材10 kg，經(jīng)70%乙醇加熱回流提取，減壓濃縮至無醇味后，加入適當水稀釋，依次用二氯甲烷、水飽和正丁醇萃取。萃取液分別減壓濃縮至干，得二氯甲烷部分(82 g)和正丁醇部分(103 g)。

正丁醇部分經(jīng)正相硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇(25∶1～1∶1)梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢視，合并相近的組分，得5個組分(Fr1～Fr5)。Fr3(22.4 g)經(jīng)C18中壓柱，以甲醇-水(5∶95～30∶70)梯度洗脫得化合物2(20.8 mg)，經(jīng)HPLC色譜檢視，合并為10個部分(Fr3-1～Fr3-10)，F(xiàn)r3-2(96 mg)經(jīng)反相制備HPLC，甲醇-0.01%三氟乙酸(18∶82)洗脫得到化合物1(40.6 mg)、3(10.3 mg)。Fr3-7(67 mg)經(jīng)反相制備HPLC，甲醇-0.01%三氟乙酸(31∶69)洗脫得化合物4(30.7 mg)。Fr3-3(1.8 g)經(jīng)正相硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇(5∶1～1∶1)洗脫，經(jīng)薄層色譜檢視，合并相近的組分，得6個組分(Fr3-3-a～Fr3-3-f)。Fr3-3-a(120 mg)經(jīng)反相制備HPLC，以乙腈-水(5∶95)洗脫得化合物6(5.3 mg)。Fr3-3-f(130 mg)經(jīng)反相制備HPLC，以乙腈-0.01%三氟乙酸(16∶84)洗脫，得到化合物5(47.2 mg)。Fr3-3-d(280 mg)經(jīng)反相制備HPLC，以甲醇-0.01%三氟乙酸(7∶93)洗脫，得化合物7(52.5 mg)、8(34.6 mg)。Fr3-3-b(140 mg)經(jīng)反相制備HPLC，以乙腈-0.01%三氟乙酸(15∶85)洗脫，得化合物9(26.5 mg)、10(17.8 mg)、11(9.8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:166.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.25～7.35(5H，m，H-2～6)，3.77(1H，dd，J=9.0，4.2 Hz，H-2′)，3.32(1H，dd，J=14.4，4.2 Hz，H-3′a)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：137.4(C-1)，130.0(C-2，6)，130.4(C-3，5)，128.4(C-4)，173.8(C-1′)，57.6(C-2′)，38.3(C-3′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定為苯丙氨酸。

化合物2：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:244.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.99(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，5.89(1H，d，J=4.2 Hz，H-1′)，5.69(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，4.17(1H，dd，J=4.8，4.2 Hz，H-3′)，4.14(1H，dd，J=4.8，4.2 Hz，H-2′)，3.99(1H，s，H-4′)，3.74(2H，m，H-5′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：152.5(C-2)，166.2(C-4)，102.7(C-5)，142.7(C-6)，90.6(C-1′)，71.3(C-2′)，75.7(C-3′)，86.4(C-4′)，62.3(C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定為尿苷。

化合物3：淺黃色油狀物(甲醇)。ESI-MSm/z:259.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.39(1H，dd，J=15.6，5.4 Hz，H-9)，5.92(1H，ddd，J=16.2，10.2，5.4 Hz，H-2)，5.65(1H，d，J=16.2，H-8)，5.42(1H，dd，J=16.2 Hz，H-1b)，5.18(1H，dd，J=10.2 Hz，H-1a)，4.93(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，4.26(1H，q，J=6.0 Hz，H-10)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：116.8(C-1)，137.9(C-2)，64.0(C-3)，82.2(C-4)，74.5(C-5)，70.7(C-6)，78.3(C-7)，109.4(C-8)，149.0(C-9)，7.0(C-10)，37.5(C-11)，26.1(C-12)，30.5(C-13)，30.4(C-14)，33.0(C-15)，23.7(C-16)，14.5(C-17)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定為(8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3,10-diol。

