DNA甲基化在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)展①

陳 杏 魏 萌

（西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，成都610083）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）作為一類累及全球人口約1% 的系統(tǒng)性炎癥疾病，以多關(guān)節(jié)、對(duì)稱性、侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要癥狀，疾病發(fā)展后期可致關(guān)節(jié)畸形甚至殘疾［1］。對(duì)RA 的致病機(jī)制進(jìn)行較為全面的了解，有助于研發(fā)更為有效的治療藥物，為廣大患者帶來(lái)希望?；蚝铜h(huán)境因素傳統(tǒng)地被認(rèn)為是導(dǎo)致RA 疾病的兩大因素，然而近年來(lái)隨著表觀遺傳學(xué)的飛速發(fā)展，越來(lái)越多的研究表明了表觀遺傳學(xué)也參與了RA 致病過(guò)程［2］。表觀遺傳學(xué)對(duì)外界刺激因子做出反應(yīng)，在基因與環(huán)境之間形成橋梁，通過(guò)調(diào)節(jié)基因表達(dá)從而影響免疫系統(tǒng)的活動(dòng)性。表觀遺傳改變，如DNA 甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA 等，主要通過(guò)調(diào)節(jié)基因表達(dá)參與自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制。其中DNA 甲基化是表觀遺傳學(xué)中研究熱點(diǎn)，它是指以不改變基因序列為前提，在DNA 甲 基 化 轉(zhuǎn) 移 酶（DNA-methyltransferase，DNMT）的作用下，在基因組CpG 二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共價(jià)鍵結(jié)合1 個(gè)甲基基團(tuán)，大量研究表明其通過(guò)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA穩(wěn)定性、DNA構(gòu)象、DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變可影響基因的表達(dá)［3-4］。DNA 甲基化通過(guò)調(diào)節(jié)基因的表觀沉默以及部分類型的細(xì)胞行為，在RA 發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段發(fā)揮作用，其在RA 發(fā)展中的潛在作用引起了臨床醫(yī)生和研究人員的極大關(guān)注［5］。

RA 是一種慢性自身免疫性疾病，其中成纖維樣滑膜細(xì)胞（fibroblast-like synoviocyte，F(xiàn)LS）通過(guò)與滑膜中浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞相互作用在RA 患者免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和持續(xù)過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，最終促進(jìn)了關(guān)節(jié)軟骨退化及近關(guān)節(jié)骨組織的侵蝕；而外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），如T 淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞通過(guò)與FLS 相互作用參與了RA 慢性炎癥的持續(xù)。針對(duì)這些在RA 致病過(guò)程中有著重要意義的細(xì)胞類型，學(xué)者們對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行了DNA 甲基化的研究，得到了一系列關(guān)于致病基因的甲基化狀態(tài)信息。本文將對(duì)一些重要細(xì)胞類型的甲基化研究進(jìn)行總結(jié)，進(jìn)一步探索表觀遺傳學(xué)在RA 致病機(jī)制中的作用，同時(shí)為尋找RA潛在的生物標(biāo)志物提供線索。

1 FLS

FLS 在RA 滑膜病變和關(guān)節(jié)破壞中起著關(guān)鍵的作用。以間充質(zhì)成纖維母細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞為主的FLS 通過(guò)釋放促炎細(xì)胞因子、趨化因子刺激軟骨細(xì)胞分泌金屬蛋白酶，從而降解了包括軟骨和軟骨下骨在內(nèi)的所有結(jié)締的組織成分，加重關(guān)節(jié)的破壞。對(duì)FLS 的DNA 甲基化進(jìn)行深入研究可有助于揭示FLS在RA中作用的致病基因及其致病機(jī)制，從而尋找新的治療靶點(diǎn)［6］。

