苧麻根的生藥學(xué)鑒定研究

彭連共，陳玨

1.廈門市中醫(yī)院藥劑科，福建廈門361009；2.漳州片仔癀藥業(yè)有限公司，福建漳州363099

苧麻是纖維作物的一種，起源于中國，在國際上有“中國草”之稱。苧麻根是苧麻的干燥根和根莖，1977年收錄于我們國家的一版藥典中。苧麻根藥具有悠久的歷史，對于跌撲瘀血、創(chuàng)傷出血、安胎等具有較好的療效，在我國民間也常用來治療蛇蟲傷口、肝炎等疾病，只是當(dāng)下對確切的抗乙肝病毒與抗肝纖維的具體原理與作用機(jī)理仍屬空白。當(dāng)代對苧麻根的研究中發(fā)現(xiàn)其有效組成成分中含有有機(jī)酸、黃酮、三萜酸等，所以其藥理擴(kuò)展到了止血、抑菌、抗病毒等功效。我們國家富含大量的苧麻資源，但真正被開發(fā)與利用的很少。因此，為加強(qiáng)對苧麻根的開發(fā)與運(yùn)用，從而提高對苧麻的基礎(chǔ)性研究。文章通過描述苧麻根的形態(tài)、性狀、截面、粉末顯微、薄層色譜、結(jié)構(gòu)進(jìn)行詳細(xì)的研究與鑒定，為苧麻根的生藥學(xué)鑒定提供參考資料。

1 材料與儀器

1.1 儀器

①光學(xué)顯微鏡配套顯微成像系統(tǒng)（型號：OLYMPUS BX51&DP73）；②薄層點(diǎn)樣儀（型號：CAMAGLINOMAT5）；③自動輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（型號：LEICA RM 2235）；④電子分析天平 （型號：METTLER TO-LEDO MS204S）；⑤超聲儀（型號：KUDOS SK250LHC）；⑥烘箱（型號：THERMO OGH60）；⑦核磁共振波譜儀 （型號：Bruker AM.400 MHz）。

1.2 材料

該次實(shí)驗(yàn)藥材使用的是采集自3個不同地方的苧麻根。經(jīng)過食品藥品檢測中心檢測確定該次實(shí)驗(yàn)的苧麻根屬于蕁麻科的苧麻經(jīng)過干燥后的根與莖。還包括硅膠G預(yù)制板、MN板與Merck板、超純水（使用水）、乙醇、分析純（試劑）等材料。

2 方法與結(jié)果

2.1 植物形態(tài)

苧麻是一種體型在0.5～2 m多年生宿根性灌木植物。苧麻根莖呈現(xiàn)青褐色；莖葉呈現(xiàn)闊卵形，長達(dá)7～15 cm，寬至5～12 cm，且其葉片叢生、密被茂盛；植物端部逐漸呈現(xiàn)尖狀形，而基底則呈渾圓形，邊緣位置呈鋸齒形；莖葉上表面呈綠色，略顯粗糙，下表面呈白色密被，葉面含有3條基礎(chǔ)脈。苧麻植物的葉柄長達(dá)2～10 cm，有2個托葉，其背面富含毛被。該植物的花瓣呈圓錐形，花序旁生，且不分雌雄；雄性苧麻花序一般處于其雌性花序下；雄性苧麻花朵較小，不含有花梗，每朵花共計4片花瓣；雌性苧麻花朵茂盛而呈現(xiàn)球形，花被呈現(xiàn)管狀，每朵花含1個花柱，宿存。苧麻的果實(shí)顯小，呈現(xiàn)出球狀，其表面光滑，根莖部向內(nèi)突縮而呈現(xiàn)出細(xì)柄狀。苧麻花期時間在每年8～10月份。

2.2 性狀鑒別

苧麻根莖呈現(xiàn)出略彎曲而形狀規(guī)則的圓柱形，其表皮呈灰棕色而帶有皺紋、細(xì)孔、疣狀突起和根須。苧麻根質(zhì)地較硬，不會輕易折斷，其橫截面呈纖維性，外表皮呈棕色，枝木呈淡棕色，部分枝木間含有一些同心環(huán)紋，其中部為髓或空。苧麻根部位置呈現(xiàn)輕微的紡錘形，略顯膨大，根表部呈現(xiàn)灰棕色，也有皺紋和皮孔，橫截面帶有粉性，氣味較淡，并具有粘性[1]。

