microRNA對(duì)缺血性腦卒中血腦屏障影響的研究進(jìn)展

范曉迪,李 然,李 澎

(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100091)

缺血性腦卒中(ischemic stroke，IS)具有極高的發(fā)病率、致殘率和復(fù)發(fā)率，嚴(yán)重地威脅著人類生命健康。越來越多的證據(jù)表明，血腦屏障(blood-brain barrier，BBB)通透性升高是IS發(fā)病過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。BBB是存在于大腦血液循環(huán)與神經(jīng)組織之間的特殊屏障結(jié)構(gòu)，它由腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、基膜周細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞尾足組成，是維持腦組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、調(diào)節(jié)腦組織營(yíng)養(yǎng)與代謝、維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常微環(huán)境穩(wěn)態(tài)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[1]。完整的BBB對(duì)于大腦功能的維持至關(guān)重要，是當(dāng)今整個(gè)醫(yī)學(xué)界矚目的治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵靶標(biāo)。

MicroRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)約20個(gè)核苷酸序列的內(nèi)源表達(dá)的非編碼短單鏈RNA，它通過對(duì)mRNA的降解或瞬時(shí)翻譯抑制來負(fù)調(diào)控靶基因的表達(dá)。目前已證明某些特定miRNA是調(diào)控IS血腦屏障損傷的重要因子，針對(duì)它們進(jìn)行調(diào)控，可能對(duì)減少腦缺血引起的BBB損傷和神經(jīng)血管單元(neurovascular units, NVU)功能障礙，以及改善卒中預(yù)后具有重要意義[1-2]。

本文總結(jié)了有關(guān)miRNA在腦缺血BBB損傷中的作用的最新研究進(jìn)展，強(qiáng)調(diào)miRNA對(duì)腦缺血BBB具有極為關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用；這些最新的研究發(fā)現(xiàn)，可以為基于BBB完整性保持的IS治療策略提供重要的借鑒與參考。

1 miRNA對(duì)腦微血管內(nèi)皮的調(diào)節(jié)作用

內(nèi)皮細(xì)胞是腦微血管的主要組成部分，生理狀態(tài)下對(duì)維持BBB的完整性和腦微環(huán)境穩(wěn)態(tài)起主要作用[2]。腦缺血后腦內(nèi)皮細(xì)胞功能失常導(dǎo)致BBB通透性升高，甚至崩解，從而導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，進(jìn)一步損傷神經(jīng)細(xì)胞，乃至成倍擴(kuò)大缺血性腦損傷[1-2]。因此，腦微血管內(nèi)皮成為抑制IS的重要治療靶點(diǎn)[3]。miRNA在腦血管內(nèi)皮中高度表達(dá)，并對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能具有關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[3]。

1.1 miRNA與血管內(nèi)皮細(xì)胞連接復(fù)合體BBB內(nèi)皮細(xì)胞交界處的連接復(fù)合體由緊密連接(tight junctions，TJs)、黏附連接(adherens junctions，AJs)和縫隙連接(GAP junctions，GJs)組成，連接復(fù)合體組件或功能的破壞直接影響B(tài)BB通透性。TJs主要包括閉合蛋白(claudins)、咬合蛋白(occludin)、胞質(zhì)附著蛋白(zonula occludens，ZO)和連接黏附分子(junctional adhesion molecules，JAMs)。AJs主要由鈣黏著蛋白(cadherins)和連環(huán)素(catenins)組成。在IS中，腦血管內(nèi)皮TJs往往首先受到影響，miRNA可以通過直接或間接調(diào)控TJ蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響B(tài)BB通透性。

