• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    干細(xì)胞向雌性生殖細(xì)胞分化的研究進(jìn)展

    2021-03-27 13:59:55馮子岑張云山
    關(guān)鍵詞:生殖細(xì)胞干細(xì)胞分化

    張 帥,馮子岑,張云山

    (天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,天津 300100)

    近十年來,世界范圍內(nèi)不孕癥發(fā)病率已由10%增加到15%[1],其中由于各種原因?qū)е碌穆殉苍缢?premature ovarian failure,POF)女性患者占不孕人群總數(shù)的1%~3%[2]。目前大多POF患者由于缺乏健康配子而無法生育自身遺傳學(xué)后代,僅有極少數(shù)患者依靠供卵及輔助生殖才能完成生育,而這又涉及倫理、社會傳統(tǒng)觀念等因素影響,因此限制了其在臨床上的應(yīng)用。最近越來越多研究顯示[3-5],在特定培養(yǎng)條件下可將小鼠多能干細(xì)胞(pluripotent stem cells,PSCs)誘導(dǎo)分化為卵母細(xì)胞,并具有正常受精、卵裂能力,目前已經(jīng)成功獲得健康子代小鼠出生。無疑,這一研究成果將會為渴望生育自己遺傳后代POF女性帶來巨大希望。本文就近年來國外關(guān)于小鼠和人類干細(xì)胞向雌性生殖細(xì)胞(female germ cells,FGCs)分化的研究進(jìn)展綜述如下。

    1 干細(xì)胞定義及來源分類

    干細(xì)胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞。根據(jù)其分化潛能不同[6],干細(xì)胞可分為全能干細(xì)胞(totipotent stem cells)、多能干細(xì)胞(pluripotent stem cells,PSCs)、專能干細(xì)胞(multipotent stem cells)和單能干細(xì)胞(unipotent stem cells)。

    1.1 全能干細(xì)胞 是指受精卵到桑椹胚時期的細(xì)胞,可分化成任何種類的細(xì)胞,并能發(fā)育成完整個體。

    1.2 多能干細(xì)胞 是指可以分化為任何一種組織類型、但不能分化為生物個體的細(xì)胞,主要包括胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESCs)和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)。

    1.3 專能干細(xì)胞 是指有能力在一個特定的譜系內(nèi)分化成所有類型的細(xì)胞,在機(jī)體發(fā)育、組織修復(fù)和保護(hù)過程中起著重要作用,如成體干細(xì)胞、臍帶血干細(xì)胞等。專能干細(xì)胞具有許多優(yōu)點和用途,目前主要被用于治療不同的疾病,如脊髓損傷、骨折、自身免疫性疾病等[6]。

    1.4 單能干細(xì)胞 主要是指組織特異性前體細(xì)胞,在體內(nèi)通常只能形成一種細(xì)胞類型,如造血干細(xì)胞、原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells,PGCs)、卵巢干細(xì)胞(ovarian stem cells,OSCs)等。雖然目前關(guān)于卵巢上皮中是否存在OSCs仍存爭議,但最近越來越多的報道,包括小鼠、綿羊、兔、狨猴及人類等研究結(jié)果均表明卵巢上皮中確實存在極少量的OSCs[7]。

    2 生殖細(xì)胞的體內(nèi)發(fā)生

    哺乳動物生殖細(xì)胞,包括精子和卵子均來自于共同的配子前體細(xì)胞-PGCs。

    小鼠PGCs最早發(fā)現(xiàn)于胚胎發(fā)育的第6.25日(E6.25),位于胚胎外胚層遠(yuǎn)端,隨后進(jìn)行分化、遷移并于E10.5左右到達(dá)生殖嵴[8]。人類PGCs最早發(fā)現(xiàn)于妊娠第3周末,位于卵黃囊內(nèi)胚層的背側(cè)壁,第4周時開始遷移,并于5~6周時遷移至生殖嵴[5]。PGCs到達(dá)生殖嵴后,依據(jù)其周圍體細(xì)胞不同的誘導(dǎo)信號而最終分化為精子或卵母細(xì)胞??傮w來說,哺乳動物PGCs在向原始性腺遷移過程中經(jīng)歷了廣泛的表觀遺傳重編程,包括全基因組DNA去甲基化、基因印記清除、雌性失活X染色體的重塑及重新激活等[9]。

