基于HPLC指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計量學(xué)的旋覆花藥材質(zhì)量評價研究

林 麗，李歡歡，謝 輝，嚴(yán)國俊，胡玉濤，陸兔林*，毛春芹*

基于HPLC指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計量學(xué)的旋覆花藥材質(zhì)量評價研究

林 麗1，李歡歡1，謝 輝1，嚴(yán)國俊1，胡玉濤2*，陸兔林1*，毛春芹1*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023 2. 江蘇聯(lián)合職業(yè)技術(shù)學(xué)院連云港中醫(yī)藥分院，江蘇 連云港 222000

建立旋覆花藥材的HPLC指紋圖譜及同時測定綠原酸、咖啡酸、蘆丁、花旗松素、1,5--二咖啡先奎寧酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、槲皮素、狹葉依瓦菊素8個成分含量的方法，運用化學(xué)計量學(xué)對不同產(chǎn)地旋覆花藥材進(jìn)行質(zhì)量評價。采用Dubhe C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.05%磷酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫；體積流量1.0 mL/min；檢測波長205 nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃。采用中藥指紋圖譜相似度評價軟件進(jìn)行相似度分析，結(jié)合主成分分析和偏最小二乘法判別分析尋找并分析7個產(chǎn)地旋覆花藥材間的差異成分及其分布特點。建立了旋覆花藥材的HPLC指紋圖譜，相似度為0.88～0.98，標(biāo)定共有峰20個，通過對照品比對指認(rèn)出綠原酸、咖啡酸、蘆丁、花旗松素、1,5--二咖啡先奎寧酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、槲皮素、狹葉依瓦菊素8個共有峰，樣品一致性良好。通過主成分分析將樣品聚為4類，結(jié)合偏最小二乘法判別分析發(fā)現(xiàn)咖啡酸、綠原酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯等7個成分是造成樣品差異性的主要標(biāo)記性成分。含量測定結(jié)果表明：各產(chǎn)地8種成分總量江蘇＞甘肅＞河南＞浙江＞河北＞安徽＞山東。首次建立了旋覆花藥材HPLC指紋圖譜及倍半萜類、黃酮類、酚酸類多成分含量測定的質(zhì)量評價方法，操作簡便、結(jié)果可靠，明確了不同產(chǎn)地旋覆花藥材間成分的差異，為旋覆花藥材的資源開發(fā)及利用提供依據(jù)。

旋覆花；指紋圖譜；化學(xué)計量學(xué)；多成分定量；綠原酸；咖啡酸；蘆??；花旗松素；1,5--二咖啡先奎寧酸；1--乙酰旋覆花內(nèi)酯；槲皮素；狹葉依瓦菊素

旋覆花為菊科植物旋覆花Thunb.或歐亞旋覆花L.的干燥頭狀花序，具有降氣、消痰、行水、止嘔的功效，主治風(fēng)寒咳嗽、喘咳痰多、嘔吐噫氣、心下痞硬等癥[1]，主產(chǎn)于河南、江蘇、浙江等地。旋覆花成分復(fù)雜，主要含有倍半萜內(nèi)酯類、黃酮類、酚酸類、萜類等化學(xué)成分[2-5]，具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、抗氧化等藥理作用[5-9]，文獻(xiàn)研究表明倍半萜內(nèi)酯類成分為旋覆花特征性成分[5]，黃酮類、酚酸類成分也是其抗菌、消炎的主要活性成分[10]?！吨袊幍洹?015年版一部旋覆花藥材項下僅有薄層鑒別，旋覆花藥材的質(zhì)量研究多集中于倍半萜類、總黃酮類等同類成分的含量測定研究[11-12]以及指紋圖譜研究[13-14]?，F(xiàn)有文獻(xiàn)對旋覆花藥材的質(zhì)量研究尚不全面，數(shù)據(jù)分析方法較為單一，指紋圖譜結(jié)合模式識別方法能真實、形象地反映中藥質(zhì)量差異，揭示復(fù)雜化合物之間的規(guī)律，已被應(yīng)用于藥物的質(zhì)量控制、差異標(biāo)志物的篩選等方面[15-16]。因此，本實驗收集同一基原多產(chǎn)地的旋覆花藥材，建立HPLC指紋圖譜，有效分離色譜峰，實現(xiàn)了倍半萜類、黃酮類、酚酸類的多成分同時測定，指認(rèn)出綠原酸、咖啡酸、蘆丁、花旗松素、1,5--二咖啡先奎寧酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、槲皮素、狹葉依瓦菊素8個化學(xué)成分。結(jié)合化學(xué)計量學(xué)對數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析，篩選出造成產(chǎn)地差異的標(biāo)記性成分，尋求產(chǎn)地間的差異，有利于旋覆花藥材資源的開發(fā)利用，以期為旋覆花藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀[安捷倫科技（中國）有限公司]；MS-105D型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-500E型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