研究證明，miR-155是內(nèi)皮形態(tài)發(fā)生的潛在調(diào)節(jié)劑。在氧葡萄糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)誘導(dǎo)的人原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human primary brain microvascular endothelial cells，HBMECs)損傷中，抑制miR-155，導(dǎo)致claudin-1和ZO-1蛋白表達(dá)升高，而將claudin-1 cDNA轉(zhuǎn)染到OGD損傷的HBMECs中，發(fā)現(xiàn)claudin-1表達(dá)增加，并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞膜上ZO-1穩(wěn)定，證明miR-155抑制所引發(fā)的內(nèi)皮屏障功能改善是由其直接靶蛋白claudin-1所介導(dǎo)的[4]。最新研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠腦缺血模型中，選擇性敲低血管內(nèi)皮細(xì)胞miR-15a/16-1，可增強(qiáng)claudin-5的mRNA和蛋白表達(dá)豐度；在培養(yǎng)的小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain microvascular endothelial cells，BMECs)中，證實(shí)miR-15a/16-1簇直接結(jié)合到claudin-5的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)，同時(shí)干擾阻斷miR-15a/16-1的表達(dá)，減少了OGD誘導(dǎo)的claudin-5 mRNA和蛋白表達(dá)的下調(diào)并緩解內(nèi)皮屏障功能障礙，表明下調(diào)血管內(nèi)皮miR-15a/16-1的表達(dá)可以抑制IS中BBB損傷[5]。

miR-210負(fù)調(diào)節(jié)新生兒大腦BBB的完整性，與其3'UTR互補(bǔ)的潛在靶基因?yàn)閛ccludin和β-catenin[6]。在低氧損傷小鼠BMECs和人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系(human brain microvascular endothelial cell line，hCMEC/D3)中，查明claudin-1，連接黏附分子3(JAM3)和緊密連接相關(guān)蛋白1(TJAP1)是miR-212/132調(diào)控BBB作用的直接靶標(biāo)[7]。

miR-143已被證明可以作為臨床上早期診斷IS的標(biāo)志物[8]。既往研究證實(shí)，下調(diào)miR-143可以保護(hù)BBB，在此基礎(chǔ)上，又發(fā)現(xiàn)沉默miR-143不僅能夠促進(jìn)短暫性腦缺血(transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)小鼠和OGD損傷的bEnd.3細(xì)胞的內(nèi)皮緊密連接蛋白(claudin-5、occludin、ZO-1)的表達(dá)，同時(shí)抑制二者間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(collagenⅠ、collagenⅡ、α-SM)的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變(endothelial-mesenchymal transition，EndoMT)的生物過程，減少BBB損傷[9]。

連接復(fù)合體是涉及各種關(guān)鍵細(xì)胞過程的結(jié)構(gòu)蛋白組，已證明內(nèi)皮連接完整性涉及多種疾病，在連接蛋白表達(dá)所有調(diào)節(jié)機(jī)制中，miRNA已成為其結(jié)構(gòu)和功能特性特別有希望的靶標(biāo)。以上miR-155、miR-210、miR-212/132、miR-143對(duì)連接蛋白表達(dá)及BBB完整性產(chǎn)生負(fù)性調(diào)控，提示抑制負(fù)性miRNA可能成為保護(hù)BBB完整性的治療方法。

1.2 miRNA與內(nèi)皮炎癥腦缺血后的炎癥涉及復(fù)雜的病理進(jìn)展，起始于大腦常駐細(xì)胞的活化，循環(huán)白細(xì)胞如中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的浸潤(rùn)以及免疫細(xì)胞釋放促炎性介質(zhì)。炎癥既是BBB破壞的一個(gè)重要的病理因素，也是BBB破壞的病理后果；其中血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和內(nèi)皮細(xì)胞-白細(xì)胞黏附分子(E-selectin)是中風(fēng)后誘導(dǎo)炎癥的主要內(nèi)皮黏附分子。

實(shí)驗(yàn)證明，miRNA-126-3p/-5p過表達(dá)后，VCAM-1和E-選擇素水平顯著降低，從而減弱白細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性因子分泌，以及升高ZO-1和occludin蛋白的表達(dá)，最終減少BBB破壞和腦梗死體積[10]。這表明，miRNA是微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥基因誘導(dǎo)表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子。

