• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    肺炎克雷伯菌生物膜形成及調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展

    2021-03-29 01:51:13郭瑞林
    關(guān)鍵詞:菌毛外排生物膜

    賈 雯,郭瑞林,2

    1陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,陜西咸陽 712000 2陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科,陜西咸陽 712000

    肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae,KPN)是一種醫(yī)院內(nèi)常見感染菌,現(xiàn)也可引起嚴(yán)重的社區(qū)感染,因KPN高產(chǎn)超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶和碳青霉烯酶,2017年WHO已經(jīng)將KPN列為具有“危急威脅”的細(xì)菌[1- 2]。研究表明60%~80%的細(xì)菌感染,尤其是設(shè)備相關(guān)感染和慢性感染是由細(xì)菌形成生物膜引起的,生物膜形成使細(xì)菌對宿主防御機(jī)制的抵抗力增強(qiáng),臨床常規(guī)抗菌治療無效[3- 4]。此外,生物膜可促進(jìn)細(xì)菌間基因水平傳播,主要的機(jī)制有:生物膜形成使細(xì)菌密度增加并降低了菌間的空間距離,為基因水平轉(zhuǎn)移的發(fā)生提供有利條件;生物膜中細(xì)菌質(zhì)粒的拷貝數(shù)及轉(zhuǎn)錄增加,其形成增高了細(xì)菌基因水平轉(zhuǎn)移頻率;同時,也有研究顯示生物膜引起的嚴(yán)格反應(yīng)可上調(diào)細(xì)菌整合子的表達(dá),整合子介導(dǎo)細(xì)菌抗生素耐藥基因的傳播[5- 7]。對KPN的研究顯示生物膜形成與耐碳青霉烯的分離株之間存在顯著相關(guān)性,碳青霉烯類抗生素被稱為“最后的抗生素”,而耐碳青霉烯KPN(carbapenem-resistantKlebsiellapneumoniae,CRKP)除了對多種β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥外,這些菌株的耐藥基因還可以通過水平轉(zhuǎn)移在不同的細(xì)菌物種之間傳播,生物膜的形成使傳播變的更頻繁[3,8]。因此,對KPN生物膜形成因素及調(diào)控機(jī)制的相關(guān)研究是臨床迫切需要解決的問題,也可為臨床抗生物膜感染治療以及新藥研發(fā)提供新的方向。本文就KPN生物膜形成的因素及調(diào)控機(jī)制的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    生物膜的形成

    生物膜是細(xì)菌附著在生物或非生物表面的微生物群落,細(xì)菌從浮游狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樯锬顟B(tài)是一個受到環(huán)境與遺傳因素高度調(diào)控的過程。生物膜形成的過程主要包括:可逆附著階段、細(xì)菌黏附聚集階段、增殖階段、生物膜成熟階段、擴(kuò)散/分離階段。浮游細(xì)菌受環(huán)境刺激對各種環(huán)境信號做出應(yīng)答,附著在物體表面形成菌落;在菌落群體感應(yīng)系統(tǒng)的作用下持續(xù)產(chǎn)生由多糖、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等組成的水合基質(zhì)成熟為大菌落;隨著時間的推移細(xì)菌可以從成熟的生物膜中分離,回到浮游狀態(tài),在新的表面形成生物膜。KPN生物膜的形成主要受菌毛、多糖、群體感應(yīng)系統(tǒng)、外排泵等因素的影響,菌毛和多糖主要發(fā)揮黏附和組成生物膜結(jié)構(gòu)的作用,其中菌毛的黏附作用主要受c-di-GMP分子調(diào)控,莢膜多糖與脂多糖是生物膜形成中多糖黏附的主要成分,其調(diào)控受到環(huán)境中碳源的影響,群體感應(yīng)系統(tǒng)則通過細(xì)菌分泌的信號分子協(xié)調(diào)菌群密度,促進(jìn)生物膜成熟,外排泵的高表達(dá)在成熟生物膜中發(fā)揮作用[9]。

    KPN生物膜形成的影響因素及調(diào)控機(jī)制

    菌毛在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制菌毛是腸桿菌的外部結(jié)構(gòu),主要促進(jìn)細(xì)菌附著介質(zhì)表面、細(xì)菌聚集和生物膜的形成。KPN主要產(chǎn)生Ⅰ型菌毛和Ⅲ型菌毛參與生物膜的形成[10]。Ⅰ型菌毛由Fim基因簇編碼,其中FimA基因編碼的蛋白構(gòu)成菌毛主要亞基,F(xiàn)imH蛋白是位于菌毛尖端的黏附素,主要黏附表面含有甘露糖成分的物質(zhì)如泌尿生殖道上皮細(xì)胞,促進(jìn)生物膜形成,導(dǎo)致難治性尿路感染發(fā)生;由mrkABCDF操縱子編碼的Ⅲ型菌毛,主要由菌毛亞單位MrkA和小分子黏附素MrkD組成,在人體內(nèi)外均介導(dǎo)生物膜的形成。MrkD促進(jìn)KPN黏附不同類型的細(xì)胞如氣管上皮細(xì)胞、腎小管細(xì)胞等,在人體內(nèi)形成生物膜;MrkA則主要黏附于非生物材料表面,啟動KPN在留置的導(dǎo)管和氣管內(nèi)管上形成生物膜[11]。研究顯示KPN產(chǎn)生的KPF菌毛和ECP菌毛可能也參與生物膜的形成,其調(diào)控機(jī)制是否與鐵吸收相關(guān)蛋白Fur蛋白相關(guān)還需進(jìn)一步研究[12- 13]。而KPN菌毛除了在生物膜形成初始階段發(fā)揮作用外,也可維持莢膜多糖結(jié)構(gòu)流動性,這種流動性有利于KPN之間高效黏附以形成成熟穩(wěn)定的生物膜[14- 15]。