目前為止，全基因組關(guān)聯(lián)研究已識(shí)別出100多個(gè)RA 發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)基因［7］。RA 表觀遺傳學(xué)與轉(zhuǎn)錄組研究結(jié)合有助于對(duì)DNA 甲基化在基因表達(dá)中產(chǎn)生的影響及相互聯(lián)系有更深的理解，從而促進(jìn)表觀遺傳學(xué)在RA發(fā)病機(jī)制的研究發(fā)展。RA FLS的表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組和序列變異的數(shù)據(jù)綜合分析共鑒定出2375 個(gè)差異甲基化基因、2947 個(gè)差異表達(dá)基因、74 個(gè)風(fēng)險(xiǎn)基因，通路分析發(fā)現(xiàn)357 組基因與RA 的致病過(guò)程密切相關(guān)［8］。其中，肢芽和心臟發(fā)育（limb bud and heart，LBH）基因被認(rèn)為是與RA 發(fā)生、發(fā)展關(guān)聯(lián)最強(qiáng)的基因。LBH 通過(guò)在細(xì)胞分裂周期G1 期阻止細(xì)胞分裂調(diào)控FLS 增殖，而LBH 低表達(dá)可能通過(guò)G1-S 期轉(zhuǎn)化促進(jìn)FLS 增殖而成為RA 風(fēng)險(xiǎn)基因［9］。 芯片 轉(zhuǎn) 錄組 分 析顯 示，LBH 在 骨 關(guān)節(jié) 炎（osteoarthritis，OA）FLS中的表達(dá)是RA FLS的1.9倍，LBH 在RA 和OA 之間的表達(dá)差異恰好解釋了RA 滑膜增生比OA 更嚴(yán)重的原因，因此通過(guò)促進(jìn)LBH 在FLS 中的表達(dá)抑制FLS 增殖，從而緩解關(guān)節(jié)滑膜炎的癥狀，可能是新的治療靶點(diǎn)［8］。

DNA 甲基化和轉(zhuǎn)錄組不僅在RA 和OA FLS 中有顯著差異，在RA髖關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)FLS中也存在顯著差異。DNA甲基化芯片鑒定出500個(gè)差異甲基化基因，其中285 個(gè)基因呈過(guò)度甲基化，210 個(gè)基因呈低甲基化，5 個(gè)在RA 膝關(guān)節(jié)FLS 中同時(shí)存在有過(guò)度甲基化和低甲基化的CpG 位點(diǎn)的基因［10］。此外，為了鑒定髖關(guān)節(jié)與膝關(guān)節(jié)FLS的甲基化差異是否可導(dǎo)致其功能差異，RNA 測(cè)序鑒定出107 個(gè)差異甲基化基因和若干條生物信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)在RA 與OA FLS中具有差異性的IL-6 信號(hào)通路在RA 髖關(guān)節(jié)與膝關(guān)節(jié)中也具有差異性，不僅如此，IL-6 在RA 髖關(guān)節(jié)的表達(dá)量是膝關(guān)節(jié)的10.8 倍，而炎癥通路在RA 髖關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)的表達(dá)差異導(dǎo)致其在髖關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)的炎癥和免疫反應(yīng)也有差異［10］。這提示了RA 不同受累關(guān)節(jié)可能具有不同致病機(jī)制，RA 患者膝關(guān)節(jié)和髖關(guān)節(jié)的甲基化組和轉(zhuǎn)錄組差異可能導(dǎo)致其對(duì)高度靶向制劑治療反應(yīng)具有一定的差異性。

2 PBMC

RA 的初始疾病階段與先天和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的改變相關(guān)，兩大免疫系統(tǒng)通過(guò)產(chǎn)生針對(duì)各種分子包括修飾的自我表位的自身抗體而加重自身免疫反應(yīng)。在疾病的進(jìn)展階段，先天性免疫系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的相關(guān)細(xì)胞（如T 淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞）與FLS 相互作用而參與慢性炎癥狀態(tài)的加重和持續(xù)［11］。