在tMCAO和OGD損傷后，內(nèi)皮中的miR-98表達(dá)水平顯著降低，而miR-98的過表達(dá)減少了小鼠的梗塞面積，抑制中風(fēng)后促炎性Ly6CHI白細(xì)胞向大腦組織的浸潤(rùn)，并降低了病變區(qū)域M1(活化)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。通過體內(nèi)熒光標(biāo)記的葡聚糖滲透實(shí)驗(yàn)和體外跨內(nèi)皮電阻(transendothelial electrical resistance，TEER)實(shí)驗(yàn)，證明了上調(diào)miR-98的表達(dá)改善了BBB的通透性[11]。

let-7g*是let-7家族的一種變體。最初發(fā)現(xiàn)lethal-7(let-7)基因可控制秀麗隱桿線蟲的細(xì)胞分裂和分化，并且是人類中最早的已知microRNA之一?，F(xiàn)有研究表明，let-7在細(xì)胞分裂、分化，腫瘤形成和腫瘤抑制等生物過程中均發(fā)揮重要作用；同時(shí)，let-7家族參與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生，并與調(diào)節(jié)炎癥密切相關(guān)[12]。

在體內(nèi)及體外腦缺血損傷模型中發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)let-7g*能夠抑制中風(fēng)BBB的通透性升高，減弱腦組織炎癥，限制CD3+CD4+T細(xì)胞和Ly6G+中性粒細(xì)胞的腦浸潤(rùn)，減少小膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)元死亡。這些結(jié)果證實(shí)了let-7g*的過表達(dá)具有神經(jīng)保護(hù)作用[13]。

通過對(duì)MCAO小鼠腦缺血組織中提取的微囊泡進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-27a在微囊泡中的表達(dá)異常升高；股靜脈注射微囊泡后，MCAO小鼠腦梗死體積增大，BBB緊密連接蛋白損失加重，伴隨Toll樣受體4(toll-like receptor-4，TLR4)、核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-kappa B，NF-κB)和p38蛋白表達(dá)上調(diào), 進(jìn)而誘導(dǎo)下游炎癥因子的釋放，提示微囊泡miR-27a 與缺血腦組織BBB損傷和炎癥信號(hào)通路TLR4、NF-κB和p38的激活密切相關(guān)[14]。

在缺血性腦卒中中，miRNA對(duì)腦微血管內(nèi)皮屏障功能、BBB完整性以及炎癥反應(yīng)，均發(fā)揮著重要調(diào)控作用；這些新的發(fā)現(xiàn)，揭示了miRNA參與IS腦內(nèi)皮損傷的新機(jī)制，提示通過miRNA可以調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥反應(yīng)、修復(fù)受損BBB、重新建立正常腦血管功能，表明miRNA在IS中具有廣闊的治療前景。

1.3 miRNA與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡腦缺血會(huì)導(dǎo)致BMECs的功能損傷，而這一損傷繼續(xù)發(fā)展的終極形式就是細(xì)胞的死亡。血管內(nèi)皮細(xì)胞的死亡，直接導(dǎo)致腦微血管完整結(jié)構(gòu)的缺失，而且是不可逆的，對(duì)IS的預(yù)后帶來尤其嚴(yán)重的不良影響。有相當(dāng)部分的BMECs是通過凋亡的方式死亡的。

研究表明miR-15a-5p和SNHG16與人BMECs的增殖和凋亡存在關(guān)聯(lián)。miR-15a-5p通過靶向Bcl-2，抑制其表達(dá)，誘導(dǎo)OGD/R內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)I/R損傷[15]。

miR-199b-3p對(duì)BMECs 細(xì)胞活力、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡都具有重要影響。建立MCAO/R小鼠模型，發(fā)現(xiàn)miR-199b-3p在腦組織中表達(dá)降低，同時(shí)MAPK/ERK/EGR1軸激活、BMECs的凋亡增加；而用miR-199b-3p模擬物和U0126(MAPK/ERK/EGR1軸抑制劑)轉(zhuǎn)染的BMEC細(xì)胞活力增強(qiáng)，在S期停滯的細(xì)胞增多，并且凋亡受到抑制。這表明，上調(diào)miR-199b-3p可以通過阻斷MAPK/ERK/EGR1軸來抑制BMEC的凋亡，從而改善小鼠缺血性中風(fēng)的損傷[16]。