    對KPN菌毛的形成進(jìn)行調(diào)控以抑制菌毛表達(dá)或破壞菌毛結(jié)構(gòu),可防止細(xì)菌發(fā)揮黏附作用,影響生物膜形成,有效控制疾病感染[16]。目前發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)KPN發(fā)揮黏附與侵襲作用的膜蛋白的缺失會下調(diào)Ⅰ型菌毛的表達(dá),進(jìn)而減弱細(xì)菌的黏附定植能力。研究顯示三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)家族的Sap(sensitivity to antimicrobial peptides,Sap)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是KPN黏附人肝細(xì)胞和各種上皮細(xì)胞(如腸、肺和膀胱上皮細(xì)胞)的必需蛋白,SapA蛋白缺失的KPN可顯著下調(diào)Ⅰ型菌毛FimA蛋白的表達(dá),明顯降低KPN腸道定植能力[17]。同時,有研究表明細(xì)胞內(nèi)增殖F(intracellular multiplication F,IcmF)家族蛋白是組成Ⅳ型分泌系統(tǒng)T6SS的保守內(nèi)膜蛋白,促進(jìn)KPN在宿主體內(nèi)的黏附與侵襲,而IcmF1/IcmF2蛋白缺失的突變株下調(diào)Ⅰ型菌毛轉(zhuǎn)錄表達(dá),降低KPN定植能力,但具體調(diào)控機(jī)制還需進(jìn)一步研究[18]。脂蛋白BamB是錨定在革蘭陰性菌外膜蛋白周質(zhì)面的輔助結(jié)構(gòu)蛋白,其表達(dá)缺失使KPN的Fim基因轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào),Ⅰ型菌毛產(chǎn)生降低32倍,但因脂蛋白BamB缺失表達(dá)影響外膜結(jié)構(gòu)的完整性,對Ⅰ型菌毛的調(diào)控還需進(jìn)一步研究[19]。除了Ⅰ型菌毛,大量研究表明Ⅲ型菌毛是KPN生物膜形成的主要影響因子,對它表達(dá)的調(diào)控可顯著下調(diào)生物膜的形成。c-di-GMP是一種受體廣泛的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可協(xié)調(diào)細(xì)菌多種生理過程以利于細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境變化。研究表明c-di-GMP通過調(diào)節(jié)與Ⅲ型菌毛基因簇相鄰的操縱子mrkHIJ影響菌毛的合成,其中MrkI是LuxR型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可激活其自身的操縱子并調(diào)節(jié)Ⅲ型菌毛表達(dá),MrkH是Ⅲ型菌毛基因簇的核心轉(zhuǎn)錄激活因子,與c-di-GMP結(jié)合正反饋激活Ⅲ型菌毛表達(dá),是引發(fā)生物膜形成的主要機(jī)制,這使其成為防止生物膜形成的理想靶標(biāo),而MrkJ通過編碼磷酸二酯酶降解c-di-GMP,從而影響MrkH轉(zhuǎn)錄激活因子的活性,抑制Ⅲ型菌毛表達(dá)[20]。組蛋白樣核苷結(jié)構(gòu)蛋白H-NS是Ⅲ型菌毛基因表達(dá)的正調(diào)節(jié)劑,在H-NS缺失的情況下,mrkA基因表達(dá)被抑制,KPN生物膜形成減少了10倍[21]。不同的環(huán)境刺激菌毛的調(diào)控機(jī)制也不同,如可感應(yīng)滲透信號OmpR/EnvZ雙組份調(diào)節(jié)系統(tǒng)和含F(xiàn)e-S簇的轉(zhuǎn)錄因子IscR分別在高滲環(huán)境下和含鐵的環(huán)境下通過直接或者間接影響c-di-GMP水平調(diào)控Ⅲ型菌毛的形成[22- 23];人體內(nèi)的肺表面活性劑磷脂酰膽堿和膽固醇也可誘導(dǎo)mrkA啟動子的轉(zhuǎn)錄提高Ⅲ型菌毛的表達(dá)介導(dǎo)KPN生物膜形成[24]。第二信使環(huán)狀單磷酸腺苷cAMP-cAMP受體蛋白(cyclic AMP receptor protein,CRP)也是全局調(diào)節(jié)蛋白之一,主要參與細(xì)菌的碳代謝物抑制過程,近期研究表明,其也可作用于Ⅰ型和Ⅲ型菌毛調(diào)控機(jī)制介導(dǎo)菌毛表達(dá)[25],并且在Ⅲ型菌毛的mrk操縱子上游區(qū)域,發(fā)現(xiàn)了潛在的CRP結(jié)合位點,可正調(diào)控該操縱子的表達(dá),促進(jìn)Ⅲ型菌毛的合成[26]。菌毛起源于細(xì)菌膜內(nèi)側(cè)基粒上,目前已發(fā)現(xiàn)KPN膜蛋白表達(dá)的完整性對菌毛表達(dá)和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性起至關(guān)重要的作用,但具體的作用蛋白和調(diào)控靶點還需進(jìn)一步地探索。同時,高效轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子c-di-GMP和cAMP-CRP均促進(jìn)菌毛形成,二者之間是否有相互作用也可作為未來研究方向以促進(jìn)深入了解菌毛的調(diào)控過程,為有效阻止生物膜形成打下基礎(chǔ)。

    多糖在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制細(xì)菌生長產(chǎn)生的多糖主要起保護(hù)、黏附和組成生物膜結(jié)構(gòu)的作用。多糖不僅能包裹在細(xì)菌表面形成多孔支架結(jié)構(gòu)阻止或限制有害分子的滲透,還可以與抗菌肽相互作用,阻止其殺傷細(xì)菌;聚集的多糖促進(jìn)細(xì)菌間和細(xì)菌與介質(zhì)間黏附,有利于細(xì)菌定殖;而且多糖還可以與蛋白質(zhì)等大分子形成網(wǎng)絡(luò)為生物膜提供穩(wěn)定結(jié)構(gòu),使細(xì)菌群落分層并建立濃度梯度[27]。參與KPN生物膜形成與成熟的多糖主要為莢膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)。