2.3 顯微鑒別

2.3.1 根莖橫截面 苧麻根木栓層含有大量的數(shù)列細(xì)胞，其外側(cè)容易破碎。苧麻根的皮層含有大概十幾列的薄壁細(xì)胞，其中柱鞘部位的纖維壁非常厚，且細(xì)胞的胞腔較小；苧麻根的韌皮位置較窄，其纖維呈現(xiàn)單個或多個狀態(tài)，并結(jié)成明顯的環(huán)。苧麻根的木質(zhì)位置寬為2～10列細(xì)胞，組成成分中含有草酸鈣方晶體；細(xì)胞導(dǎo)管呈單個散開或者多個縱向排列的形式。苧麻根薄壁細(xì)胞里含有較多的淀粉粒，其成為是草酸鈣簇晶體。

2.3.2 顯微下的粉末 苧麻根的粉末呈黃棕色，淀粉顆粒較多，其形狀有球形、橢圓、卵圓這三種，其直徑范圍在8～20 μm內(nèi)，整體呈現(xiàn)臍點(diǎn)點(diǎn)狀模型；苧麻根的復(fù)粒則是由2～3分粒構(gòu)成。細(xì)胞中的草酸鈣簇晶體較多，大小為10～25 μm，以單個分散形式在或穿插在薄壁細(xì)胞中而存在。草酸鈣方晶體類型很少，分泌物存在于分泌道細(xì)胞中而呈紅棕色，其纖維體現(xiàn)為多束形，細(xì)胞壁較厚。

2.4 薄層色譜鑒別

通過2號篩來選擇苧麻根的粉末，再加入劑量為20 mL的二氯甲烷，實(shí)施超聲處理30 min，得到過濾后的苧麻根粉末。再將得到的濾液蒸干處理，剩余的殘渣中加入劑量為2 mL的甲醇溶液進(jìn)行溶解，制作成供試品溶液。此外，選擇劑量為2 g的苧麻根，采用同樣的方法制備苧麻根溶液。再采取薄層色譜實(shí)驗(yàn)法，分別取劑量為10 μl的先前制得的兩種溶液，將其點(diǎn)在共同的硅膠G薄層板上面，并以3:1的正己烷與丙酮的比例將其進(jìn)行展開，再取出，并進(jìn)行晾干處理。再噴灑上含量為10%的硫酸乙醇溶液，并于105°C的環(huán)境溫度進(jìn)行加熱處理，使得薄層板上的斑點(diǎn)顯示得更加清晰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示為供試品色譜呈現(xiàn)在用于對照的藥材色譜位置上，并且斑點(diǎn)顯示出一樣的顏色。

2.5 高效液相色譜法鑒別

2.5.1 色譜條件 劑量為5 μm的Agilent Zorbax、4.6 mm×250 mm的SB-C18；乙腈流動相，將其記為A；含量為0.1%的磷酸溶液，將其記為B；將含量為6%的A溶液進(jìn)行0～10 min的梯度洗脫；將含量在6%～27%的A溶液進(jìn)行10～35 min地梯度洗脫；將含量為27%～55%的A溶液進(jìn)行35～50 min的梯度洗脫，其洗脫流速為1 mL/min；柱溫環(huán)境在30°С。還包括二極管陣列檢測器[2]。

2.5.2 制備對照品溶液 通過精密儀器來稱量綠原酸的對照品，并聯(lián)合甲醇來制備每1毫升體積中含量為80 g的溶液。

2.5.3 制備供試品溶液 通過3號篩來選擇含量為1.5 g的樣品粉末，并采取精密儀器進(jìn)行稱定，將其置于平底燒瓶里，加入占比為50%的體積為25 mL的甲醇溶液。稱其重量后再進(jìn)行30 min的水浴回流，然后放冷，再將缺失的重量進(jìn)行補(bǔ)足，再搖勻、過濾，從而制得濾液。