干擾miR-143-3p表達(dá)，能夠促進(jìn)OGD大鼠BMECs的增殖、周期轉(zhuǎn)化，并抑制凋亡。這一結(jié)果表明，下調(diào)miR-143-3p對(duì)于IS具有保護(hù)作用，它可能是腦卒中干預(yù)治療的又一個(gè)潛在的靶點(diǎn)[17]。

細(xì)胞死亡是當(dāng)今極為活躍的一大研究領(lǐng)域，各種舊的觀點(diǎn)、認(rèn)識(shí)被不斷打破，新的進(jìn)展層出不窮。迄今為止，已有自噬性死亡、程序性壞死、焦亡及鐵死亡等一系列新的死亡形式被發(fā)現(xiàn)。這些死亡形式與IS腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有什么關(guān)系？而miRNA又在其中發(fā)揮了什么作用? 這些都還沒有得到充分的研究，因此，在這方面是大有可為的。相關(guān)的深入研究，對(duì)于進(jìn)一步闡釋miRNA在缺血性腦損傷內(nèi)皮功能障礙、BBB破壞中的作用是非常有意義的。

2 miRNA與周細(xì)胞

血管內(nèi)皮細(xì)胞被周細(xì)胞覆蓋并共同由基膜包繞，周細(xì)胞是BBB的重要組成部分，它從相鄰細(xì)胞中接收、協(xié)調(diào)和處理信號(hào)，以產(chǎn)生不同的神經(jīng)血管功能，包括微血管血流動(dòng)力學(xué)的調(diào)節(jié)、BBB滲透性、毒性代謝物清除及血管生成[18]。在缺血損傷急性期，周細(xì)胞的缺失導(dǎo)致內(nèi)皮與星形膠質(zhì)細(xì)胞尾足連接斷裂、BBB破壞和腦水腫[18]。

周細(xì)胞在大腦中表達(dá)鞘氨醇-1-磷酸受體(sphingosine-1-phosphate receptor,S1PR2)和N-鈣黏著蛋白(N-cadherin)。螢光素酶測(cè)定法確定miR-149-5p可以直接與S1PR2基因的3′UTR結(jié)合，在tMCAO大鼠和體外BBB模型中證明，miR-149-5p過表達(dá)顯著抑制周細(xì)胞的遷移和周細(xì)胞中N-鈣黏著蛋白(N-cadherin)的表達(dá)，并改善BBB通透性；同時(shí)miR-149-5p對(duì)周細(xì)胞的保護(hù)作用被S1PR2沉默所逆轉(zhuǎn)，證實(shí)了miR149-5p調(diào)節(jié)局部缺血誘導(dǎo)BBB通透性通過靶向S1PR2而實(shí)現(xiàn)[19]。

此外，在高糖和缺血的條件下，周細(xì)胞還可以攝取血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的miR-503，從而減少毛細(xì)血管的覆蓋范圍，增加毛細(xì)血管通透性[20]。由于miRNA在周細(xì)胞中的研究仍處于起步階段，因此需要在該領(lǐng)域進(jìn)行更多更深入的研究以探索表觀遺傳調(diào)控，從而為IS治療提供有希望的靶標(biāo)。

3 miRNA與星形膠質(zhì)細(xì)胞尾足

星形膠質(zhì)細(xì)胞尾足作為重要成分參與形成血腦屏障。缺血性腦損傷后，BBB完整性受到破壞，滲透壓的改變驅(qū)使水液進(jìn)入星形膠質(zhì)細(xì)胞，導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，功能障礙，最終死亡。