    CPS在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制:部分臨床分離的KPN會產(chǎn)生一種黏液樣的基質(zhì)包裹在細(xì)菌細(xì)胞壁外層被稱為莢膜。除含有大量的水分外,其組成大多為多糖類物質(zhì),是K抗原的主要成分。CPS主要通過穩(wěn)定KPN在基質(zhì)上的黏附性于生物膜的初始形成過程中發(fā)揮作用,并且通過調(diào)整細(xì)菌的空間分布規(guī)則進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)菌聚集,促進(jìn)KPN形成具有典型三維結(jié)構(gòu)的成熟生物膜[27- 28]。同時,CPS還可通過降低炎性因子抑制或損傷宿主細(xì)胞的吞噬作用,有效保護(hù)生物膜內(nèi)菌體免受或少受如溶菌酶、補(bǔ)體、抗菌肽等多種殺菌/抑菌物質(zhì)的損傷,使細(xì)菌高效的適應(yīng)環(huán)境變化[29]。多糖分子組成和構(gòu)型的多樣性,使莢膜結(jié)構(gòu)極為復(fù)雜,目前至少已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有79種類型的莢膜[30],其中K1、K2、K20、K57莢膜血清型常與高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulentKlebsiellapneumoniae,HvKP)相關(guān)[31]。HvKP主要常見于亞洲地區(qū),因能產(chǎn)生大量CPS,致病性較強(qiáng),可在健康人群中形成如化膿性肝膿腫、眼內(nèi)炎等嚴(yán)重感染,是社區(qū)醫(yī)院的嚴(yán)重危害菌[2]。研究顯示HvKP與生物膜形成顯著相關(guān),且K1型HvKP中參與CPS鏈接形成的聚合酶magA基因的高表達(dá)導(dǎo)致HvKP在氣液界面處形成生物膜[32]。同時,高毒力CRKP的產(chǎn)生無疑可能會成為下一個“超級細(xì)菌”,生物膜的形成將加重其危害程度,應(yīng)引起臨床高度重視[33- 34]。

    對KPN CPS進(jìn)行分析顯示[30],cps基因簇負(fù)責(zé)編碼KPN CPS,在cps基因簇的5’端有6個高度保守的基因組(galF、cpsACP、wzi、wza、wzb、wzc),主要編碼CPS合成轉(zhuǎn)運(yùn)和加工的蛋白質(zhì);在3’端發(fā)現(xiàn)編碼葡萄糖- 6-磷酸脫氫酶和UDP-葡萄糖脫氫酶的保守基因,是合成CPS的基礎(chǔ);而中間區(qū)域(可變區(qū)域)主要包含編碼 CPS 亞基聚合和組裝的基因,如編碼糖基轉(zhuǎn)移酶、轉(zhuǎn)位酶、聚合酶和修飾酶(乙?;D(zhuǎn)移酶、丙酮酰基轉(zhuǎn)移酶等)的基因,因其表達(dá)差異性,導(dǎo)致CPS結(jié)構(gòu)多樣,豐富了K抗原類型[35]。研究顯示莢膜的K抗原血清型的特異性與wzi/wzy基因座的序列高度相關(guān),對這些基因座進(jìn)行測序可對KPN的K抗原血清型進(jìn)行分型[30,36],為臨床早期發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重致病菌提供依據(jù),及時進(jìn)行早期治療。

    KPN CPS的調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜,目前發(fā)現(xiàn)的調(diào)控因子主要有:CsrB碳源利用系統(tǒng)、RcsAB雙組份系統(tǒng)、rmpA/rmpA2蛋白、KvrB、KvrA、KvgA、KvhA、KvhR和Fur蛋白。其中較為主要的是CsrB碳源利用系統(tǒng)和RcsAB雙組份系統(tǒng),這些系統(tǒng)本身都受多個基因的調(diào)控:CsrB是碳儲存調(diào)控小RNA,它整合了來自UvrY-Bara二組分系統(tǒng)和各種碳代謝基因的信號,被DksA激活后,促進(jìn)cps基因轉(zhuǎn)錄,提高CPS的產(chǎn)生,可被CsrD靶向降解[37];RcsAB是一種非典型的兩組分調(diào)節(jié)系統(tǒng),在galF基因啟動子區(qū)域存在RcsAB轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特定DNA序列,正向調(diào)節(jié)CPS的產(chǎn)生,rcsAB基因敲除菌株的CPS產(chǎn)生水平和生物膜形成能力均降低。同時,RcsB對CPS合成的調(diào)控也取決于rmpA蛋白的輔助作用[38]。rmpA/rmpA2蛋白通過與cps基因啟動子區(qū)域的靶位結(jié)合正向調(diào)控cps基因的轉(zhuǎn)錄使KPN高表達(dá)CPS,且rmpA/rmpA2蛋白與HvKP菌株高度相關(guān)[39]。在KPN中發(fā)現(xiàn)KvrA和KvrB(與大腸桿菌的SlyA和MprA同源)屬于MarR調(diào)節(jié)蛋白家族,MarR調(diào)節(jié)蛋白家族主要影響細(xì)菌抗生素抗性和莢膜調(diào)節(jié)因子的表達(dá)。對大腸桿菌研究顯示,SlyA是H-NS的拮抗劑,H-NS可抑制KPN中RcsA表達(dá),SlyA解除H-NS介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄沉默促進(jìn)莢膜合成;MprA是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,影響莢膜的合成[40]。而KPN中KvrA基因和KvrB基因缺失的突變菌株表現(xiàn)出CPS產(chǎn)量的減少,但其是否通過驅(qū)動cps基因的啟動子調(diào)節(jié)莢膜表達(dá)還有待研究[41]。環(huán)境因素也影響莢膜的表達(dá),研究顯示感應(yīng)環(huán)境中的自由基壓力和缺鐵環(huán)境的KvgA/KvgS雙組份調(diào)節(jié)系統(tǒng),在壓力環(huán)境下,反應(yīng)調(diào)節(jié)因子KvgA通過作用于orf基因激活cps基因的表達(dá),且KvgA 是 KvhA和KvhR表達(dá)的自動調(diào)節(jié)子和激活子,即:這3個同源應(yīng)答調(diào)節(jié)劑相互協(xié)調(diào)控制莢膜的表達(dá)[42]。當(dāng)KPN生活在富含鐵的環(huán)境中時,莢膜多糖的表達(dá)被降低,這主要是因為Fur蛋白抑制了基因rmpA和RcsA的轉(zhuǎn)錄[43]。碳水化合物磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)可轉(zhuǎn)運(yùn)和磷酸化環(huán)境中存在的各種糖以供細(xì)菌生長。在KPN中發(fā)現(xiàn)碳水化合物磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)通過調(diào)節(jié)CPS大量形成導(dǎo)致生物膜形成增加[44]。CPS的高表達(dá)不僅在KPN的免疫殺傷及生物膜形成和成熟過程中發(fā)揮作用,也是HvKP的重要毒力因子可引起嚴(yán)重感染。CPS的調(diào)控除受到環(huán)境中碳源的影響外,調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子之間的相互作用也是未來需要進(jìn)一步研究的方向。