查詢有關(guān)苧麻根的組成成分的研究資料與文獻(xiàn)之后，根據(jù)前面介紹的色譜條件來對苧麻根的有效組成成分進(jìn)行分離，如黃酮、酚酸、蒽醌類等多種成分。然后根據(jù)對照品的保留時間、供試品紫外吸收光譜來對其色譜圖中的四大有效成分（綠原酸、金絲桃苷、槲皮苷和兒茶素）進(jìn)行定性。除綠原酸，另外的3種成分的含量非常低，最終通過綠原酸來鑒別苧麻根的特征峰值[3]。

2.6 結(jié)構(gòu)鑒別

2.6.1 提取與分離 選擇重量為10 kg的苧麻根，并采取占比為95%乙醇的10倍生藥量溶液對其實(shí)施浸泡。再加熱回流進(jìn)行3 h的提取、過濾，將所得濾渣進(jìn)行10倍生藥量的占比為70%的乙醇進(jìn)行2次提取，依然是同前處理并進(jìn)行3 h過濾。將所得的提取液進(jìn)行合并（3次），得到浸膏進(jìn)行回收。采取溶劑法、色譜法將其粗分離，對浸膏稀釋于溶解后離心處理。再將上清液進(jìn)行洗脫（水洗脫、40%乙醇洗脫、70%乙醇洗脫、95%乙醇洗脫）。得到的沉淀物質(zhì)采取氯仿與乙酸乙酯來萃取，通過常壓色譜柱對其實(shí)施分離與純化，分別得到化合物7（水洗部分）、化合物5與6（40%的乙醇洗脫）、化合物2與4（70%的乙醇洗脫）、化合物1、3與8（氯仿部分）。

2.6.2 化合物鑒別 ①鑒別化合物1（橙黃色晶體），采用醋酸鎂粉與其進(jìn)行反應(yīng)，其結(jié)果顯示為陽性，推測出為蒽醌類型的化合物。具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CD30D)o:7.59(lH,s,4-H),7.20(lH,d,J=2.4 Hz,5-H),7.11(lH,s,2-H),6.58(lH,d,J=2.4 Hz,7-H),2.44(3 H，s，3-CH3);13 C-NMR(150 MHz,Acetone)8:190.83(C-9),181.27(C-10),165.52(C-6),162.39(C-1),165.52(C-8),148.65(C-3),136.73(C-lOa),133.34(C-4a),107.97(C-7),108.78(C-5),109.55(C-8a),113.57(C-9a),120.59(C-4),124.04(C-2),21.07(3-CH3)。經(jīng)過對照，化合物1是大黃素。

②鑒別化合物2（棕色粉末），具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CD30D)B:7.56(lH,s,4-H),7.40(lH,cl,J=2.4 Hz,5-H),7.14(1H,d,J=2.4 Hz,2-H),7.11(lH,s,7-H),2.43(3H,s,3-CH3),5.06(1 H,d,J=7.6 Hz,1'-H)。經(jīng)過對照，化合物2是大黃素－8-O-β-D－吡喃葡萄糖苷[4]。

③鑒別化合物3（金黃色晶體），具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CDCl3)8:12.31(lH,s,1-0H),12.11(lH,s,8-0H),7.63(lH,s,5-H),7.37(1H,d,]=2.0 Hz,4-H),7.082(lH,s,7-H),6.69(lH,d,J=2.0 Hz,2-H),2.45(3H,s,3-CH3),3.94(3H,s,6-OCH3)。經(jīng)過對照，化合物3是大黃素甲醚。

④鑒別化合物4（白色粉末），具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CD30D)B:7.34(2H,d,]=8.4 Hz,2'-H,6'-H),6.74(2H,d,J=8.4 Hz,3'-H,5'-H),7.00(1 H,d,J=16.0 Hz,{3-H),6.82(1H,d,J=16.0 Hz,a-H),6.76(1H,hr s,2-H),6.59(1H,hr s,6-H),6.43(lH,t,]=2.4 Hz,4-H),4.87(1H,d,]=7.2 Hz,1"-H)。經(jīng)過對照，化合物4是白藜蘆醇苷。

⑤鑒別化合物5（白色粉末），具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CD30D)B:6.84(1H,d,J=1.6 Hz,2'-H),6.77(lH，dd,J=8.4，2.8 Hz,6'-H),6.73(lH,d,J=2.0 Hz,5'-H),5.93(lH,d,J=2.4 Hz,8-H),5.86(lH,d,J=2.4 Hz,6-H),4.56(lH,cl,J=7.6 Hz,2-H),3.97(IH,m,3-H),2.85(lH,dd,1=16.0,5.6 Hz,4-H),2.SO(lH,dd,1=16.0,5.6 Hz,4-H)。經(jīng)過對照，化合物5是兒茶素。