1--乙酰旋覆花內(nèi)酯（批號CFS201802）、狹葉依瓦菊素（批號CFS201801）均購自武漢天植生物技術(shù)有限公司；1,5--二咖啡?？鼘幩幔ㄅ朠26F9F54633）、花旗松素（批號Z07M6B1）、綠原酸（批號Y24J7K16726）、蘆丁（批號Y22S653719）均購自上海源葉生物科技有限公司；咖啡酸（批號110885-200102）、槲皮素（批號10081-9905）均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈（HPLC級，德國Merck公司）；色譜純磷酸（上海化學(xué)試劑有限公司）；水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純（山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）；Dubhe C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，漢邦科技）。35批旋覆花藥材的產(chǎn)地見表1，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定均為菊科植物旋覆花Thunb.的干燥頭狀花序。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC色譜條件

Dubhe C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（B）-0.05%磷酸水溶液（A），梯度洗脫，0～45 min，90%～75% A；45～50 min，75%～70% A；50～85 min，70%～60% A；85～90 min，60%～90% A；檢測波長為205 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

表1 旋覆花樣品的來源

2.2 混合對照品溶液的制備

分別精密稱取綠原酸、咖啡酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、1,5--二咖啡?？鼘幩帷⒒ㄆ焖伤?、蘆丁、槲皮素、狹葉依瓦菊素對照品適量，加70%甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為1.11、0.078、1.58、99.3、0.354、4.19、0.776、1.43 mg/mL的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取樣品粉末（過4號篩）約1.0 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密稱取綠原酸、咖啡酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、1, 5--二咖啡酰奎寧酸、花旗松素、蘆丁、槲皮素、狹葉依瓦菊素對照品適量，加70%甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為1.67、0.117、2.36、148.9、0.531、6.29、1.16、2.15 mg/mL的混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液，用倍比稀釋的方法以70%甲醇制成系列對照品溶液，在“2.1”項色譜條件下，分別進(jìn)樣10 μL，每個質(zhì)量濃度2針，記錄各峰面積的值，以峰面積平均值（）對質(zhì)量濃度（）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表2。

表2 有效成分的回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)

2.4.2 精密度試驗 取旋覆花樣品（S6）1.0 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，“2.1”項下色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄指紋圖譜，以1,5--二咖啡?？鼘幩釣閰⒄辗?，計算各共有峰相對峰面積的RSD為0.54%～3.08%，相對保留時間的RSD為0.04%～0.67%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗 精密稱取旋覆花樣品（S6）1.0 g，平行6份，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，“2.1”項下色譜條件測定，記錄指紋圖譜，以1, 5--二咖啡?？鼘幩釣閰⒄辗澹嬎愀鞴灿蟹逑鄬Ψ迕娣e的RSD為0.54%～3.37%，相對保留時間的RSD為0.02%～1.57%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取旋覆花樣品（S6）1.0 g，精密稱定，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄指紋圖譜，以1,5--二咖啡?？鼘幩釣閰⒄辗?，計算各共有峰相對峰面積的RSD為0.47%～3.33%，相對保留時間的RSD為0.02%～0.43%，表明在該條件下供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取已測定的8種成分含量的旋覆花藥材粉末（S6）9份，每份0.5 g，分成3組，每組3份，分別精密加入含綠原酸1.11 mg/mL、咖啡酸0.078 mg/mL、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯1.58 mg/mL、1,5--二咖啡?？鼘幩?9.3 mg/mL、花旗松素0.354 mg/mL、蘆丁4.19 mg/mL、槲皮素0.776 mg/mL、狹葉依瓦菊素1.43 mg/mL的混合對照品溶液0.5、1.0、1.5 mL，按“2.3”項下方法制備成供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進(jìn)樣測定，計算平均加樣回收率。結(jié)果表明，綠原酸、咖啡酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、1,5--二咖啡酰奎寧酸、花旗松素、蘆丁、槲皮素、狹葉依瓦菊素的平均回收率分別為99.97%、98.87%、101.84%、100.94%、100.13%、101.04%、99.05%、101.45%，RSD分別為0.74%、1.44%、2.75%、1.66%、1.33%、1.60%、1.49%、2.77%。