研究表明，水通道蛋白(aquaporin-4，AQP4)的上調(diào)與該過程密切相關(guān)，AQP4被認(rèn)為是腦缺血后誘發(fā)血管性水腫的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑[21]。目前已知有兩個(gè)miRNA，即miR-320a[22]和miR-130a[23]可以作為AQP4的調(diào)節(jié)劑，其中miR-130a可以與AQP4 M1啟動(dòng)子結(jié)合以抑制其轉(zhuǎn)錄，miR-130被鑒定為AQP4 M1亞型的強(qiáng)轉(zhuǎn)錄阻遏物。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)證實(shí)，AQP4也是miR-29b的下游靶標(biāo)，通過對(duì)胚胎神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞比較發(fā)現(xiàn)，miR-29家族在星形膠質(zhì)細(xì)胞中富集，且表達(dá)強(qiáng)于神經(jīng)元[24]。在腦缺血小鼠中，miR-29b的過表達(dá)可靶向降低AQP4的表達(dá)，進(jìn)而減少BBB損傷、腦水腫及梗死面積[24]。更有意義的是，在IS患者外周血及MCAO小鼠的血液及大腦中miR-29b的表達(dá)均顯著下調(diào)，miR-29b表達(dá)與患者中風(fēng)后NIHSS得分和MCAO腦梗死體積呈負(fù)相關(guān)，預(yù)示miRNA-29b可能成為預(yù)測(cè)中風(fēng)后預(yù)后的一種新型循環(huán)生物標(biāo)記物[25]。

綜上，目前對(duì)于miRNA在IS血腦屏障調(diào)節(jié)作用研究中，主要針對(duì)各個(gè)組分，單一細(xì)胞，某個(gè)特異的miRNA，特異的靶向基因；由于腦組織結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，BBB結(jié)構(gòu)的多元性，需要進(jìn)一步研究BBB各組分如腦微血管內(nèi)皮和周細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞之間的相互作用，或?qū)ふ医徊娴膍iRNA，或發(fā)現(xiàn)共同作用的靶基因，以此探索miRNA調(diào)控IS中BBB的核心網(wǎng)絡(luò)。

4 miRNA與MMPs

基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)，也稱為膠原酶B，是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)系列最重要的成員之一。正常腦組織中MMP-9低表達(dá)，在缺血性腦組織中MMP-9被過度激活，加重BBB泄漏、促進(jìn)炎性反應(yīng)及誘發(fā)神經(jīng)細(xì)胞死亡[26]。MMP-9對(duì)BBB的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)成分及連接蛋白的降解起到關(guān)鍵作用，已被證明是BBB分解的關(guān)鍵效應(yīng)物。缺血區(qū)的神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及周細(xì)胞均可在炎癥刺激下分泌MMP-9，進(jìn)而直接或間接破壞BBB，促進(jìn)血管通透性，增加腦組織損傷[26]。

在大鼠大腦缺血/再灌注損傷模型和OGD/R處理的bEnd.3細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)MMP-9表達(dá)上調(diào)，BBB通透性增高，miR-539模擬物可逆轉(zhuǎn)OGD/R誘導(dǎo)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷；而在miR-539模擬物和pcDNA-MMP-9共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，這種保護(hù)作用則被取消。這證明過表達(dá)的miR-539通過靶向阻斷MMP-9，抑制了BBB通透性的升高，達(dá)到腦保護(hù)的作用[27]。

小鼠側(cè)腦室注射外源性agomir-132后，過表達(dá)的miR-132通過抑制MMP-9 mRNA的表達(dá)，減少了VE-鈣粘蛋白(VE-cadherin)和β-catenin的降解來保護(hù)BBB完整性；表明miR-132/MMP-9軸可能是減輕缺血性腦卒中BBB損害的新型治療靶點(diǎn)[28]。

研究表明抑制MMP-9與組織纖溶酶原激活劑(the tissue plasminogen activator，tPA)聯(lián)合療法是有效的治療策略，通過使用靶向MMP-9的siRNA或shRNA，可減少因BBB破壞而導(dǎo)致危及生命的并發(fā)癥的發(fā)生。但是，MMPs抑制劑的后期給藥對(duì)中風(fēng)患者具有負(fù)面影響，抑制了血管生成和神經(jīng)再生。因此，應(yīng)該更加確切地對(duì)MMPs的不同亞型及其對(duì)應(yīng)的miRNA在不同時(shí)間段的作用進(jìn)行研究，為精準(zhǔn)調(diào)控MMPs、保護(hù)及修復(fù)BBB完整性提供依據(jù)[29]。