    LPS在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制:LPS是革蘭陰性菌細(xì)胞膜的主要成分,由脂質(zhì)A、核心多糖和O抗原組成。KPN生物膜形成過程中LPS參與KPN與非生物表面的初始黏附,研究表明O抗原除作為一個重要的毒力因子可保護(hù)細(xì)菌免受宿主損傷,利于細(xì)菌定植感染,且當(dāng)KPN處在模仿體內(nèi)血液循環(huán)系統(tǒng)的環(huán)境時,CPS和O抗原是生物膜初始聚集體形成的基本物質(zhì)[45]。KPN中LPS和CPS并非完全獨(dú)立地產(chǎn)生,在LPS生物合成中起重要作用的酶也影響KPN CPS的數(shù)量和結(jié)構(gòu)[46]。KPN LPS生物合成和輸出涉及4個不同的基因簇:lpx、waa、rfb、lpt,其中編碼脂多糖O抗原合成的核心基因簇為rfb基因組,主要由wzm、wzt、wbbM、glf、wbbN、wbbO等6個編碼基因組成[47],其合成由3種類型的酶完成:核苷酸激活糖的生物合成、多糖重復(fù)單元的合成以及重復(fù)單元的組裝和跨膜運(yùn)輸(脂肪酶),主要依賴于三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白途徑調(diào)控[48- 49]。將LPS的合成機(jī)制作為靶點進(jìn)行攻擊,不僅影響莢膜與生物膜的形成,也可延緩疾病的惡化發(fā)展[47,49]。

    脂質(zhì)A作為模式識別受體TLR4的有效配體可被宿主免疫系統(tǒng)識別清除,但KPN通過修飾脂質(zhì)A的結(jié)構(gòu)可逃避免疫系統(tǒng)的殺傷。KPN脂質(zhì)A的生物合成主要由lpx基因編碼產(chǎn)物參與、PhoPQ兩組分系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。脂質(zhì)A在PhoPQ調(diào)節(jié)的加氧酶lpxO和lpxL基因編碼的脂質(zhì)A修飾酶的作用下,可介導(dǎo)KPN對吞噬作用的抵抗性、逃避宿主的先天免疫、保護(hù)KPN免受多黏菌素的侵害[50- 51]。有研究顯示MgrB是一種小的(47個氨基酸)膜結(jié)合肽,是PhoPQ兩組分調(diào)節(jié)系統(tǒng)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)劑,mgrB基因突變使PhoPQ調(diào)控脂質(zhì)A重塑,賦予KPN對多黏菌素和哺乳動物抗菌肽的抗性[52]。另外,lpxL2酶為lpxL基因編碼產(chǎn)物的主要成分,lpxO介導(dǎo)的lpxL2轉(zhuǎn)移肉豆蔻酸酯的羥化作用,主要參與脂質(zhì)A?;饔?,由于lpxL2和lpxO基因的突變,使KPN易受抗菌肽的影響[51]。多黏菌素是治療CRKP感染的有效藥物之一,脂質(zhì)A修飾功能導(dǎo)致KPN對多黏菌素產(chǎn)生耐藥性,因此,對脂質(zhì)A修飾機(jī)制的研究可作為KPN藥物開發(fā)的候選靶標(biāo)。

