超聲-天然抑菌性高分子聯(lián)用綠色養(yǎng)護當(dāng)歸的科學(xué)可行性

李芳蓉，牛娟，張建軍，趙云峰，韓秀鳳

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)教學(xué)部，甘肅定西 743000）

甘肅省定西市岷縣為“中國當(dāng)歸之鄉(xiāng)”，所產(chǎn)當(dāng)歸謂之“岷歸”，栽種和藥用歷史悠久、品質(zhì)優(yōu)良，為歷代醫(yī)家公認(rèn)的甘肅道地藥材[1]。當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸[Angelica Sinensis（Oliv.）Diels]的干燥根[2]，有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、扶正固本、潤燥通便之功效，其藥用價值多樣化[3～4]，有“十方九歸”之美譽，藥食同源[5]。近年來，隨著生活水平提高及保健意識增強，當(dāng)歸藥材的市場需求量、生產(chǎn)規(guī)模和庫存量遞增，因其多糖類成分含量較高，傳統(tǒng)貯藏養(yǎng)護技術(shù)方法欠科學(xué)，貯藏期間易發(fā)生霉變、蟲蛀、變質(zhì)等現(xiàn)象，影響藥材質(zhì)量和用藥安全有效，造成巨大經(jīng)濟損失。據(jù)調(diào)查當(dāng)歸是甘肅省受倉儲害蟲為害最嚴(yán)重的藥材之一[6]。目前當(dāng)歸貯藏養(yǎng)護多沿用傳統(tǒng)硫磺熏蒸陰干法，雖有較好的防霉、防蟲蛀等效果[7]，但會影響其療效且有害人體健康[8]。若過度硫熏更會造成其化學(xué)成分和藥理作用的改變及殘留超標(biāo)[9]。因此，研究當(dāng)歸的科學(xué)綠色貯存及防霉防蟲養(yǎng)護刻不容緩。

1 超聲清洗消除隱患

超聲技術(shù)在醫(yī)療衛(wèi)生、食品工業(yè)和環(huán)境保護等方面發(fā)揮著重要作用。超聲清洗主要是利用超聲空化效應(yīng)對物體表面污物撞擊、剝離，潔凈且不留死角[10]。超聲清洗中藥材作用快速徹底，且空化效應(yīng)能在細(xì)胞液與細(xì)胞壁間產(chǎn)生微射流及局部高熱高壓，抑制蟲卵，殺滅細(xì)菌、霉菌、病菌等[11～13]。實現(xiàn)節(jié)水、節(jié)能、省時、省力，清潔，快速、高效洗滌，綠色環(huán)保，有效保護中草藥[14]，減少藥材有效成分損失量，是理想的中藥材清洗方法[15]。將當(dāng)歸藥材在貯藏保存前預(yù)先進行超聲波清洗，提前消除隱患，有利于后期的貯藏養(yǎng)護。

2 超聲聯(lián)用養(yǎng)護的天然抑菌性高分子

天然抑菌性高分子在果蔬保鮮中應(yīng)用較多。通過采用果蔬和糧食保鮮方面應(yīng)用廣泛的殼聚糖、甘露聚糖等作為與超聲聯(lián)用養(yǎng)護的天然抑菌性高分子，進行研究。

殼聚糖是一種理想綠色抗菌材料，來源豐富、價格低廉、多功能、無毒、潛力巨大的新型環(huán)保天然防腐劑[16]，具有可生物降解性、成膜性、生物相容性、抗菌譜廣性、高活性和再生性等特點[17～18]，廣泛應(yīng)用于食品、工農(nóng)業(yè)、化妝品、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，抑菌活性良好，能有效防止水果在貯藏期腐爛并維持其品質(zhì)，故在食品果蔬保鮮方面的應(yīng)用尤為重要[19～20]。水溶性殼聚糖在酸性介質(zhì)中抑菌性能更好[21]，可以在貯藏期內(nèi)有效對中藥材防霉防蛀[22]。

甘露聚糖無色、無毒、無異味，是一種天然可再生的食品抑菌防腐劑，具有親水性、成膜性、抗菌性、可食用性等性能，可有效抑制真菌及細(xì)菌生長和繁殖。水溶液可在果蔬表面形成一層薄膜[23～24]，有效阻止空氣氧化、減少水分蒸發(fā)、抑制病害微生物的生長繁殖，降低呼吸強度，使果蔬保鮮[25～26]。經(jīng)甘露聚糖涂膜后的蘋果可有效防止褐變和保持水分等，感官保持效果明顯[27]。甘露聚糖還能有效防止食品腐敗變質(zhì)、發(fā)霉和遭受蟲害，抗菌性較強[28～29]，能延長包裝食品貨架期和抑制纖維素水解[30]。