以淋巴細(xì)胞為主的PBMC 某些關(guān)鍵致病基因與疾病發(fā)生密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)RA患者PBMC中人類突 變 同 源 基 因1（human mutL homolog 1 gene，hMLH1）啟動(dòng)子呈異常超甲基化狀態(tài)，這種狀態(tài)影響hMLH1轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，使錯(cuò)配修復(fù)蛋白基因功能喪失，最終導(dǎo)致RA 的發(fā)生發(fā)展［12］。而目前DNA甲基化在外周血中的研究主要是針對(duì)PBMC 中單一類型細(xì)胞如T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞，有助于進(jìn)一步了解RA表觀遺傳學(xué)在免疫學(xué)中的發(fā)病機(jī)制。

2.1 DNA 甲基化在T 淋巴細(xì)胞中的研究 有研究者通過(guò)將RA 患者外周血提取的各免疫細(xì)胞與健康對(duì)照組對(duì)比，發(fā)現(xiàn)RA 患者FLS 中的高甲基化CpG位點(diǎn)與其在外周血中CD4幼稚T淋巴細(xì)胞的高甲基化CpG位點(diǎn)相似［13］。這些相似的高甲基化CpG位點(diǎn)可能成為代表RA風(fēng)險(xiǎn)或疾病狀態(tài)的生物標(biāo)志物。

同時(shí)，DNA 甲基化通過(guò)與免疫通路相互作用可參與到炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。例如，細(xì)胞因子IL-6可增加DNMT1的表達(dá)，其表達(dá)水平與T 淋巴細(xì)胞中的DNA 甲基化程度密切相關(guān)，且DNA 甲基化可調(diào)節(jié)T 淋巴細(xì)胞的分化、活化和遷移，而T 淋巴細(xì)胞活化又可導(dǎo)致IL-2 啟動(dòng)子的去甲基化，從而使IL-2 基因表達(dá)增加［14］。因此，免疫通路與DNA 甲基化相互作用促進(jìn)了RA 炎癥反應(yīng)的發(fā)展，而這些關(guān)聯(lián)可能通過(guò)DNA 甲基化介導(dǎo)、影響基因表達(dá)的調(diào)控、對(duì)抗原刺激的反應(yīng)或選擇性剪接，從而導(dǎo)致RA 易感性增加［15］。

此外，隨著甲基化450 k 芯片的推進(jìn)，一項(xiàng)研究將RA 患者和健康對(duì)照組PBMC 的全基因組DNA 甲基化和mRNA 表達(dá)譜進(jìn)行了綜合分析，發(fā)現(xiàn)若干個(gè)與RA 相關(guān)的干擾素調(diào)控基因，其中核糖多聚酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP9）基因甲基化差異最為顯著，基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PARP9 表達(dá)減少可使細(xì)胞分裂停留在細(xì)胞分裂周期G1期，而過(guò)表達(dá)可促進(jìn)Jurkat T 淋巴細(xì)胞的增殖，同時(shí)通過(guò)正向調(diào)控IL-2的分泌而參與炎癥反應(yīng)和RA免疫應(yīng)答［16］。

2.2 DNA 甲基化在B 淋巴細(xì)胞中的研究 免疫細(xì)胞的表觀遺傳調(diào)控對(duì)RA 等自身免疫性疾病的發(fā)生和維持至關(guān)重要。B 淋巴細(xì)胞通過(guò)表達(dá)自身抗體加重自身免疫反應(yīng)而與RA 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，表觀遺傳變異，如DNA 甲基化，則可能介導(dǎo)了B 淋巴細(xì)胞的致病性。一項(xiàng)研究使用甲基化450 k 芯片，對(duì)RA 組和健康組的B 淋巴細(xì)胞進(jìn)行DNA 甲基化對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)一系列的差異甲基化基因，且通過(guò)與另一組系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）/健康對(duì)照組甲基化圖譜分析，發(fā)現(xiàn)基因間區(qū)chr10p12.31 在兩組實(shí)驗(yàn)中具有相似性，這一研究揭示了可能驅(qū)動(dòng)RA 中B 淋巴細(xì)胞致病活性的基因，并提示了RA 與SLE 可能有共同的甲基化模式，表明DNA 甲基化在自身免疫性疾病的可能有共同的作用模式［17］。

