子宮頸細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染在子宮頸癌早期篩查中的應(yīng)用

潘思瓊，陸奉科，張雪梅，譚凌峰

子宮頸癌是繼乳腺癌之后的第二大婦科常見腫瘤，也是女性癌癥死亡的第三大主要原因[1]。據(jù)報(bào)道，全球子宮頸癌的發(fā)病人數(shù)每年超過53萬，每年死亡人數(shù)接近27.5萬[2]。子宮頸癌篩查和預(yù)防顯得尤為重要。傳統(tǒng)的免疫組化單染技術(shù)具有一定的局限性，免疫組化雙染技術(shù)的出現(xiàn)增加了子宮頸癌的篩查手段，彌補(bǔ)了單染技術(shù)的不足。本文應(yīng)用宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查(thinprep cytologic test, TCT)、細(xì)胞蠟塊及組織蠟塊p16/Ki-67雙染進(jìn)行檢測，以組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，比較TCT及細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染在子宮頸癌早期篩查中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2017年1月～2019年1月在廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院婦科收治的136例患者，年齡17～78歲，檢測結(jié)果均經(jīng)兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的高年資病理醫(yī)師分別閱片后共同診斷。

1.2 方法

1.2.1TCT 采用液基細(xì)胞學(xué)方法制片，巴氏染色。

1.2.2p16/Ki-67雙染檢測 采用Roche Benchmark XT(羅氏全自動(dòng)免疫組化儀)進(jìn)行脫蠟，抗原修復(fù)，封閉，Ki-67一抗，二抗孵育，DAB顯色，DAB增強(qiáng)，變性，p16一抗，二抗，紅染，襯染，復(fù)染即完成。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1TCT結(jié)果判讀 本實(shí)驗(yàn)中以發(fā)現(xiàn)不除外上皮內(nèi)高度病變的非典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cells, cannot exclude HSIL, ASC-H)、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)及浸潤癌為細(xì)胞學(xué)陽性病例。

1.3.2細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染結(jié)果判讀 一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞胞核呈棕色，且細(xì)胞質(zhì)呈紅色判讀為陽性；未觀察到任何一個(gè)細(xì)胞出現(xiàn)紅色胞質(zhì)且棕色胞核，即細(xì)胞只有Ki-67表達(dá)或者p16表達(dá)，或者既無p16表達(dá)也無Ki-67表達(dá)均判為陰性。

1.3.3陰道鏡檢查活檢判讀 以病理診斷子宮頸HSIL及浸潤癌為陽性；診斷低級別上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intra-epithelial lesion, LSIL)及子宮頸炎為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用n(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用MedCalc軟件比較TCT、p16/Ki-67雙染檢測的AUC。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TCT、細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染對HSIL檢出率的對比分析選取行TCT并經(jīng)陰道鏡活檢的標(biāo)本136例，組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性57例。以組織學(xué)診斷為標(biāo)準(zhǔn)，TCT檢測陽性48例，陽性率為35.3%，靈敏度為70.2%(40/57)，特異度為89.9%(71/79)，陽性預(yù)測值為83.3%(40/48)，陰性預(yù)測值為80.7%(71/88)；細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染陽性59例，陽性率為43.4%，靈敏度為100.0%(57/57)，特異度為97.5%(77/79)，陽性預(yù)測值為96.6%(57/59)，陰性預(yù)測值為100.0%(77/77)，兩者對HSIL檢測陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.84，P=0.043，表1)。

表1 TCT、細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染對HSIL檢出率的對比分析

2.2 兩種篩查方法效果評價(jià)采用MedCalc軟件進(jìn)行ROC曲線的繪制及Z檢驗(yàn)分析，以組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，比較TCT及細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染檢測效果，TCT(AUC=0.800)與細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染(AUC=0.987)的AUC比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.312，P<0.000 1，圖1)。

圖1 兩種篩查方法的ROC曲線

3 討論

子宮頸癌早期篩查目的是為了發(fā)現(xiàn)HSIL和可能發(fā)展為HSIL的病變[3]。本組TCT的檢出率為35.3%，靈敏度為70.2%，特異度為89.9%，具有較高的特異性，但敏感性較差，與Pan等[4]研究結(jié)果一致；細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染的檢出率為43.4%，靈敏度為100.0%，特異度為97.5%，提示細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染能夠早期反映子宮頸癌惡性進(jìn)展及癌前病變，靈敏度及特異度高[5]，同時(shí)也彌補(bǔ)了TCT中主觀因素導(dǎo)致的漏診及誤診。細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染與病理活檢有較高的符合率及準(zhǔn)確性，是判斷子宮頸病變惡性程度的良好指標(biāo)，能夠幫助臨床醫(yī)師對患者進(jìn)行精細(xì)分層管理，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)早期干預(yù)[6]。

值得注意的是，在檢測結(jié)果中，有57例活檢病理檢查結(jié)果陽性，經(jīng)組織蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性者53例，經(jīng)細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性者59例。結(jié)果提示對于某些病例，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本相對組織活檢具有一定的優(yōu)勢，該優(yōu)勢得益于細(xì)胞學(xué)標(biāo)本取材方式的全面性及細(xì)胞蠟塊制作方法的優(yōu)化。通常宮頸液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本取材時(shí)受檢者取截石位，陰道鏡下充分暴露子宮頸，將毛刷輕輕插入子宮頸通道，適度力量抵住采樣器，按順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)5圈，完成后，將刷頭放入保存瓶內(nèi)漂洗。再運(yùn)用成熟的細(xì)胞蠟塊技術(shù)可最大程度地富集細(xì)胞量，使細(xì)胞形態(tài)完整、結(jié)構(gòu)清晰，且可長期保存，并可有效防止脫片，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性[7]。而活檢通常選擇性地鉗取肉眼可疑的病變組織，取材局限，尤其對于病變較少的病例，進(jìn)一步切片進(jìn)行免疫組化檢測時(shí)，在蠟塊修整和切片過程中極易將病變切除，導(dǎo)致免疫組化切片內(nèi)已沒有HE切片上表現(xiàn)的病變組織，免疫組化結(jié)果顯示為陰性。

綜上所述，細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染具有較高的靈敏性和特異性，對于標(biāo)本量少的組織具有顯著的診斷優(yōu)勢，給病理醫(yī)師及患者帶來極大的便利[8]，同時(shí)細(xì)胞蠟塊p16/Ki-67雙染還能減少不必要的陰道鏡轉(zhuǎn)診和子宮頸活檢，是一種可靠的子宮頸癌前病變標(biāo)志物[9]，在子宮頸癌前病變篩查中具有極其重要的應(yīng)用價(jià)值。