5 總結(jié)與展望

IS引發(fā)的腦微血管通透性增加和BBB破壞，導(dǎo)致腦水腫，乃至腦出血的發(fā)生。防止BBB破壞是中風(fēng)干預(yù)中的重要治療策略。miRNA是通用的調(diào)節(jié)分子，幾乎影響B(tài)BB結(jié)構(gòu)和功能的各個(gè)方面；miRNA參與調(diào)節(jié)病理過程，例如血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密結(jié)構(gòu)的破壞、凋亡和炎癥，這些病理過程可能會(huì)加劇BBB功能障礙。對(duì)于腦卒中，雖然已經(jīng)對(duì)循環(huán)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了研究，但miRNA在腦卒中后血腦屏障破壞中的具體功能仍然很大程度上未知[1-2]。深入探討miRNA調(diào)控BBB結(jié)構(gòu)和功能的機(jī)制，可能有助于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標(biāo)及開發(fā)基于miRNA的療法。

相對(duì)于單一藥物或單一基因靶點(diǎn)治療，miRNA的調(diào)控作用幾乎涵蓋了腦缺血的所有病理?yè)p傷形式。一些miRNA，如miR-149-5p，miR-539，miR-21和miR-130均表現(xiàn)出維持腦缺血血腦屏障完整性的作用，因此具有成為治療靶點(diǎn)的潛力。由于miRNAs種類和功能極其復(fù)雜，大多數(shù)專注于miRNA治療用途的研究仍處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段。在動(dòng)物研究中，靜脈內(nèi)注射miRNA agomir/mimic或miRNA hairpin inhibitor/antagomir是miRNA遞送的最常見方式。但是，受傷的大腦并不是這些特殊藥物的唯一靶標(biāo)，因?yàn)閙iRNA inhibitor/antagomir也可能影響其他器官或系統(tǒng)。而且，一種miRNA可以作用于多種mRNA，從而調(diào)節(jié)一個(gè)基因網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)一種mRNA也能夠受到多種miRNA的調(diào)控，因此，miRNA在臨床治療中的應(yīng)用仍處在探索階段，在這方面，將需要更多的工作來填補(bǔ)臨床前研究與臨床研究之間的差距。

但根據(jù)miRNA涉及到的疾病譜和時(shí)間表達(dá)的特性，發(fā)現(xiàn)并選擇合適的miRNA作為腦缺血診斷和預(yù)后標(biāo)志物是更切實(shí)可行的，與心肌梗塞不同，目前沒有血液檢測(cè)可診斷急性缺血性中風(fēng)。miRNA由于其易于檢測(cè)且在血樣中具有良好的穩(wěn)定性，已被研究人員建議作為缺血性卒中早期診斷的生物標(biāo)志物[30]。一些miRNA，如前所述的miR-143、miRNA-15a/16-1、miRNAlet-7，以及miRNA-29b等已被鑒定為候選生物標(biāo)志物，可在臨床試驗(yàn)中發(fā)揮診斷作用。因此，在未來研究鑒定可預(yù)測(cè)腦缺血BBB損傷的miRNA是非常必要和可能的。

另外，由于miRNA調(diào)控多種補(bǔ)償途徑的能力，阻斷或增強(qiáng)單個(gè)miRNA可能會(huì)產(chǎn)生多方面的作用。因此，處于非生理濃度的miRNA可能具有未知的靶標(biāo)，通過靶向正常細(xì)胞，影響穩(wěn)態(tài)，可能導(dǎo)致不良反應(yīng)，在應(yīng)用于臨床治療之前，仔細(xì)全面地研究確定其mRNA靶標(biāo)是必須的。