此外，DNA 甲基化在免疫反應(yīng)中的細(xì)胞分化過(guò)程中也有體現(xiàn)。DNA 甲基化特征在激活的B 淋巴細(xì)胞后代中被大量保留，產(chǎn)生的記憶B 淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞中顯示出類似的表觀遺傳特征，其中發(fā)現(xiàn)DNMT 在記憶B 淋巴細(xì)胞中高度表達(dá)，而與免疫相關(guān)的基因則表現(xiàn)出了獨(dú)特的DNA甲基化模式［18］。

3 DNA甲基化在治療領(lǐng)域中的研究

表觀遺傳學(xué)不僅在RA 發(fā)病機(jī)制研究上有所進(jìn)展，在治療領(lǐng)域也有所突破。一些已廣泛用于治療血液腫瘤疾病的藥物如5-雜氮-2'-脫氧胞苷（5-Aza-2'-deoxycytidine，5-AzadC）可 抑 制DNA 甲 基 化，microRNA-124a基因通過(guò)編碼非編碼小RNA抑制細(xì)胞增殖，在RA FLS 中呈現(xiàn)出過(guò)度甲基化。ZHOU等［19］通過(guò)將5-AzadC 處理RA FLS 抑制其DNMT 活性，導(dǎo)致DNA 去甲基化，進(jìn)而使染色質(zhì)與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合促使miroRNA-124a 基因表達(dá)增加。因此，5-AzadC 通過(guò)抑制RA FLS 增殖有望在RA 治療領(lǐng)域中為表觀遺傳學(xué)開啟新的研究方向。

通常，發(fā)生在啟動(dòng)子區(qū)域的過(guò)度甲基化與基因表達(dá)沉默相關(guān)，而有時(shí)某些位點(diǎn)的過(guò)度甲基化可增強(qiáng)其所在基因?qū)λ幬锏姆磻?yīng)性，提高治療藥效。MAESHIMA 等［20］通過(guò)計(jì)算與實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，在酪氨酸蛋白磷酸酶非受體11 型基因（tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11，PTPN11）中發(fā)現(xiàn)了1 個(gè)內(nèi)含增強(qiáng)子，該片段包括兩個(gè)RA FLS 與OA FLS 相比下高度甲基化的CpG 位點(diǎn)（CpG 6/CpG 7），且對(duì)糖皮質(zhì)激素受體有特異性應(yīng)答；不僅如此，高度甲基化的6 號(hào)和7 號(hào)CpG 位點(diǎn)通過(guò)增強(qiáng)內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的增強(qiáng)子激活性來(lái)促進(jìn)PTPN11 的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而導(dǎo)致了RA FLS 中酪氨酸磷酸2（tyrosine phosphatase 2，SHP-2）的過(guò)表達(dá)；骨髓重建實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)SHP-2 的過(guò)表達(dá)促進(jìn)了K/BxN 關(guān)節(jié)炎，而使用SHP-2 抑制劑治療可減少RA FLS 的遷移，以及對(duì)腫瘤壞死因子和IL-1β 刺激的反應(yīng)，從而降低小鼠關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度。通過(guò)對(duì)致病基因的異常表觀遺傳學(xué)特征影響FLS 生物學(xué)行為，靶向抑制SHP-2 的表達(dá)可緩解關(guān)節(jié)炎的癥狀，且不會(huì)影響高甲基化CpG 6/CpG 7 對(duì)糖皮質(zhì)激素受體的特異性應(yīng)答，這可能是RA新的治療策略。