    群體感應(yīng)系統(tǒng)在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制因生物膜形成的動態(tài)性和環(huán)境刺激的變異性,細(xì)菌必須具有快速、廣泛協(xié)調(diào)微生物群體中基因表達(dá)信號的能力,這一過程主要受群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)系統(tǒng)調(diào)控,QS系統(tǒng)是細(xì)菌群體密度信號的感受系統(tǒng),細(xì)菌自身通過分泌自誘導(dǎo)信號分子相互溝通,響應(yīng)種群密度的變化調(diào)節(jié)生物學(xué)功能,以適應(yīng)環(huán)境變化,QS系統(tǒng)在生物膜形成全程發(fā)揮作用[53]。KPN的QS系統(tǒng)主要包括 Ⅰ 型和 Ⅱ 型,分別分泌AI- 1和 AI- 2自誘導(dǎo)信號分子。Ⅰ型QS系統(tǒng)是細(xì)菌種內(nèi)交流的高度特異性系統(tǒng),其AI- 1信號分子由LuxI基因編碼的酶催化合成,LuxR蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控AI- 1信號分子組成,而Ⅱ型QS系統(tǒng)與Ⅰ型QS系統(tǒng)不同,Ⅱ型QS系統(tǒng)還具有種間交流的功能,即它不僅能使細(xì)菌響應(yīng)自身產(chǎn)生的AI- 2,還可以響應(yīng)其他物種產(chǎn)生的AI- 2[54- 55]。AI- 2信號分子在KPN生物膜形成中起主要作用,不僅促進(jìn)KPN生物膜的形成與成熟,對生物膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性也造成一定的影響,其產(chǎn)生依賴于luxS基因。研究顯示KPN協(xié)調(diào)單個細(xì)菌間分泌的AI- 2濃度達(dá)到閾值時,可觸發(fā)信號傳導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng),誘導(dǎo)CPS、LPS、菌毛等多種基因(如wzm、wbbM、mrkA等)的表達(dá),啟動生物膜的形成,誘導(dǎo)生物膜成熟;此外,另一研究表明KPN的luxS基因缺失突變株,與野生菌相比,突變株產(chǎn)生的生物膜結(jié)構(gòu)疏松,大菌落的形成減少[55- 56]。同時,QS信號分子也可直接或間接地作用于第二信使如c-di-GMP 和cAMP,將復(fù)雜的環(huán)境信息信號轉(zhuǎn)換為一般細(xì)胞內(nèi)信號,促進(jìn)生物膜形成。對群體淬滅劑和QS抑制劑的研究顯示,通過抑制QS系統(tǒng)的信號分子的表達(dá),可顯著下調(diào)生物膜的形成與成熟[57- 58]?;贙PN對臨床抗菌藥物的高度耐藥以及生物膜的形成使耐藥情況加劇發(fā)展的現(xiàn)狀,QS在生物膜形成過程中的調(diào)控功能使群體淬滅劑和QS抑制劑被認(rèn)為是開發(fā)新的抗感染藥物有前景的靶標(biāo)。同時,細(xì)菌往往在非理想生存條件下與多個物種混合生長,QS介導(dǎo)的細(xì)菌行為在細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境變化中起中心作用。未來,應(yīng)模擬細(xì)菌自然生態(tài)位,集中研究在細(xì)菌生物膜空間結(jié)構(gòu)和/或非理想條件下細(xì)菌之間的通訊是如何運(yùn)作的,以阻止有害細(xì)菌的群體感應(yīng),促進(jìn)有益細(xì)菌的群體感應(yīng)。

    外排泵在KPN生物膜形成的作用及調(diào)控機(jī)制細(xì)菌細(xì)胞膜中介導(dǎo)主動和被動轉(zhuǎn)運(yùn)的外排泵和孔蛋白可用于溝通菌體內(nèi)外的信息,利于細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境變化。有證據(jù)表明外排泵的產(chǎn)生與生物膜形成有關(guān),可能的機(jī)制為:外排泵可外排形成多糖和QS系統(tǒng)所需分子;可間接調(diào)控參與生物膜形成的轉(zhuǎn)錄因子;通過影響細(xì)菌和其他表面的黏附促進(jìn)聚集[59]。對外排泵抑制劑的研究顯示,外排泵抑制劑與抗菌藥協(xié)同作用顯著降低KPN生物膜形成[60]。研究顯示多重耐藥KPN外排泵編碼基因的上調(diào)表達(dá)使其生物膜形成能力較敏感株強(qiáng)[61]。同時僅在產(chǎn)生生物膜的泛耐藥KPN中發(fā)現(xiàn)AcrAB外排泵的上調(diào)表達(dá),外排泵導(dǎo)致的KPN耐藥性與生物膜形成能力顯著正相關(guān)[9]。在CRKP菌株中發(fā)現(xiàn),VIM- 1與IMP- 1耐藥基因與生物膜形成存在顯著相關(guān)性,但具體的機(jī)制還需進(jìn)一步研究[62]。而KPN生物膜的形成會上調(diào)acrA、emrB、oqxA、qacEΔ1等外排泵基因的表達(dá),進(jìn)一步增加細(xì)菌的耐藥性,利于細(xì)菌在抗菌素條件下存活[63]。即,KPN外排泵的表達(dá)與生物膜的形成是相輔相成的,對于抑制細(xì)菌外排泵表達(dá)的因素也會影響生物膜的形成。但對外排泵確切在生物膜形成中的作用的研究較少,沒有直接的證據(jù)表明抑制特定的外排泵會如何影響生物膜的形成。因此,研究高效的外排泵抑制劑與質(zhì)譜法和代謝組學(xué)研究相結(jié)合,確定受抑制影響的同源外排泵底物,可能是發(fā)現(xiàn)外排泵確切作用的一個有效手段。