2.5 旋覆花藥材指紋圖譜的建立及共有峰的標(biāo)定

2.5.1 旋覆花藥材指紋圖譜的建立 分別取35批不同產(chǎn)地的旋覆花藥材1.0 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，將35批旋覆花藥材指紋圖譜依次導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012版）軟件，設(shè)定S6為參照圖譜，采用平均數(shù)法，時間窗寬度為0.5，進(jìn)行多點校正和色譜峰匹配，并進(jìn)行了相似度計算，結(jié)果見表3；確定了20個共有峰，得到旋覆花藥材指紋圖譜疊加圖，見圖1；生成旋覆花藥材的共有模式特征圖譜，見圖2。

2.5.2 旋覆花藥材指紋圖譜共有峰的標(biāo)定 通過與對照品對照，指認(rèn)出其中8個色譜峰，分別為綠原酸（6號峰）、咖啡酸（8號峰）、蘆丁（9號峰）、花旗松素（10號峰）、1,5--二咖啡酰奎寧酸（12號峰）、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯（16號峰）、槲皮素（17號峰）、狹葉依瓦菊素（20號峰）。在35批旋覆花藥材指紋圖譜中，以12號1,5--二咖啡?？鼘幩嵘V峰分離良好，峰面積適中，所以確定12號色譜峰為參照峰，計算各共有峰的相對峰面積。

表3 旋覆花樣品的相似度

圖1 35批旋覆花藥材指紋圖譜

6-綠原酸 8-咖啡酸 9-蘆丁 10-花旗松素 12-1,5-O-二咖啡?？鼘幩?16-1-O-乙酰旋覆花內(nèi)酯 17-槲皮素 20-狹葉依瓦菊素

2.5.3 旋覆花藥材指紋圖譜的相似度評價 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012版）軟件計算指紋圖譜相似度（表3），結(jié)果顯示，35批旋覆花藥材指紋圖譜的相似度在0.88～0.98，相似度在0.9以上的藥材占85.71%；35批旋覆花藥材的20個共有峰相對保留時間的RSD均小于2.06%，相對峰面積的RSD為8.91%～79.71%。說明不同產(chǎn)地間旋覆花藥材整體化學(xué)組分類似，藥材質(zhì)量穩(wěn)定，但可能由于受到氣候、土壤、地勢地貌等環(huán)境因素以及采收加工過程中人為因素的影響，導(dǎo)致藥材內(nèi)在化學(xué)成分的含量存在一定差異。

2.6 主成分分析（PCA）

PCA其本質(zhì)是以最大方差為原則進(jìn)行分析，將數(shù)據(jù)的多元變量抽取出少量主成分，前幾個主成分對于復(fù)雜的中藥體系而言，往往能夠表征化學(xué)量測數(shù)據(jù)的整體情況[17-19]。為了進(jìn)一步分析35批樣品間的差異，以主成分的特征值和累積貢獻(xiàn)率作為選擇主成分的依據(jù)，采用SPSS 22.0軟件對35批旋覆花藥材數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析，相關(guān)系數(shù)的特征值和方差貢獻(xiàn)率見表4。以特征值＞1為提取標(biāo)準(zhǔn)，可提取4個主成分，其累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)95.56%，可代表旋覆花藥材指紋圖譜共有峰的大部分信息。

將矩陣數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P＋13.0軟件，采用非監(jiān)督識別方法進(jìn)行主成分分析觀察旋覆花藥材的自然聚集，35批旋覆花藥材的PCA得分矩陣圖見圖3，7個產(chǎn)地的旋覆花藥材可以完全區(qū)分為4類，可直觀顯示樣品間的差異。由圖3可知，聚為一組的樣品存在產(chǎn)地間的差異性，同產(chǎn)地內(nèi)也存在差異性。江蘇產(chǎn)地樣品間離散度較大；山東、河北聚為一類但內(nèi)部差異性顯著，可能是因為這2個產(chǎn)地均為沿海城市且相鄰，但氣候、地理環(huán)境仍存在差異，導(dǎo)致樣品化學(xué)成分存在差別。