研究發(fā)現(xiàn)，在使用緩解病情的抗風(fēng)濕藥物治療的早期RA 患者中，T 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞顯現(xiàn)出普遍的DNA 低甲基化，同時(shí)DNMT1 呈現(xiàn)出低表達(dá)趨勢(shì)。不僅如此，TET（ten-eleven translocation）蛋白1、TET蛋白2、TET蛋白3等涉及DNA 去甲基化的酶呈現(xiàn)出過(guò)表達(dá)趨勢(shì)。而通過(guò)甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）進(jìn)行治療后，發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的甲基化程度降低，B 淋巴細(xì)胞整體甲基化程度增加，且DNMT1 和DNMT3A 的表達(dá)有逆轉(zhuǎn)下降的趨勢(shì)［21］。這一結(jié)果說(shuō)明RA患者的DNA 低甲基化對(duì)某些血細(xì)胞亞群具有特異性，并通過(guò)MTX 治療能夠逆轉(zhuǎn)，而這些變化伴隨著與甲基化有關(guān)的酶水平的平行變化，表明在這一水平上的可調(diào)控性。

有臨床研究表明，接受及時(shí)有效的治療后病情持續(xù)緩解的RA 患者出現(xiàn)長(zhǎng)期殘疾甚至死亡的可能性較小，但同時(shí)有高達(dá)40%的患者在接受治療2年后仍無(wú)效，這一部分患者在炎癥期間由于沒(méi)有對(duì)藥物治療產(chǎn)生反應(yīng)而增加了殘疾的風(fēng)險(xiǎn)［22-23］。盡早識(shí)別與患者治療反應(yīng)相關(guān)的生物標(biāo)志物可及時(shí)為患者制定個(gè)人化治療方案。為探討抗風(fēng)濕藥物治療療效是否與DNA 甲基化有關(guān)，一項(xiàng)研究利用甲基化450 k 芯片對(duì)患者在接受抗風(fēng)濕病學(xué)藥物前后的T淋巴細(xì)胞進(jìn)行全基因組DNA 甲基化分析，發(fā)現(xiàn)其中有6個(gè)CpG 位點(diǎn)在對(duì)藥物治療有反應(yīng)和無(wú)反應(yīng)者之間呈現(xiàn)出明顯差異的甲基化，并且發(fā)現(xiàn)血小板反應(yīng)蛋白基序的解體蛋白和金屬蛋白酶2（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 2，ADAMTSL2）以及嗜丁基蛋白亞家族3 成員A2（butyrophilin subfamily 3 member A2，BTN3A2）基因中的兩個(gè)CpG 位點(diǎn)與治療反應(yīng)密切相關(guān)，提示藥物治療療效與某些位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)相關(guān)［24］。此外，在一項(xiàng)將DNA 甲基化作為RA 腫瘤壞死因子抑制劑（tumor necrosis factor inhibitor，TNFi）治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物的全表觀基因組關(guān)聯(lián)分析研究中，觀察到在無(wú)治療反應(yīng)者中低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白的伴侶蛋白1 基因（low-density lipoprotein receptor-associated protein chaperone1，LRPAP1）的7 號(hào)外顯子中的4個(gè)CpG 位點(diǎn)的甲基化程度高于良好治療反應(yīng)者［25］?？梢园l(fā)現(xiàn)，治療反應(yīng)效果與某些基因位點(diǎn)甲基化程度相關(guān)。在制定治療方案前，若能結(jié)合患者病情和相關(guān)基因甲基化情況，針對(duì)性選擇患者治療反應(yīng)敏感的藥物，可使治療效果達(dá)到最佳，且為患者節(jié)省大量治療時(shí)間，提高患者治愈率。然而治療反應(yīng)效果受多因素影響，且預(yù)測(cè)算法包含了對(duì)一組生物標(biāo)志物的評(píng)估，這些標(biāo)志物可能包括表觀遺傳、遺傳和轉(zhuǎn)錄因子和血清學(xué)，評(píng)估治療反應(yīng)時(shí)還需考慮足夠多的生物標(biāo)志物，因此這可能成為DNA甲基化作為評(píng)估治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物的一大局限性［25］。

4 DNA甲基化作為病情判斷的生物標(biāo)志物

DNA 甲基化通過(guò)對(duì)某些關(guān)鍵致病基因進(jìn)行甲基化修飾，影響其基因表達(dá)而在RA 致病過(guò)程中發(fā)揮作用，且RA 呈慢性進(jìn)行性發(fā)展，在疾病發(fā)展的各個(gè)階段可能具有特定的甲基化特征，因此識(shí)別這些特有的甲基化特征有助于對(duì)疾病發(fā)展的程度及預(yù)后做出準(zhǔn)確的判斷。