    3 各種干細(xì)胞向FGCs誘導(dǎo)分化

    3.1 ESCs向FGCs誘導(dǎo)分化 ESCs是一種來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的多能干細(xì)胞,具有分化為體內(nèi)所有類型細(xì)胞包括生殖細(xì)胞在內(nèi)的能力。有關(guān)干細(xì)胞向生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究最早始于三個最初出版物的報道,即研究人員采用擬胚體(embryoid body,EB)培養(yǎng)方式[10-12],在體外將小鼠胚胎干細(xì)胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)誘導(dǎo)分化成類卵原細(xì)胞或精子細(xì)胞,不僅具有與卵原細(xì)胞和精子相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),還能檢測到生殖細(xì)胞相關(guān)的VASA、Sycp3、Dmc1和FE-J1等特異標(biāo)記物的表達(dá)。需指出的是,可能由于初期研究方法不夠成熟及其他條件的限制等,導(dǎo)致誘導(dǎo)分化的成功率一般很低,因此以上三個研究均未對其后續(xù)受精、胚胎發(fā)育能力做進(jìn)一步報道。

    此后,研究人員不斷對誘導(dǎo)培養(yǎng)方法加以改進(jìn)、優(yōu)化,證實了mESCs通過早期體外培養(yǎng)、后期移植到體內(nèi)發(fā)育相結(jié)合的方式可獲得不同發(fā)育階段的生殖細(xì)胞,進(jìn)而借助體外成熟、受精及移植后可獲得健康子代小鼠出生[13]。隨著研究不斷深入,有一結(jié)論被研究人員普遍接受,即由小鼠PSCs(主要包括ESCs和iPSCs)先經(jīng)歷培養(yǎng)至外胚層樣細(xì)胞(epiblast-like cells,EpiLCs)再生成原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞(primordial germ cell like cells,PGCLCs),然后將PGCLCs與性腺體細(xì)胞結(jié)合培養(yǎng)是目前認(rèn)為誘導(dǎo)mFGCs最有效的方法[14-15]。

    然而,也有研究人員對使用ESCs進(jìn)行科學(xué)研究操作持反對意見。Ciccocioppo等[16]認(rèn)為分離ESCs過程涉及到對囊胚的破壞,以及干擾胚胎發(fā)育過程是一種不道德行為。Sheikhansari等[17]也指出,一方面雖然ESCs是所有干細(xì)胞中最具有多能性、具有無限分化成各種細(xì)胞類型的能力;但另一方面,正是由于其有無限增殖的潛能,誘導(dǎo)分化過程同時可能導(dǎo)致畸胎瘤甚至癌癥發(fā)生的風(fēng)險。因此,考慮到以上倫理和安全等方面問題,ESCs在臨床上的應(yīng)用受到很大限制,特別是有學(xué)者在體外成功誘導(dǎo)出iPSCs后,研究人員也就慢慢忽視了其在干細(xì)胞研究中的使用價值,而逐漸轉(zhuǎn)向使用iPSCs作為替代來源進(jìn)行研究[18]。

    3.2 iPSCs向FGCs誘導(dǎo)分化 iPSCs是通過將外源特定基因或轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入已經(jīng)分化成熟的體細(xì)胞進(jìn)行重編程而形成的人工干細(xì)胞,具有與ESCs相似的發(fā)育潛能。2006年,Takahashi等[19]首次報道將Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4四種因子導(dǎo)入小鼠成纖維細(xì)胞后成功誘導(dǎo)出前者來源的多能干細(xì)胞,即miPSCs。由于iPSCs來源廣泛,同時可避免因ESCs研究而帶來的倫理問題以及干細(xì)胞異體移植治療時存在的免疫排斥等問題,因此被越來越多的研究人員所重視,逐漸將其視為進(jìn)行ESCs研究的良好替代來源[20]。此后,不同研究人員對iPSCs進(jìn)行了更加深入的研究。