    KPN易形成生物膜,且對臨床分離的CRKP菌株研究顯示其不僅形成生物膜能力較強(qiáng),且形成生物膜后導(dǎo)致CRKP感染死亡率升高[8,64- 65],但也有部分研究表明CRKP菌株形成生物膜的能力較弱,可能是因為CRKP菌株缺失了與生物膜形成相關(guān)重要基因的表達(dá),如調(diào)控菌毛形成的MrkH基因;也發(fā)現(xiàn)CRKP菌株中高黏液型形成生物膜能力較不產(chǎn)黏液型形成生物膜的能力弱,可能是CPS的高表達(dá)覆蓋了菌毛,導(dǎo)致細(xì)菌無法黏附于生物表面,從而生物膜形成減弱[64,66]。在KPN生物膜的形成過程中,細(xì)菌菌毛的表達(dá)直接影響生物膜的初始黏附與形成,同時菌毛可維持CPS流動性使多糖發(fā)揮保護(hù)細(xì)菌免受宿主與環(huán)境作用的殺傷、促進(jìn)細(xì)菌黏附聚集、穩(wěn)定生物膜初始形成的作用,從而形成穩(wěn)固的空間結(jié)構(gòu)促進(jìn)生物膜成熟。細(xì)菌形成初始黏附與聚集后,群落密集系統(tǒng)信號分子通過協(xié)調(diào)菌毛與多糖的表達(dá),募集空間環(huán)境中細(xì)菌以形成成熟的生物膜。而外排泵與生物膜形成是相輔相成的,在生物膜初始形成中外排泵主要負(fù)責(zé)生物膜形成物質(zhì)的外排,生物膜成熟后則進(jìn)一步促進(jìn)外排泵的表達(dá)利于菌株生存。因此,菌毛的表達(dá)在生物膜形成中發(fā)揮較為重要的作用。

    展 望

    KPN在全球范圍的流行,尤其CRKP菌株的產(chǎn)生及其耐藥基因的廣泛傳播,對人類健康造成嚴(yán)重威脅。高毒力型KPN和多重耐藥型KPN與生物膜形成顯著的相關(guān)性更是醫(yī)院內(nèi)感染控制的首要目標(biāo)。KPN生物膜的形成過程中菌毛和多糖發(fā)揮初始生物膜形成作用,群落感應(yīng)系統(tǒng)則協(xié)調(diào)二者的表達(dá)以形成成熟生物膜,外排泵的高表達(dá)與生物膜形成相輔相成。目前對KPN生物膜形成及調(diào)控機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)通過抑制菌毛表達(dá)、破壞菌毛結(jié)構(gòu)、攻擊多糖形成及修飾靶點可顯著抑制生物膜的形成,有效控制感染,如MrkH表達(dá)抑制劑、高親和力單價和多價FimH拮抗劑以及作為抗生素研發(fā)靶標(biāo)的脂質(zhì)A合成酶(LpxA、LpxB、LpxC、LpxD)和CPS、LPS合成基因wzm、wzt被廣泛研究,同時還有CPS和LPS疫苗的研發(fā)正在進(jìn)行。但是,KPN多糖成分的異質(zhì)性、糖苷鍵、立體異構(gòu)形式以及參與生物合成和運(yùn)輸?shù)牡鞍踪|(zhì)的伴隨變異可能是設(shè)計對抗多種克雷伯菌屬的抗生素和疫苗的一大挑戰(zhàn)。通過抗生素基因測序技術(shù)結(jié)合宏基因組學(xué)方法對KPN臨床菌株進(jìn)行研究將有助于設(shè)計多價疫苗以控制感染。同時發(fā)現(xiàn)群體感應(yīng)系統(tǒng)可直接或者間接地調(diào)節(jié)c-di-GMP和cAMP-CRP影響菌毛和CPS生成,有大量研究表明c-di-GMP在生物膜形成中的作用,未來可著重研究cAMP-CRP如何影響生物膜形成及與c-di-GMP之間有無相互作用。對群體淬滅劑和QS抑制劑的研究顯示,它們可通過抑制LuxS基因的表達(dá)以減弱AI- 2分子的合成影響生物膜形成與成熟,未來也可將這些物質(zhì)作為抗生物膜形成和預(yù)防控制細(xì)菌感染的新藥進(jìn)行研發(fā),但這些物質(zhì)對生物膜形成具體的作用機(jī)制以及對人體的影響仍需進(jìn)一步探索,而通過將質(zhì)譜法和代謝組學(xué)研究方法相結(jié)合,可能是一個有效的研發(fā)手段。