將當(dāng)歸貯藏前預(yù)先超聲清洗，并利用其分散作用在藥材表面均勻涂布一層天然抑菌性高分子進行聯(lián)用養(yǎng)護，使藥材與外界環(huán)境隔離并阻斷貯藏期細(xì)菌、霉菌和病毒的侵蝕，屬于安全、高效、無化學(xué)污染、綠色科學(xué)的當(dāng)歸藥材貯藏養(yǎng)護技術(shù)。

3 超聲-天然抑菌性高分子聯(lián)用技術(shù)養(yǎng)護當(dāng)歸的效果評價

將當(dāng)歸藥材超聲凈洗后，選取部分與抑菌性能的有機高分子聯(lián)用養(yǎng)護，并與僅超聲清洗的當(dāng)歸比較，根據(jù)各自貯存期內(nèi)外觀品質(zhì)改變情況和分析檢測主要有效成分含量的變化，綜合評價養(yǎng)護效果。若在18～24 個月實驗周期內(nèi)不出現(xiàn)霉變和蟲蛀等，各有效成分變化不大，且仍符合藥典要求，即可進一步優(yōu)選與超聲技術(shù)聯(lián)用的天然抑菌性高分子的最佳種類、最佳加入量及最佳條件，從而得到理想的超聲-天然抑菌性高分子聯(lián)用養(yǎng)護當(dāng)歸的科學(xué)方法。

3.1 待檢藥效成分

以當(dāng)歸的代表性或指標(biāo)性藥效成分作為超聲波聯(lián)用技術(shù)養(yǎng)護當(dāng)歸藥材后評價養(yǎng)護效果的待檢藥效成分。

阿魏酸、當(dāng)歸多糖、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞和丁基苯酞[32]等是公認(rèn)的主要指標(biāo)性和代表性藥效成分。阿魏酸是歷年《中國藥典》規(guī)定的鑒定當(dāng)歸藥材質(zhì)量的標(biāo)志性檢測指標(biāo)，是其主要水溶性活性成分，阿魏酸可保護心臟、抗血栓和抑制血小板聚集[33～34]，抗抑郁和抗老年癡呆，能促進清除自由基酶的產(chǎn)生并清除自由基，調(diào)節(jié)人體生理機能。藁本內(nèi)酯是重要的鑒定當(dāng)歸真?zhèn)魏驮u定其質(zhì)量的特征指標(biāo)之一[35]，具有抗癌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗動脈粥樣硬化、神經(jīng)保護、抑制心肌肥大等藥理活性[36]。藁本內(nèi)酯能顯著提升老齡小鼠的力量與耐力，改善老齡小鼠運動能力[37]。丁基苯酞和丁烯基苯酞也是當(dāng)歸的主要藥效成分，能夠擴張血管、抗心肌缺血缺氧，改善腦部微循環(huán)和抗抑郁等[38]。當(dāng)歸多糖是其主要水溶性成分，藥理作用和生物活性廣泛，能提高機體免疫力，促進造血、抗癌、抗輻射損傷等[39]。

3.2 待檢藥效成分分析測定方法

3.2.1 HPLC 法分析測定阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丁基苯酞和丁烯基苯酞

《中國藥典》2020年版對當(dāng)歸藥材阿魏酸等的含量分別進行了限定。阿魏酸含量的測定多采用HPLC 法，何元等[40]建立了當(dāng)歸藥材HPLC 指紋圖譜，并測定了藥材及提取物中阿魏酸等成分的含量。徐金玲等[41]新建了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并整合了當(dāng)歸藥材的鑒別，增加了HPLC 法測定阿魏酸含量項目，方法準(zhǔn)確可靠、簡便快捷、適用性良好。羅錚等[42]建立了精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性符合指導(dǎo)原則要求的HPLC 測定當(dāng)歸中阿魏酸等5 種成分的方法。楊蕊菁等[43]采用HPLC 法同時測定當(dāng)歸中阿魏酸等9 種成分的含量準(zhǔn)確簡便、重現(xiàn)性好的方法。黃玉宇等[44]以HPLC 測定檢測飲片及煎液中阿魏酸等含量，為按飲片類型分類規(guī)范處方的加水量標(biāo)準(zhǔn)提供了實驗依據(jù)。馬紀(jì)偉等[45]采用HPLC 測定養(yǎng)血當(dāng)歸軟膠囊中阿魏酸的含量，方法簡便易行，可作為養(yǎng)血當(dāng)歸膠囊的質(zhì)量控制方法。劉雪楓等[46]采用HPLC 法測定當(dāng)歸芍藥散中阿魏酸等含量，方法簡便、準(zhǔn)確、分離效果好。