    最近,Hikabe等[21]采用“兩步法”培養(yǎng)策略,即向培養(yǎng)液中添加基礎(chǔ)成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和激活素A先將iPSCs培養(yǎng)至EpiLCs,隨后在含BMP4、SCF、LIF、EGF培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)至PGCLCs。結(jié)果顯示iPSCs衍生而來的MⅡ卵母細(xì)胞具有正常受精能力,并能發(fā)育到妊娠足月??傮w來說,目前研究人員對iPSCs向生殖細(xì)胞的分化已做了大量研究,而且大多以小鼠動物模型為研究對象。而將人類iPSCs誘導(dǎo)分化為FGCs仍具有挑戰(zhàn)性。因為在自然條件下,由干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化是一個漫長過程,包括在子宮內(nèi)(囊胚階段)和胎兒體內(nèi)發(fā)育過程及具體調(diào)控機(jī)制,目前研究人員在體外尚且難以完全模擬上述發(fā)育過程[22]。而Dyce等[23]研究具體指出,由干細(xì)胞向生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的步驟中,減數(shù)分裂是一個在體外難以概括的生物學(xué)過程。因此,研究人員一般采用由iPSCs與小鼠胚胎卵巢顆粒細(xì)胞重建的“異構(gòu)卵巢”共同培養(yǎng),且4個月后可分化成人類卵原細(xì)胞,并顯示出與體內(nèi)生殖細(xì)胞相似的分化特征。盡管如此,Yamashiro等[24]認(rèn)為,由于小鼠和人類之間存在種間差異,導(dǎo)致小鼠體細(xì)胞和hPGCs之間的信號傳遞不能完全兼容,因此無法完全支持人類卵子的發(fā)生。也就是說,異構(gòu)重組卵巢培養(yǎng)方法并不是人類配子發(fā)生的有效系統(tǒng)。因此,開發(fā)一個沒有異種組織的單倍體細(xì)胞生成系統(tǒng)可能是一個有效的解決方案,即可以通過hiPSCs誘導(dǎo)分化為hPGCLCs同時,與另一hiPSCs分化來源的人卵巢顆粒細(xì)胞(代替小鼠顆粒細(xì)胞)共同培養(yǎng)而實現(xiàn)。然而,假如這種"創(chuàng)造性"的研究方案成功實施,即人工制造卵子用于受精、妊娠以及順利分娩,也就從本質(zhì)上繞開了人類正常的"兩性生殖"過程,是否會導(dǎo)致其他生殖倫理問題還需要研究人員保持警惕。目前有關(guān)iPSCs的研究還只是作為一種干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化研究的一種輔助平臺,所以iPSCs在生殖研究領(lǐng)域能否發(fā)揮更多作用,還需科研人員進(jìn)一步的探索和實踐。

    最近,Hamazaki等[25]研究發(fā)現(xiàn),添加Figla、Sohlh1、Sohlh2、Lhx8、Nobox、Taf4b、Yy1、Tbpl2等8種轉(zhuǎn)錄因子的培養(yǎng)液可將hPSCs直接轉(zhuǎn)化為卵母細(xì)胞樣細(xì)胞(oocyte-like cells,OLCs),無需經(jīng)歷先將其培養(yǎng)至PGCs、然后再分化為卵母細(xì)胞的過程。雖然研究中顯示OLCs具有正常受精及卵裂能力,但未能驗證其是否能獲得活產(chǎn)。因此,這一成果是否具有推廣應(yīng)用研究的可行性,還需要更多的研究論據(jù)來支持。

    3.3 OSCs向FGCs誘導(dǎo)分化 自2004年Johnson等[26]首次報道雌性小鼠卵巢內(nèi)發(fā)現(xiàn)OSCs,至今十幾年來,關(guān)于小鼠和人類卵巢中是否存在OSCs以及對其分離、檢測的研究,不僅在生殖醫(yī)學(xué)、干細(xì)胞生理學(xué)以及臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域帶來了很大熱情,同時也導(dǎo)致了很多研究人員的懷疑和爭議。Johnson等[26]最初研究顯示,卵巢中存在直徑5~8μm的OSCs,并有“減數(shù)分裂”特異蛋白SCP3的表達(dá)。而Virant-Klun及其小組成員研究表明[27],卵巢表面上皮確實有OSCs的存在,但與Johnson等報道OSCs有所不同,因為這類細(xì)胞直徑僅為2~4μm,且其與ESCs有相似的DDX-4標(biāo)記物表達(dá)。有研究得出完全相反的結(jié)論,即Wagner等[28]對人類卵巢皮質(zhì)進(jìn)行單細(xì)胞分析研究,發(fā)現(xiàn)卵巢中有不同的細(xì)胞群,但沒有OSCs存在。但越來越多的研究表明[28],小鼠和人類卵巢中確實存在極少量OSCs。最近Bhartiya等[7]通過對不同學(xué)者的研究結(jié)果進(jìn)行匯總分析得出結(jié)論,小鼠和人類卵巢中應(yīng)該存在兩種不同類型的干細(xì)胞,即包括較大尺寸(直徑5~8μm)的OSCs(具有細(xì)胞質(zhì)OCT-4B)和較小尺寸(直徑2~4μm)、表達(dá)細(xì)胞核OCT-4A的極小胚胎樣干細(xì)胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs)。并且Bhartiya還指出,圍繞是否存在OSCs的爭議,可能與不同研究人員分離細(xì)胞的技術(shù)程序不恰當(dāng)有關(guān)。進(jìn)一步研究認(rèn)為,VSELs可能是胚胎外胚層來源的PSCs,數(shù)量極少,繼續(xù)分化可產(chǎn)生包括OSCs在內(nèi)的組織特異性祖細(xì)胞。由于其在體外培養(yǎng)中表現(xiàn)相對靜止,因此也被認(rèn)為是卵巢中最原始的干細(xì)胞;而OSCs(表達(dá)FSHR3受體)在體外培養(yǎng)時,則會經(jīng)歷快速分裂并能在其分化為卵母細(xì)胞前形成生殖細(xì)胞巢(germ cell nests)。