⑥鑒別化合物6（白色粉末），具體的核磁數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400 MHz,CD30D)8:6.98(1H,d,J=0.8 Hz,2'-H),6.80(lH,d,J=8.4 Hz,5'-H),6.78(1H,dd,J=8.4,3.6 Hz,6'-H),5.94(1H,d,]=2.0 Hz,8-H),5.92(1H,d,]=2.0 Hz,6-H),4.54(1 H,hr s,2-H),4.18(lH,m,3-H),2.86(lH,dd,J=16.8，2.8 Hz,4-H)。

⑦鑒別化合物7（白色晶體），經(jīng)過測試，該物質(zhì)易溶于水，且難溶于有機(jī)溶劑，對其灼燒后不呈現(xiàn)灰化。經(jīng)過對照，化合物7是硝酸鉀。

⑧鑒別化合物8（無色晶體），經(jīng)過對照，該化合物是 β-谷甾醇[5]。

3 討論

該文采用薄層色譜鑒別法來對苧麻根的生藥學(xué)進(jìn)行研究，實(shí)現(xiàn)了較好的分離效果，具有明顯的斑點(diǎn)。該次實(shí)驗(yàn)研究，通過實(shí)施不同的提取劑（30～60°С環(huán)境下的石油醚、二氯甲烷和甲醇），采取不同的提取方法，分別在不同的時間進(jìn)行提取，從而確定出苧麻根樣品進(jìn)行處理前所選用的方法[6-8]。采用不同的薄層板（硅膠G預(yù)制板、MN板與Merck板）、不同的點(diǎn)樣量（2、5、8、10 μl）。運(yùn)用不同地展開試劑（3:1比例的正己烷與丙酮）；（9:1:2:0.2）環(huán)己烷、乙酸乙酯、丙酮與甲醇；（環(huán)境溫度是30～60°С）石油醚；（15:5:1）的甲酸乙酯與甲酸等，分別在不同環(huán)境溫度（15～22°С）、不同濕度（30%~65%）條件下進(jìn)行相關(guān)的研究，從而改進(jìn)了薄層色譜的條件[9-10]。通過多種色譜技術(shù)來對苧麻根進(jìn)行分離，通過數(shù)據(jù)及化學(xué)方法鑒定出苧麻根的結(jié)構(gòu)，得到了8種苧麻根的組成成分，并且其中的3～7種成分屬于初次分離得到鑒別的化學(xué)成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該次實(shí)驗(yàn)方法較好，將供試品溶液進(jìn)行冷置后，觀察其穩(wěn)定性，該供試品溶液1 d內(nèi)穩(wěn)定，且點(diǎn)樣、斑點(diǎn)均顯示清晰。

苧麻根在全球有120多種，而我們國家就有31種，分布在東北、河北、西南與華南地區(qū)，而12種變種蕁麻根則主要分布在云貴川地區(qū)和廣西、廣大。在苧麻根的產(chǎn)量方面，我們國家就占據(jù)90%以上，只是雖然資源豐富，但被真正開發(fā)與利用的卻很少，限制在對苧麻根藥物的偏方使用方面，而被制成有效藥物的屈指可數(shù)[11-12]。因此，該文通過對苧麻根的性狀、根截面、顯微下的粉末、薄層色譜鑒別、提取與分離、結(jié)構(gòu)鑒別來對苧麻根進(jìn)行全面研究。相比以往對蕁麻根的鑒別試驗(yàn)中，由于變種、產(chǎn)地等外界因素以及蕁麻根自身組成成分而未能充分鑒別，該次實(shí)驗(yàn)完善對苧麻根的生藥學(xué)鑒定方法，為其藥材鑒別、質(zhì)量評估提供了參考依據(jù)。對于蕁麻根根莖與根的關(guān)系、不同種類的苧麻根植物在組成成分上的不同、不同環(huán)境下生產(chǎn)的苧麻根的異同的對比需要進(jìn)一步研究。