表4 特征值和方差貢獻(xiàn)率

1-甘肅 2-江蘇 3-山東、河北 4-河南、浙江、安徽，下同圖

2.7 偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）

為更好地觀察組間差異，在PCA的基礎(chǔ)上選擇有監(jiān)督模式的PLS-DA進(jìn)行了各組間的判別分析。結(jié)合評價PLS-DA模型的3個指標(biāo)：模型擬合參數(shù)2＝0.876，2＝0.976，模型預(yù)測參數(shù)2＝0.971，均大于0.5，表明建立的數(shù)學(xué)模型穩(wěn)定且預(yù)測能力較強(qiáng)。PLS-DA得分矩陣圖見圖4，可看出不同產(chǎn)地的樣品集中在不同區(qū)域，與PCA結(jié)果一致。

結(jié)合變量重要性投影值（variable importance in the projection，VIP）篩選出引起組間差異的主要標(biāo)記性成分，VIP得分圖見圖5，擁有較大VIP值的變量（VIP＞1），對分類的貢獻(xiàn)越大[17]，篩選出貢獻(xiàn)率較大的7個變量，按VIP大小排序依次為咖啡酸（8號峰）、5號峰、綠原酸（6號峰）、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯（16號峰）及3、15、2號峰，這些成分在區(qū)分不同產(chǎn)地旋覆花藥材間起到重要作用，是其主要標(biāo)志性成分。

圖4 35批旋覆花藥材的PLS-DA得分圖

圖5 旋覆花藥材20個色譜峰的VIP值

2.8 旋覆花樣品含量測定及結(jié)果分析

取35批旋覆花藥材樣品，平行3份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，計算8種化學(xué)成分含量見表5。

按照產(chǎn)地進(jìn)行區(qū)分，不同產(chǎn)地樣品所測的8種成分含量差異明顯。結(jié)果表明，1,5--二咖啡?？鼘幩崾歉鳟a(chǎn)地旋覆花樣品中含量最高的化學(xué)成分，在107.501～212.425 mg/g，以甘肅產(chǎn)地含量最高，山東產(chǎn)地最低；7個產(chǎn)地中1--乙酰旋覆花內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到0.120～3.935 mg/g，以河北產(chǎn)地最高，安徽產(chǎn)地最低；倍半萜類成分總量以江蘇產(chǎn)地最高，含量達(dá)到5.953～6.643 mg/g，甘肅產(chǎn)地最低；3個主要標(biāo)記性成分（咖啡酸、綠原酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯）總量范圍在3.871～10.448 mg/g，河北＞江蘇＞山東＞河南＞浙江＞安徽＞甘肅。

表5 35批旋覆花樣品中8種成分含量測定結(jié)果(n＝3)

綜上所述，甘肅產(chǎn)地咖啡酸、蘆丁、1,5--二咖啡?？鼘幩岷孔罡撸ㄆ焖伤?、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、槲皮素、狹葉依瓦菊素含量最低，與其他產(chǎn)地成分差異顯著，與指紋圖譜相似度評價結(jié)果和PCA結(jié)果一致。各產(chǎn)地8種成分總量江蘇＞甘肅＞河南＞浙江＞河北＞安徽＞山東，同一成分在各產(chǎn)地旋覆花藥材中的含量差異顯著，不同成分的含量波動范圍不同。

3 討論

本實驗考察了回流法、超聲提取法2種提取方法，結(jié)果表明超聲處理與回流提取無顯著差異，故選擇超聲處理制備樣品。同時對提取溶劑（50%、60%、70%、80%）甲醇、（50%、60%、70%、80%）乙醇，料液比（1∶15、1∶30）進(jìn)行綜合考察，發(fā)現(xiàn)以70%甲醇為提取溶劑，液料比1∶30時，提取效果最佳，色譜峰基線較為平穩(wěn)、雜質(zhì)干擾較少，因此選擇30 mL 70%甲醇為提取溶劑。

本實驗通過DAD檢測器進(jìn)行全波長掃描，在205 nm檢測條件下可以一次性完成檢測，色譜峰信息全面，各峰吸收均勻，整體峰形良好；同時比較了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液等流動相系統(tǒng)梯度洗脫情況，發(fā)現(xiàn)乙腈-0.05%磷酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫時色譜峰分離度較好、對稱性最好，雜質(zhì)干擾較小，確定流動相通過最終優(yōu)化建立較全面的旋覆花藥材HPLC指紋圖譜。