    最近,Silvestris等[29]從19例絕經(jīng)期和13例非絕經(jīng)期女性卵巢皮質(zhì)中分離出的OSCs體外研究結(jié)果顯示,來源于卵巢表面OSCs培養(yǎng)21天時可分化為成熟OLCs。隨后使用5號以及X染色體探針通過原位熒光雜交技術(shù)對其染色體的倍性含量進(jìn)行分析,結(jié)果支持OLCs為單倍體核型,由此證明了OSCs分化為OLCs的可行性。

    4 目前研究存在的問題

    對于干細(xì)胞向生殖細(xì)胞的分化研究,雖然研究人員已經(jīng)積累了十幾年的經(jīng)驗,但仍然存在很多棘手問題。首先,誘導(dǎo)分化成功率一直很低是主要問題[4,30](成功率通常<5%);其次,至今仍然缺乏一個標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的模型和誘導(dǎo)分化方案。由上可知,目前用于研究的干細(xì)胞主要包括ESCs、iPSCs、OSCs以及VSELs等,由于不同來源的干細(xì)胞具有不同的分化潛能以及生長代謝機(jī)制,因此應(yīng)選擇哪種來源的干細(xì)胞進(jìn)行研究才能獲得最佳誘導(dǎo)效率,不同研究人員之間尚未達(dá)成共識。

    而Bharti等[18]認(rèn)為,相對于ESCs和iPSCs兩種來源的干細(xì)胞,OSCs和VSELs應(yīng)是最佳的誘導(dǎo)干細(xì)胞的材料來源。一方面,因為前兩者具有高度多能性,因此其誘導(dǎo)分化過程導(dǎo)致畸胎瘤、癌癥的風(fēng)險則會相對較高,所以選擇后兩種來源的干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)更為合適;而另一方面,由于OSCs和VSELs直接來源于卵巢組織,更具有向OLCs分化的自然傾向性,因此在最少的培養(yǎng)條件下就能容易地分化為OLCs,同時還能在一定程度上節(jié)約研究資源和時間。因此,從目前研究現(xiàn)狀來看,如何提高干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的成功率是亟待解決的首要問題,也是研究人員、臨床醫(yī)生以及尋求干細(xì)胞治療患者必須要面對的問題。

    5 展 望

    目前,世界各地的研究人員正在盡最大努力使誘導(dǎo)分化方案標(biāo)準(zhǔn)化,以期獲得更安全和更理想的分化效果。隨著醫(yī)療及科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,干細(xì)胞再生與轉(zhuǎn)化技術(shù)必將日趨成熟,同時干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為生殖細(xì)胞的成功率大大提高,進(jìn)而為卵巢早衰、癌癥放化療后嚴(yán)重?fù)p傷生育力導(dǎo)致的生殖細(xì)胞缺乏不孕夫婦患者,以及絕經(jīng)期后被內(nèi)分泌紊亂疾病所困擾的老年女性帶來更多的希望和生活信心。