研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞色素P4502E1（cytochrome P4502E1，CYP2E1）和雙特異性蛋白磷酸酶22（dual specificity protein phosphatase 22，DUSP22）基因啟動(dòng)子的低甲基化區(qū)域分別與RA 活動(dòng)性和侵蝕性相關(guān)，而SHROOM1 基因在RA 早期與進(jìn)展期FLS 中差異甲基化最為明顯，提示基因甲基化與RA 疾病病情進(jìn)展的關(guān)系密切［26-27］。此外，RA 作為以慢性全身炎癥為特征典型的炎癥關(guān)節(jié)炎，已有研究報(bào)道中性粒 細(xì) 胞/淋 巴 細(xì) 胞 比 值（neutrophil to lymphocyte ratio，NLR）可能成為冠心病、腫瘤以及自身免疫性疾病如RA、大動(dòng)脈炎等疾病發(fā)展的系統(tǒng)性炎癥標(biāo)志物［28-29］。研究發(fā)現(xiàn)從外周血DNA中提取獲得的甲基化NLR（methylation-derived neutrophil to lymphocyte ratio，mdNLR）指數(shù)可以作為一種研究工具來(lái)評(píng)估近期發(fā)生且未經(jīng)過(guò)治療的慢性系統(tǒng)性炎癥（systemic inflammation，SI），mdNLR 與共變量（年齡、性別、吸煙狀態(tài)）相比，在區(qū)分新發(fā)RA 病例和對(duì)照組方面表現(xiàn)更好，用DNA甲基化數(shù)據(jù)評(píng)估的SI可作為RA 近期發(fā)病的標(biāo)志［30］。DNA 甲基化作為RA 新的生物標(biāo)志物及評(píng)價(jià)SI 的可能性促進(jìn)了表觀遺傳學(xué)在臨床研究中的應(yīng)用與發(fā)展。

在技術(shù)手段上，檢測(cè)DNA 甲基化的樣本來(lái)源廣泛，幾乎所有的組織樣本和體液都可以用來(lái)分析DNA 甲基化，包括福爾馬林固定石蠟包埋組織、血斑、頰上皮、外周血、支氣管吸入物、唾液和尿液等［31］。廣泛的檢測(cè)標(biāo)本使這一技術(shù)應(yīng)用到臨床工作中成為可能。然而，DNA 甲基化這一生物標(biāo)志物在應(yīng)用于臨床之前仍面臨著許多問(wèn)題：首先，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的全基因組高通量技術(shù)，降低了DNA 甲基化分析的可信度；其次，DNA 提取和DNA 定量的效率可能會(huì)影響到最終結(jié)果的分析［32］。因此，將DNA甲基化應(yīng)用于臨床之前，逐一克服這些局限性可使表觀遺傳學(xué)更好地服務(wù)于臨床工作。

5 小結(jié)與展望

本文通過(guò)對(duì)DNA甲基化在FLS和PBMC中的研究以及治療領(lǐng)域進(jìn)行了闡述總結(jié)，揭示了某些致病基因的異常甲基化狀態(tài)及其致病機(jī)制，為RA 治療提供了新的研究方向。此外，在RA 發(fā)展的各個(gè)階段鑒別出了有意義的顯著差異甲基化基因，有望成為判斷RA 病情的生物標(biāo)志物。然而，在DNA 甲基化應(yīng)用到臨床研究中還將面對(duì)很多挑戰(zhàn)，鑒定出的差異甲基化基因還需經(jīng)過(guò)更多的實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證。通過(guò)對(duì)DNA 甲基化在RA 中致病機(jī)制的深入研究，有助于我們理解表觀遺傳學(xué)在RA 發(fā)病機(jī)制中的發(fā)揮的作用，并有利于尋找新的治療靶點(diǎn)［33］。