    猜你喜歡
    菌毛外排生物膜
    幽門螺桿菌生物膜的研究進(jìn)展
    生物膜胞外聚合物研究進(jìn)展
    膠東國際機(jī)場1、4號外排渠開挖支護(hù)方案研究
    外排體促進(jìn)骨再生的研究進(jìn)展
    三排式吻合器中的雙吻合釘推進(jìn)器對
    產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌菌毛的研究進(jìn)展
    光動力對細(xì)菌生物膜的作用研究進(jìn)展
    NY3菌固定化及生物膜處理含油廢水的研究
    腸炎沙門氏菌SEF14菌毛研究進(jìn)展
    沙門氏菌菌毛研究進(jìn)展
    久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av福利一区| 黄色毛片三级朝国网站| 中文字幕免费在线视频6| 日韩成人伦理影院| 中文天堂在线官网| 国产精品免费大片| 欧美精品亚洲一区二区| 久久这里有精品视频免费| 中文字幕人妻丝袜制服| 十分钟在线观看高清视频www| 国精品久久久久久国模美| 一边摸一边做爽爽视频免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲怡红院男人天堂| 日韩成人av中文字幕在线观看| 99热全是精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产黄色免费在线视频| 精品一区在线观看国产| 少妇 在线观看| 国产成人精品一,二区| 国产av精品麻豆| 成人国产麻豆网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日本黄色片子视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 最新中文字幕久久久久| videossex国产| 内地一区二区视频在线| 大陆偷拍与自拍| 99热国产这里只有精品6| 精品少妇久久久久久888优播| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩欧美一区视频在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产日韩欧美亚洲二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久人人爽人人爽人人片va| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费人成在线观看视频色| 男女免费视频国产| 夫妻午夜视频| 天堂俺去俺来也www色官网| kizo精华| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产亚洲最大av| 水蜜桃什么品种好| 在线精品无人区一区二区三| 99热国产这里只有精品6| 日日爽夜夜爽网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲天堂av无毛| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美丝袜亚洲另类| 精品酒店卫生间| 精品国产乱码久久久久久小说| 色视频在线一区二区三区| 亚洲成人一二三区av| 尾随美女入室| 久久久久精品久久久久真实原创| 国模一区二区三区四区视频| 国产高清三级在线| 久久久亚洲精品成人影院| 有码 亚洲区| 国产精品一区www在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产黄频视频在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| www.色视频.com| 日韩av免费高清视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜老司机福利剧场| 性色avwww在线观看| 大香蕉97超碰在线| 麻豆乱淫一区二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久婷婷青草| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 桃花免费在线播放| 日韩成人av中文字幕在线观看| 性色avwww在线观看| 下体分泌物呈黄色| 国产一级毛片在线| 秋霞伦理黄片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 在现免费观看毛片| 18禁观看日本| 国产不卡av网站在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美+日韩+精品| 五月开心婷婷网| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 99国产综合亚洲精品| 三级国产精品欧美在线观看| 国产永久视频网站| 成人国产麻豆网| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 久久精品夜色国产| 少妇 在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 高清毛片免费看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 51国产日韩欧美| 少妇精品久久久久久久| 不卡视频在线观看欧美| 寂寞人妻少妇视频99o| 91国产中文字幕| 最近最新中文字幕免费大全7| 青青草视频在线视频观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩一区二区三区影片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 最新的欧美精品一区二区| 桃花免费在线播放| 国产成人av激情在线播放 | 免费少妇av软件| 国产精品.久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲av男天堂| 18禁在线播放成人免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 免费看av在线观看网站| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲图色成人| 97超碰精品成人国产| 成人免费观看视频高清| 日本-黄色视频高清免费观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 少妇人妻 视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产免费视频播放在线视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲人成网站在线播| 日本91视频免费播放| 亚洲国产精品999| 精品酒店卫生间| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇人妻 视频| 国产男女内射视频| 热re99久久国产66热| 久久精品夜色国产| 波野结衣二区三区在线| 在线观看三级黄色| 国产精品久久久久久久久免| 中文天堂在线官网| 丝袜美足系列| 亚洲无线观看免费| 777米奇影视久久| 少妇熟女欧美另类| www.av在线官网国产| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 丝袜脚勾引网站| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日韩三级伦理在线观看| 婷婷成人精品国产| 欧美日韩综合久久久久久| 精品久久久久久久久av| 内地一区二区视频在线| 永久免费av网站大全| 国产成人av激情在线播放 | 欧美日韩在线观看h| 毛片一级片免费看久久久久| 18+在线观看网站| 哪个播放器可以免费观看大片| 一级毛片我不卡| 久热这里只有精品99| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品久久久久久精品电影小说| 99re6热这里在线精品视频| 国产成人免费观看mmmm| 99热6这里只有精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 日韩三级伦理在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 在线观看一区二区三区激情| 精品久久久久久久久亚洲| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久精品免费免费高清| 男人操女人黄网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人妻一区二区av| 久久久久久久久大av| 一级黄片播放器| 久久久久久久久久久免费av| 制服人妻中文乱码| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲第一区二区三区不卡| av天堂久久9| 老熟女久久久| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品久久久精品久久久| 亚洲无线观看免费| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久久久精品精品| 国产高清三级在线| 成人国产麻豆网| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产又色又爽无遮挡免| 久久久久久久久久久久大奶| 大片电影免费在线观看免费| 国内精品宾馆在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产成人精品婷婷| 丰满乱子伦码专区| 亚洲综合精品二区| 国产高清三级在线| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲av男天堂| 热99国产精品久久久久久7| 成年女人在线观看亚洲视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 男女边吃奶边做爰视频| 少妇 在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 在线天堂最新版资源| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 美女主播在线视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 五月开心婷婷网| 精品一区二区免费观看| 简卡轻食公司| 97超碰精品成人国产| 黄片无遮挡物在线观看| 免费观看性生交大片5| 丁香六月天网| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 亚洲人成网站在线观看播放| 免费高清在线观看视频在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲人与动物交配视频| 国产探花极品一区二区| 最新的欧美精品一区二区| 青青草视频在线视频观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲中文av在线| 久久久久久久久大av| 亚洲,一卡二卡三卡| 妹子高潮喷水视频| 亚洲中文av在线| 男女国产视频网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 美女内射精品一级片tv| 尾随美女入室| 日日撸夜夜添| 高清毛片免费看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日本欧美国产在线视频| 欧美日韩综合久久久久久| 国产高清有码在线观看视频| 99国产精品免费福利视频| 日韩av免费高清视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 人人妻人人澡人人看| 人妻系列 视频| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久久久久久久免费av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 丰满乱子伦码专区| 精品人妻在线不人妻| 精品国产一区二区久久| 蜜桃国产av成人99| 国产精品一国产av| 久久久精品区二区三区| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产av码专区亚洲av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久久久国产网址| 免费观看性生交大片5| 在线播放无遮挡| 一级片'在线观看视频| av线在线观看网站| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品一二三区在线看| 