    猜你喜歡
    生殖細(xì)胞干細(xì)胞分化
    干細(xì)胞:“小細(xì)胞”造就“大健康”
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    造血干細(xì)胞移植與捐獻(xiàn)
    顱內(nèi)生殖細(xì)胞瘤放療的研究進(jìn)展
    顱內(nèi)生殖細(xì)胞瘤診斷方法研究進(jìn)展
    干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的春天來了?
    原發(fā)性顱內(nèi)生殖細(xì)胞腫瘤全基因組甲基化分析提示生殖細(xì)胞瘤為原始生殖細(xì)胞起源
    干細(xì)胞治療有待規(guī)范
    Cofilin與分化的研究進(jìn)展
    中国美白少妇内射xxxbb| 国产欧美亚洲国产| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 91精品三级在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 婷婷色综合www| 久久久精品94久久精品| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产一区二区三区av在线| 亚洲成人av在线免费| 中文字幕久久专区| 亚洲成人一二三区av| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲av福利一区| 街头女战士在线观看网站| 欧美日韩综合久久久久久| 午夜视频国产福利| 成年av动漫网址| 国产精品久久久久久精品电影小说| 99九九线精品视频在线观看视频| www.色视频.com| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久久久久久成人| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 熟女人妻精品中文字幕| 久久97久久精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲欧美清纯卡通| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 黄色一级大片看看| av专区在线播放| 99热这里只有精品一区| 简卡轻食公司| 黄色怎么调成土黄色| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 69精品国产乱码久久久| 满18在线观看网站| 国产免费现黄频在线看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 99热这里只有是精品在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美性感艳星| 在线观看三级黄色| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品自拍成人| 国产av精品麻豆| 91精品三级在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 高清毛片免费看| 日韩一区二区三区影片| 一本久久精品| 久久青草综合色| 国国产精品蜜臀av免费| 少妇人妻 视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产探花极品一区二区| h视频一区二区三区| 亚洲av在线观看美女高潮| 在线观看www视频免费| 亚洲国产精品成人久久小说| 在线观看免费高清a一片| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美精品国产亚洲| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产在线一区二区三区精| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国模一区二区三区四区视频| 男女国产视频网站| 国产av国产精品国产| 伦理电影免费视频| 看非洲黑人一级黄片| 男女边吃奶边做爰视频| 有码 亚洲区| 女人精品久久久久毛片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 春色校园在线视频观看| 三级国产精品片| 日日啪夜夜爽| 一个人看视频在线观看www免费| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 欧美日韩精品成人综合77777| a级毛片免费高清观看在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美性感艳星| 夫妻午夜视频| 成人国语在线视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美日韩成人在线一区二区| 99热网站在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 黄片无遮挡物在线观看| 中文天堂在线官网| 熟女电影av网| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产69精品久久久久777片| 国产 精品1| 亚洲精品国产av成人精品| 高清不卡的av网站| 黄片播放在线免费| a级毛片免费高清观看在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇丰满av| 欧美日韩综合久久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 成年人免费黄色播放视频| 日韩成人伦理影院| 秋霞伦理黄片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产乱人偷精品视频| 久久精品国产亚洲av天美| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美丝袜亚洲另类| 黄色视频在线播放观看不卡| 大香蕉97超碰在线| 久久午夜福利片| av视频免费观看在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 午夜精品国产一区二区电影| 特大巨黑吊av在线直播| 91精品国产九色| 久久久精品区二区三区| 免费黄色在线免费观看| 人妻少妇偷人精品九色| 下体分泌物呈黄色| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 免费观看的影片在线观看| 丰满少妇做爰视频| 午夜老司机福利剧场| 久久午夜福利片| 午夜91福利影院| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲高清免费不卡视频| 久久午夜福利片| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩欧美精品免费久久| 毛片一级片免费看久久久久| 久久 成人 亚洲| 大片免费播放器 马上看| 精品少妇内射三级| 毛片一级片免费看久久久久| 好男人视频免费观看在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲高清免费不卡视频| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 一级毛片我不卡| 一级毛片我不卡| av不卡在线播放| 在线 av 中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 少妇熟女欧美另类| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产视频内射| 在线观看www视频免费| 香蕉精品网在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 精品一品国产午夜福利视频| 久久狼人影院| h视频一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲久久久国产精品| 久久久久国产网址| 国产成人freesex在线| 成人免费观看视频高清| 免费高清在线观看日韩| 国产熟女欧美一区二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲美女黄色视频免费看| 99热国产这里只有精品6| 国产一区二区在线观看av| 成人国语在线视频| 