對7個產(chǎn)地35批旋覆花藥材建立指紋圖譜，指認(rèn)出綠原酸、咖啡酸、蘆丁、花旗松素、1,5--二咖啡先奎寧酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、槲皮素、狹葉依瓦菊素8個成分，同時采用不同分析方法[18-19]對旋覆花藥材20個共有峰進(jìn)行多元統(tǒng)計分析，考察樣品整體性與差異性。結(jié)果表明，PCA和PLS-DA分析結(jié)果一致，樣品聚為4類，山東與河北產(chǎn)地由于生態(tài)環(huán)境相似，相鄰且均為沿海城市因而聚為一類，但內(nèi)部能明顯區(qū)分；甘肅產(chǎn)地聚為一類，與其他產(chǎn)地相距較遠(yuǎn)，與相似度結(jié)果一致；VIP篩選出7個主要標(biāo)記性成分，通過對照品指認(rèn)出咖啡酸、綠原酸、1--乙酰旋覆花內(nèi)酯這3個成分。不同產(chǎn)地間的成分差異可能來源于地形地貌、氣候、土壤等因素在其生長代謝過程中產(chǎn)生的影響，同一產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境相似，但藥材質(zhì)量也會受采收時間、種植方式等因素影響?！吨袊幍洹?015年版一部旋覆花藥材無含量測定項，實驗篩選出的標(biāo)記性成分可為旋覆花藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供科學(xué)依據(jù)，基于網(wǎng)路藥理學(xué)研究可知1--乙酰旋覆花內(nèi)酯、狹葉依瓦菊素、槲皮素為旋覆花活性成分，可為旋覆花降氣止嘔功效機(jī)制研究打下基礎(chǔ)，本實驗僅收集單一基原的旋覆花藥材樣品，對旋覆花藥材多基原的分析尚未進(jìn)行，有望后續(xù)采集歐亞旋覆花樣品進(jìn)行深入研究，比較兩個基原樣品間指紋圖譜的差異和主要標(biāo)記性成分的異同，為建立全面科學(xué)的旋覆花藥材質(zhì)量評價體系提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典[S]. 一部. 2015: 325.

[2] 覃江江四種旋覆花屬藥用植物中新型倍半萜的發(fā)現(xiàn)及生物活性研究[D]. 上海: 上海交通大學(xué), 2011.

[3] 朱虹, 唐生安, 秦楠, 等. 旋覆花中化學(xué)成分及其活性研究 [J]. 中國中藥雜志, 2014, 39(1): 83-88.

[4] 吳一兵, 王云志, 查建蓬, 等. 歐亞旋覆花中三萜和甾體化合物的分離和結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 中草藥, 2006, 37(5): 666-668.

[5] 張婷, 杜冠華, 陳若蕓. 旋覆花屬植物中倍半萜類成分及生物活性的研究進(jìn)展 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2010, 45(24): 1889-1894.

[6] Yu Z P, Zhang J S, Zhang Q Q,. Bioactive sesquiterpenoids and sesquiterpenoid glucosides from the flowers of[J]., 2019, 138: 104292.

[7] Mohti H, Taviano M F, Cacciola F,.(L.) Aiton leaves and flower buds: Effect of extraction solvent/technique on their antioxidant ability, antimicrobial properties and phenolic profile [J]., 2020, 34(1): 46-52.

[8] 于峰, 王思明, 董玫, 等. 三種倍半萜類化合物體外抗腫瘤細(xì)胞增殖活性研究 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2010, 22(3): 506-509.

[9] 張馨予, 王喆星, 單俊杰. 旋覆花屬植物化學(xué)成分及生物活性的研究進(jìn)展 [J]. 國際藥學(xué)研究雜志, 2008, 35(6): 433-440.

[10] Kim S R, Park M J, Lee M K,. Flavonoids ofprotect cultured cortical cells from necrotic cell death induced by glutamate [J]., 2002, 32(7): 596-604.

[11] 楊茜, 劉慧, 何雅君, 等. HPLC法同時測定旋覆花屬植物中5種倍半萜內(nèi)酯成分的含量 [J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報, 2012, 29(2): 116-120.

[12] 耿紅梅. RP-HPLC法同時測定歐亞旋覆花中4種黃酮的含量 [J]. 中國藥房, 2009, 20(27): 2122-2123.

[13] 侯艷鵬, 王建華, 尚明英, 等. 旋覆花藥材HPLC指紋圖譜研究 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2002, 37(12): 894-899.