中文天堂在线官网| 国产精品一区www在线观看| 免费观看在线日韩| 一区二区三区免费毛片| 国产精品一区二区在线观看99| 色视频在线一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 另类亚洲欧美激情| 男女国产视频网站| 另类亚洲欧美激情| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日本欧美视频一区| 国产成人精品婷婷| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 色吧在线观看| av在线老鸭窝| 五月玫瑰六月丁香| 成人综合一区亚洲| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 三级国产精品片| 久久免费观看电影| a 毛片基地| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久精品国产自在天天线| 韩国av在线不卡| 国产精品久久久久久久电影| 免费观看性生交大片5| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜福利,免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美三级亚洲精品| 亚洲综合精品二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 丰满少妇做爰视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品国产国语对白av| 五月开心婷婷网| 久久97久久精品| 免费看光身美女| 一级二级三级毛片免费看| 国产av一区二区精品久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美精品高潮呻吟av久久| 美女国产视频在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 老熟女久久久| 色吧在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 少妇的逼好多水| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美精品国产亚洲| 日韩一区二区视频免费看| 久久人人爽人人爽人人片va| 99久久精品一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲精品一二三| 久久ye,这里只有精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 熟女av电影| 精品久久久久久久久av| 国产成人午夜福利电影在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品久久午夜乱码| 黄色一级大片看看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 夫妻性生交免费视频一级片| 性色avwww在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲精品日本国产第一区| 永久免费av网站大全| 五月天丁香电影| 男女免费视频国产| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 在线观看www视频免费| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜精品国产一区二区电影| 99热网站在线观看| 国产色婷婷99| 日韩强制内射视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久鲁丝午夜福利片| 日日爽夜夜爽网站| 大陆偷拍与自拍| 亚洲精品国产av成人精品| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产一区二区三区av在线| 亚洲精品456在线播放app| 国产熟女午夜一区二区三区 | 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产色婷婷99| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 一区二区三区精品91| 久久99热6这里只有精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产精品99久久久久久久久| av国产精品久久久久影院| 精品酒店卫生间| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 最近手机中文字幕大全| 国产免费一级a男人的天堂| 水蜜桃什么品种好| 欧美精品一区二区免费开放| 免费黄网站久久成人精品| 日本vs欧美在线观看视频| 丝袜喷水一区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 涩涩av久久男人的天堂| 在线观看三级黄色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 男男h啪啪无遮挡| 人体艺术视频欧美日本| 久久久久精品性色| 只有这里有精品99| 中文字幕制服av| 少妇人妻 视频| 久久久国产欧美日韩av| 国国产精品蜜臀av免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 午夜福利视频精品| 国产精品久久久久久久电影| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品成人在线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产av一区二区精品久久| 9色porny在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 插阴视频在线观看视频| av网站免费在线观看视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 一区在线观看完整版| 亚洲图色成人| 一边亲一边摸免费视频| 午夜福利,免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 熟女电影av网| 少妇人妻精品综合一区二区| 男人操女人黄网站| 涩涩av久久男人的天堂| 多毛熟女@视频| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲成人手机| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 青春草国产在线视频| 久久精品国产自在天天线| 精品亚洲成国产av| 色哟哟·www| 高清视频免费观看一区二区| 午夜91福利影院| 两个人的视频大全免费| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲内射少妇av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| av女优亚洲男人天堂| 亚洲精品视频女| 亚洲国产欧美日韩在线播放| av免费在线看不卡| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 精品熟女少妇av免费看| 99久国产av精品国产电影| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久久网色| 国产成人一区二区在线| 欧美最新免费一区二区三区| 99久久综合免费| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久久久久精品精品| 99国产精品免费福利视频| 黄色怎么调成土黄色| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | av女优亚洲男人天堂| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 嫩草影院入口| 看免费成人av毛片| 亚洲情色 制服丝袜| 蜜桃在线观看..| 伦理电影免费视频| 两个人免费观看高清视频| 国产成人精品婷婷| 欧美97在线视频| 日本vs欧美在线观看视频| 内地一区二区视频在线| 哪个播放器可以免费观看大片| 99热这里只有是精品在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费观看的影片在线观看| 插逼视频在线观看| 美女内射精品一级片tv| 亚洲国产精品专区欧美| 国产免费又黄又爽又色| 久久久久久久精品精品| 欧美xxⅹ黑人| 欧美亚洲日本最大视频资源| av又黄又爽大尺度在线免费看| 在线播放无遮挡| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品视频女| 久久精品国产亚洲av天美| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久久网色| 少妇被粗大猛烈的视频| 日韩视频在线欧美| 亚洲色图综合在线观看| 我的老师免费观看完整版| 妹子高潮喷水视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲,欧美,日韩| 最后的刺客免费高清国语| 日韩一本色道免费dvd| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品三级大全| 久久久国产精品麻豆| 久久久久精品性色| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 秋霞伦理黄片| 亚洲成人手机| 2022亚洲国产成人精品| 91成人精品电影| 亚洲情色 制服丝袜| 日本免费在线观看一区| 成人二区视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美+日韩+精品| 亚洲av免费高清在线观看| 日本色播在线视频| 精品久久久噜噜| 久久青草综合色| 天天操日日干夜夜撸| 飞空精品影院首页| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产成人精品福利久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产一区二区在线观看av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 最近手机中文字幕大全| 日本色播在线视频| 久久婷婷青草| 亚洲高清免费不卡视频| 久久99精品国语久久久| 国产一区有黄有色的免费视频| 综合色丁香网| 人成视频在线观看免费观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲久久久国产精品| 免费日韩欧美在线观看| 日韩伦理黄色片| 另类亚洲欧美激情| 一区二区三区乱码不卡18| 一区二区三区精品91| 一级爰片在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 新久久久久国产一级毛片| 黄片播放在线免费| 午夜福利网站1000一区二区三区| 高清毛片免费看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 大片免费播放器 马上看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 少妇精品久久久久久久| 亚洲,一卡二卡三卡| 男女边摸边吃奶| 精品亚洲成国产av| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲av欧美aⅴ国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产视频首页在线观看| 免费观看在线日韩| 久久久久久久国产电影| 搡老乐熟女国产| 亚洲欧美精品自产自拍| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 内地一区二区视频在线| 9色porny在线观看| 欧美精品一区二区大全| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品久久午夜乱码| 日韩人妻高清精品专区| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲精品av麻豆狂野| freevideosex欧美| 在线观看一区二区三区激情| 午夜福利视频精品| 久久99蜜桃精品久久| 成年女人在线观看亚洲视频| 成人无遮挡网站| 男人操女人黄网站| av视频免费观看在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲国产精品999|