日本av手机在线免费观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久这里有精品视频免费| 成人毛片a级毛片在线播放| 伊人亚洲综合成人网| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 五月伊人婷婷丁香| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 午夜久久久在线观看| 中国国产av一级| 久久青草综合色| 久久午夜福利片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产乱来视频区| 成年av动漫网址| 欧美一级a爱片免费观看看| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 最近2019中文字幕mv第一页| 国产乱来视频区| 亚洲不卡免费看| 久久狼人影院| 亚洲久久久国产精品| 黑丝袜美女国产一区| 日本av免费视频播放| 一区二区av电影网| 少妇的逼好多水| 久久综合国产亚洲精品| 好男人视频免费观看在线| 亚洲精品日本国产第一区| 一级黄片播放器| 99热这里只有精品一区| 成人综合一区亚洲| 91精品一卡2卡3卡4卡| 五月开心婷婷网| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产黄频视频在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| xxx大片免费视频| 亚洲国产精品一区三区| 精品国产国语对白av| 中文天堂在线官网| 亚洲在久久综合| 国产成人精品福利久久| 满18在线观看网站| 婷婷色综合大香蕉| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人av激情在线播放 | 丝瓜视频免费看黄片| 精品人妻在线不人妻| 黄色一级大片看看| 满18在线观看网站| 日韩中字成人| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久99热这里只频精品6学生| 2021少妇久久久久久久久久久| 热re99久久精品国产66热6| 91成人精品电影| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 插逼视频在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产一级毛片在线| 国产高清三级在线| 亚洲,欧美,日韩| 欧美xxⅹ黑人| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 水蜜桃什么品种好| 三级国产精品片| 999精品在线视频| 中文字幕免费在线视频6| 老女人水多毛片| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲在久久综合| av.在线天堂| 日韩av在线免费看完整版不卡| 18在线观看网站| 国产一区二区三区av在线| 久久精品国产自在天天线| 一级二级三级毛片免费看| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美3d第一页| 免费少妇av软件| videosex国产| 这个男人来自地球电影免费观看 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜av观看不卡| a级毛片在线看网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久久久国产网址| 国产精品人妻久久久久久| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久久国产电影| 久久精品国产亚洲网站| 99久久精品国产国产毛片| 国精品久久久久久国模美| 国产片内射在线| 精品久久蜜臀av无| 亚洲伊人久久精品综合| 国产熟女午夜一区二区三区 | 成人影院久久| 国产男女内射视频| 亚洲av.av天堂| 搡女人真爽免费视频火全软件| 中文欧美无线码| 国产精品 国内视频| 国产av精品麻豆| 女性生殖器流出的白浆| 91精品三级在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 男女边摸边吃奶| 日韩大片免费观看网站| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 简卡轻食公司| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美+日韩+精品| 交换朋友夫妻互换小说| 26uuu在线亚洲综合色| 国产视频首页在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美3d第一页| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成人免费观看视频高清| 久久99精品国语久久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 九色亚洲精品在线播放| 97在线人人人人妻| 国产欧美亚洲国产| 免费高清在线观看视频在线观看| 777米奇影视久久| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久狼人影院| 国产av码专区亚洲av| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产精品一区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 一级爰片在线观看| 国产免费现黄频在线看| 街头女战士在线观看网站| 最近手机中文字幕大全| 少妇高潮的动态图| 黑人猛操日本美女一级片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲一区二区三区欧美精品| av在线播放精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 午夜免费观看性视频| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩av免费高清视频| 精品久久久精品久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧洲日产国产| 国模一区二区三区四区视频| 曰老女人黄片| 水蜜桃什么品种好| 午夜福利视频在线观看免费| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 美女中出高潮动态图| 久久热精品热| 国产成人精品婷婷| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲图色成人| 国产在线免费精品| 看非洲黑人一级黄片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 18+在线观看网站| 国产精品 国内视频| 高清av免费在线| 2021少妇久久久久久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成年人免费黄色播放视频| 观看av在线不卡| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品一区二区在线观看99| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久久久精品精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 丝袜美足系列| 亚洲精品一区蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人毛片a级毛片在线播放| 国产亚洲最大av| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 午夜日本视频在线| 国产精品一区二区在线不卡| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 少妇高潮的动态图| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 女性被躁到高潮视频| 秋霞伦理黄片| 午夜日本视频在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人影院久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 