化合物4：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:685.3[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.65(2H，d，J=7.8 Hz，H-8，8′)，6.62(2H，s，H-5，5′)，6.55(2H，d，J=7.8 Hz，H-9，9′)，4.19(2H，d，J=7.8 Hz，H-Glc-1，1′)，3.90(2H，m，H-1a，1a′)，3.74(6H，s，6，6′-OCH3)，3.43(2H，m，H-1b，1b′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：71.7(C-1，1′)，41.6(C-2，2′)，35.5(C-3，3′)，134.0(C-4，4′)，113.3(C-5，5′)，148.8(C-6，6′)，145.4(C-7，7′)，115.7(C-8，8′)，122.8(C-9，9′)，104.6(Glc-1，1′)，75.2(Glc-2，2′)，78.2(Glc-3，3′)，71.7(Glc-4，4′)，78.0(Glc-5，5′)，62.8(Glc-6，6′)，56.2(6，6′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定為secoisolariciresinol diglucoside。

化合物5：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:217.3[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.49(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，7.34(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.14(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)，7.06(1H，t，J=7.8 Hz，H-7)，4.51(2H，s，H-1)，4.43(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-3)，3.48(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-4b)，3.16(1H，dd，J=10.8，16.2 Hz，H-4a)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：41.8(C-1)，56.6(C-3)，23.5(C-4)，106.5(C-4a′)，127.3(C-4b′)，118.9(C-5)，123.5(C-6)，120.7(C-7)，112.3(C-8)，138.5(C-8a)，126.2(C-9a)，171.2(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定為1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸。

化合物6：淡黃色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:233.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：9.58(2H，s，2，2′-CHO)，7.50(2H，d，J=3.0 Hz，H-3，3′)，6.76(2H，d，J=3.0 Hz，H-4，4′)，4.27(2H，dd，J=8.4，6.6 Hz，H-9a，9′a)，4.62(4H，s，H-6，6′)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：64.2(C-6，6′)，112.7(C-4，4′)，124.2(C-3，3′)，152.8(C-2，2′)，157.7(C-5，5′)，178.8(2，2′-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定為雞腳刺醛。

化合物7：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:331.3[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.63(1H，dd，J=9.0，1.8 Hz，H-6)，7.60(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.20(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，5.03(1H，d，J=7.2 Hz，H-1′)，3.89(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：125.9(C-1)，114.3(C-2)，150.3(C-3)，152.0(C-4)，116.3(C-5)，124.7(C-6)，169.5(C-7)，101.9(C-1′)，74.7(C-2′)，77.8(C-3′)，71.2(C-4′)，78.3(C-5′)，62.4(C-6′)，56.6(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為香草酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:323.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.97(2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，7.14(2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)，5.03(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：161.4(C-1)，115.7(C-2，6)，131.3(C-3，5)，124.2(C-4)，168.2(C-7)，100.3(C-1′)，73.4(C-2′)，76.9(C-3′)，69.9(C-4′)，76.6(C-5′)，61.1(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，故鑒定為對羥基苯甲酸葡萄糖苷。

化合物9：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:293.3[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.43(2H，d，J=7.8 Hz，H-2，6)，7.34(2H，d，J=7.8 Hz，H-3，5)，7.30(1H，t，J=7.8 Hz，H-4)，4.95(1H，d，J=12.0 Hz，H-7a)，4.68(1H，d，J=12.0 Hz，H-7b)，4.37(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.2(C-1)，129.4(C-2，6)，129.5(C-3，5)，128.9(C-4)，71.9(C-7)，103.5(C-1′)，75.3(C-2′)，78.3(C-3′)，71.9(C-4′)，78.2(C-5′)，63.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定為苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:167.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.55(2H，m，H-2，6)，6.83(1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，3.89(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：152.7(C-1)，113.8(C-2)，148.7(C-3)，123.1(C-4)，115.8(C-5)，125.3(C-6)，170.0(C-7)，56.6(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定為香草酸。

化合物11：白色無定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:161.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.94(2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，7.04(2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：161.8(C-1)，115.1(C-2，6)，131.0(C-3，5)，123.6(C-4)，168.9(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故鑒定為對羥基苯甲酸。

4 討論

由于目前對白云參的化學(xué)成分研究很少，本實驗通過硅膠柱、ODS柱等方法對白云參根的化學(xué)成分進行研究，從中分離鑒定了11個化合物，所得化合物均為首次從該植物中分離得到，其中主要化合物為酚酸及其苷類(7～11)，酚酸類成分具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌等藥理作用[16-19]。且白云參直接醇提后可在HPLC中檢測出化合物7～9，進一步表明酚酸及其苷類可能為白云參藥材的主要成分，以期為下一步對其質(zhì)量標準的研究提供研究思路及標準物質(zhì)，從而更好的開發(fā)利用該藥用資源。