[14] 施之琪, 付建武, 蔡春暉, 等. 旋覆花配方顆粒HPLC特征圖譜研究 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2017, 28(6): 765-770.

[15] Peng Q, Tian R, Chen F,. Discrimination of producing area of Chinese Tongshan Kaoliang Spirit using electronic nose sensing characteristics combined with the chemometrics methods [J]., 2015, 178: 301-305.

[16] 甄亞欽, 馮玉, 田偉, 等. 忍冬不同部位UPLC指紋圖譜及化學(xué)模式識別研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(18): 4449-4454.

[17] Liang J, Wu W Y, Sun G X,. A dynamic multiple reaction monitoring method for the multiple components quantification of complex traditional Chinese medicine preparations: Niuhuang Shangqing Pill as an example [J]., 2013, 1294: 58-69.

[18] 王琪, 李曉琦, 黃萌萌, 等. 基于指紋圖譜及多成分含量的化學(xué)模式識別法評價不同產(chǎn)地梔子藥材的質(zhì)量 [J]. 中草藥, 2019, 50(11): 2690-2699.

[19] 秦建平, 李家春, 吳建雄, 等. 基于UPLC結(jié)合化學(xué)計量學(xué)方法的龍血竭指紋圖譜研究 [J]. 中國中藥雜志, 2015, 40(6): 1114-1118.

Quality study ofbased on HPLC and chemometrics

LIN Li1, LI Huan-huan1, XIE Hui1, YAN Guo-jun1, HU YU-tao2, LU Tu-lin1, MAO Chun-qin1

1. College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. Lianyungang TCM Branch of Jiangsu Union Technical Institute, Lianyungang 222000, China

To establish HPLC fingerprints and simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid, rutin, taxifolin, 1,5--dicaffeoylqunic acid, 1--acetyl britannilactone, quercetin, ivangustin of, the chemometrics method was used to carry out the quality evaluation offrom different producing areas.Separation was performed on Hanbon Dubhe C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) and mobile phase was acetonitrile-0.05% phosphoric acid with gradient elution, the flow rate was 1.0 mL/min. The detection wavelength was 205 nm, the injection volume was 10 μL and the column temperature was 30 ℃. Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of traditional Chinese medicine (TCM) was adopted; Principal component analysis (PCA) and discriminant analysis by partial least square method (PLS-DA) were used to identify and analyze the differential components in 35 batches offrom seven habitats.The fingerprints ofwere established, the similarity was 0.88—0.98. There were 20 common peaks in the fingerprints and 8 common peaks of chlorogenic acid, caffeic acid, rutin, taxifolin, 1,5--dicaffeoylqunic acid, 1--acetyl britannilactone, quercetin, ivangustin were identified by reference substances, indicating good consistency of the samples. The samples were clustered into four categories by PCA. Combined with PLS-DA, seven components, such as caffeic acid, chlorogenic acid, and 1--acetyl britannilactone, were found to be the main markers for sample variability. Content determination results showed that eight components of each producing area is Jiangsu > Gansu > Henan > Zhejiang > Hebei > Anhui > Shandong.The establishment of HPLC fingerprint quality evaluation method and multi-component determination method of sesquiterpenes, flavonoids and phenolic acids ofwas easy to operate and reliable, clarified the difference of composition between different producing areas, which provided the basis for the exploitation and utilization of medicinal materials.

; fingerprint; chemometrics; assay of multi-component; chlorogenic acid; caffeic acid; rutin; taxifolin; 1,5--dicaffeoylqunic acid; 1--acetyl britannilactone; quercetin; ivangustin

R286.2

A

0253 - 2670(2021)06 - 1751 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.06.025

2020-08-06

國家重點研發(fā)計劃：中藥飲片質(zhì)量識別關(guān)鍵技術(shù)研究（2018YFC1707000）

林 麗，女，在讀碩士，主要從事中藥炮制及中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: 15952788450 E-mail: 1306124026@qq.com

陸兔林，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制及中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: 13951636763 E-mail: lutuling2005@ 126.com毛春芹，女，正高級實驗師，主要從事新藥研發(fā)及藥物制劑研究。E-mail: mcq63@163.com

胡玉濤，男，講師，主要從事藥用植物教學(xué)研究。Tel: 15705142858 E-mail: 907773517@qq.com

[責(zé)任編輯 時圣明]