波野结衣二区三区在线| 亚洲国产av影院在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 内地一区二区视频在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| xxx大片免费视频| 日韩亚洲欧美综合| 美女中出高潮动态图| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 视频中文字幕在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 少妇 在线观看| 亚洲精品一二三| 日本午夜av视频| 老司机影院成人| 免费看不卡的av| 成人手机av| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 看十八女毛片水多多多| 亚洲综合色网址| 99热6这里只有精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 高清毛片免费看| 人妻夜夜爽99麻豆av| av天堂久久9| 乱人伦中国视频| 边亲边吃奶的免费视频| 在线观看国产h片| 亚洲精品一区蜜桃| 一级,二级,三级黄色视频| 观看美女的网站| 午夜视频国产福利| 欧美日韩视频精品一区| 免费观看的影片在线观看| 国产成人一区二区在线| 99热国产这里只有精品6| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久久久国产网址| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久国产精品麻豆| 日韩三级伦理在线观看| 婷婷色av中文字幕| 国产免费福利视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| av在线观看视频网站免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日本欧美视频一区| 欧美bdsm另类| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 熟妇人妻不卡中文字幕| 成人免费观看视频高清| 观看av在线不卡| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品一区www在线观看| 亚洲第一av免费看| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲精品色激情综合| 午夜免费鲁丝| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品99久久久久久久久| 最黄视频免费看| 国产在视频线精品| 免费看光身美女| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜精品国产一区二区电影| 日本黄大片高清| 毛片一级片免费看久久久久| 色5月婷婷丁香| 中文字幕最新亚洲高清| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产一级毛片在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 啦啦啦啦在线视频资源| 制服丝袜香蕉在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲av在线观看美女高潮| 视频在线观看一区二区三区| 午夜激情av网站| 在线看a的网站| 亚洲欧美清纯卡通| 99re6热这里在线精品视频| 欧美国产精品一级二级三级| 男人添女人高潮全过程视频| 26uuu在线亚洲综合色| 蜜桃国产av成人99| 我的老师免费观看完整版| 免费观看无遮挡的男女| 欧美激情国产日韩精品一区| 成人国产av品久久久| 母亲3免费完整高清在线观看 | 美女视频免费永久观看网站| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩免费高清中文字幕av| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 青青草视频在线视频观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 永久免费av网站大全| 99久国产av精品国产电影| 全区人妻精品视频| 中文字幕av电影在线播放| 国产毛片在线视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产高清三级在线| av免费观看日本| 国产亚洲一区二区精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 嫩草影院入口| 黄色一级大片看看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 69精品国产乱码久久久| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩视频在线欧美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 成人漫画全彩无遮挡| 乱人伦中国视频| 国产av码专区亚洲av| 一边亲一边摸免费视频| 欧美丝袜亚洲另类| av有码第一页| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 简卡轻食公司| 99re6热这里在线精品视频| 26uuu在线亚洲综合色| 五月天丁香电影| 91精品一卡2卡3卡4卡| 26uuu在线亚洲综合色| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产熟女午夜一区二区三区 | 久久狼人影院| 街头女战士在线观看网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产黄频视频在线观看| 嫩草影院入口| h视频一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜91福利影院| 考比视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 一本一本综合久久| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲国产av新网站| 97精品久久久久久久久久精品| 岛国毛片在线播放| 久久久国产一区二区| 嘟嘟电影网在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲国产最新在线播放| 黑丝袜美女国产一区| 午夜91福利影院| 国产av精品麻豆| 日韩欧美精品免费久久| 欧美日韩综合久久久久久| 成人无遮挡网站| 亚洲成色77777| 国产片特级美女逼逼视频| 人成视频在线观看免费观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲av中文av极速乱| 超碰97精品在线观看| av播播在线观看一区| 中文字幕制服av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 丝袜喷水一区| 日韩av免费高清视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 天美传媒精品一区二区| www.av在线官网国产| 午夜91福利影院| 满18在线观看网站| 99热全是精品| av免费观看日本| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 两个人免费观看高清视频| 18禁在线播放成人免费| 看免费成人av毛片| 能在线免费看毛片的网站| 天堂中文最新版在线下载| 午夜激情av网站| 中文欧美无线码| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久视频综合| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 最新中文字幕久久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 九色成人免费人妻av| 日韩成人伦理影院| 91久久精品国产一区二区成人| 国产有黄有色有爽视频| 老司机影院成人| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区|