藁本內(nèi)酯是當(dāng)歸揮發(fā)油主要組分和重要活性成分，是公認(rèn)的鑒定當(dāng)歸真?zhèn)魏驮u定其質(zhì)量的特征指標(biāo)[47～48]。HPLC 法是應(yīng)用最廣且重要的藁本內(nèi)酯測定方法[49～50]。潘娉娉等[51]建立了準(zhǔn)確穩(wěn)定、重復(fù)性好，可用于質(zhì)量控制的同時測定杜仲-當(dāng)歸藁本內(nèi)酯等5種成分含量的HPLC法。葉曉婭等[52]采用HPLC 法同時測定當(dāng)歸片中藁本內(nèi)酯等的含量，經(jīng)方法學(xué)考察均符合規(guī)定，可用于質(zhì)量控制。吳姣等[53]建立了準(zhǔn)確、可靠的當(dāng)歸膠囊藁本內(nèi)酯和阿魏酸含量的HLPC 法測定方法。陳方等[54]建立并優(yōu)化了簡便、可靠、穩(wěn)定、可行的測定當(dāng)歸藁本內(nèi)酯含量的HPLC 指紋圖譜和測定方法。

丁烯基苯酞是當(dāng)歸揮發(fā)油的另一主要成分，其含量在當(dāng)歸揮發(fā)油中僅次于藁本內(nèi)酯[55]，是當(dāng)歸活血調(diào)經(jīng)的藥效成分[56]。鄢玉芬等[57]建立了準(zhǔn)確、可行的同時測定不同貯藏條件下川芎中丁烯基苯酞等10 種化學(xué)成分的方法。肖宇奇等[58]采用HPLC 法分析了當(dāng)歸樣品中不同生長期化學(xué)成分丁烯基苯酞等的動態(tài)變化。李冬華等[59]以HPLC法測定當(dāng)歸飲片中阿正丁烯基苯酞等的含量，用以建立和完善當(dāng)歸飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

丁基苯酞（3-正丁基苯酞）是當(dāng)歸又一重要的藥效成分，其測定主要以HPLC 法。王寧寧等[60]以HPLC 法研究3-正丁基苯酞在大鼠體內(nèi)的組織分布情況。丁軍霞等[61]建立了HPLC 法同時測定當(dāng)歸中正丁基苯酞等5 種成分及不確定度評定方法。鐘應(yīng)淮等[62]采用HPLC 法同時測定丁基苯酞等5 種成分的含量，結(jié)果表明方法穩(wěn)定可靠，可用于質(zhì)量控制。郭小藤等[63]采用HPLC 法同時測定川芎油丁基苯酞等的含量，方法簡便、經(jīng)濟。

3.2.2 紫外可見光譜法測定當(dāng)歸多糖

當(dāng)歸多糖含量測定多采用UV-Vis 法[64]。張素斌等[65]采用苯酚-硫酸UV-Vis 法測定當(dāng)歸多糖含量對4 種當(dāng)歸多糖提取方法的比較研究。吳平安等[66]采用苯酚-硫酸UV-Vis 法測定當(dāng)歸中的多糖含量。劉云[67]醇提當(dāng)歸多糖并以采用苯酚-硫酸UV-Vis 法測定當(dāng)歸多糖含量。何先元等[68]以超聲提取當(dāng)歸多糖，以苯酚-硫酸UV-Vis 法測定其含量。許會生[69]建立了多糖含量測定的苯酚-硫酸UV-Vis 法，其研究和測定方法規(guī)范可靠。

4 小結(jié)

當(dāng)歸臨床應(yīng)用廣泛，但因貯藏養(yǎng)護技術(shù)方法欠科學(xué)，霉?fàn)€和蟲蛀等各種變質(zhì)變異現(xiàn)象嚴(yán)重，科學(xué)貯藏養(yǎng)護勢在必行。超聲洗滌中藥材快速、環(huán)保、節(jié)能、節(jié)水，能夠抑制蟲卵、殺死害蟲、強烈殺滅細(xì)菌、霉菌、病菌等，藥效成分散失少。而天然抑菌性高分子在果蔬保鮮中應(yīng)用廣泛。養(yǎng)護后評價養(yǎng)護效果的待檢藥效成分為阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯肽、丁基苯肽和當(dāng)歸多糖，測定方法分別為HPLC 法測定阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯肽和丁基苯肽，UV-Vis 法測定當(dāng)歸多糖。各待檢成分代表性強，測定方法得當(dāng)，操作簡便，穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好，可靠性強。將無殘毒、無公害、安全綠色的超聲-天然抑菌性高分子聯(lián)用貯藏養(yǎng)護當(dāng)歸，可提前消除隱患并進一步保證貯藏期間防霉防蛀等，研究和應(yīng)用前景廣闊。