益心泰對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

孫濤，郭志華，李雅，龍?jiān)?，曾英，王?/p>

益心泰對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

孫濤1，郭志華2，李雅2，龍?jiān)?，曾英1，王月1

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208

觀察益心泰對(duì)心肌缺血再灌注損傷（MIRI）大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討其保護(hù)心肌的作用機(jī)制。采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支法建立MIRI大鼠模型。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和益心泰低、中、高劑量組。TTC染色檢測(cè)心肌梗死面積，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，ELISA檢測(cè)白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-1β和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，Western blot檢測(cè)Bax、Bcl-2、Caspase-3、LC3、Beclin 1、p62、JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3蛋白表達(dá)。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnⅠ）表達(dá)明顯升高（＜0.01）；心肌梗死面積顯著增加（＜0.01）；TNF-α、IL-6、IL-1β水平顯著升高（＜0.01）；LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin 1蛋白表達(dá)明顯升高（＜0.01），p62蛋白表達(dá)明顯降低（＜0.01）；Bax/Bcl-2和Caspase-3蛋白表達(dá)升高，細(xì)胞凋亡率明顯上升（＜0.01）；p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT顯著降低（＜0.01）。與模型組比較，益心泰各劑量組大鼠CK-MB及cTnⅠ表達(dá)明顯降低（＜0.01）；心肌梗死面積顯著減少（＜0.01）；TNF-α、IL-6、IL-1β水平顯著降低（＜0.01）；LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin 1蛋白表達(dá)明顯降低（＜0.01），p62蛋白表達(dá)明顯升高（＜0.01）；Bax/Bcl-2比值和Caspase-3蛋白表達(dá)降低，細(xì)胞凋亡率明顯降低（＜0.01）；p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT顯著升高（＜0.01）。JAK2特異性抑制劑AG490可逆轉(zhuǎn)益心泰對(duì)MIRI大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)、心肌損傷標(biāo)記物、細(xì)胞凋亡、自噬及炎癥反應(yīng)的影響。益心泰可通過激活JAK2/STAT3信號(hào)通路減輕MIRI大鼠炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡及過度自噬，從而保護(hù)心臟。

益心泰；缺血再灌注損傷；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞自噬；炎癥因子；JAK2/STAT3信號(hào)通路；大鼠

隨著人們生活方式的改變，我國缺血性心臟病發(fā)病率逐年上升，心臟急性缺血事件致死率居高不下，目前優(yōu)選的治療方案是開通閉塞血管，恢復(fù)血流再灌注，常用方式包括經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)和溶栓，但在再灌注過程中心肌組織均會(huì)受到損傷，即心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia- reperfusion injury，MIRI），情況嚴(yán)重時(shí)可能造成患者死亡。因此，急需尋找一種方法保護(hù)心臟，最大程度地減少M(fèi)IRI[1]。多項(xiàng)研究表明，中藥在減少M(fèi)IRI方面具有肯定療效，如黃芪、紅花、南葶藶子等[2-4]。上述藥物是益心泰的主要成分，益心泰在臨床治療心臟疾病20余年，安全性良好，且療效已得到驗(yàn)證[5-6]。本課題組前期研究表明，益心泰能通過抑制G蛋白偶聯(lián)受體和炎癥因子表達(dá)有效干預(yù)心肌梗死大鼠預(yù)后[7]，但其對(duì)MIRI是否有保護(hù)作用尚無實(shí)驗(yàn)闡釋。本研究旨在通過JAK2/STAT3信號(hào)通路探索益心泰對(duì)MIRI的保護(hù)作用及其分子機(jī)制，為今后研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性健康SD大鼠120只，清潔級(jí)，體質(zhì)量200～230 g，湖南省人民醫(yī)院動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2016-0002。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，室溫22～24 ℃，相對(duì)濕度52%～60%，光/暗周期12 h/12 h，自由攝食飲水，通風(fēng)，分籠飼養(yǎng)，飼料及水均由該中心提供。

1.2 藥物、試劑與儀器

益心泰由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中成藥制劑中心提供，全方由黃芪、紅花、丹參、澤瀉、豬苓、葶藶子按3∶1∶1∶2∶1∶1比例制備，批號(hào)20181102；JAK2特異性抑制劑AG490（美國Sigma，貨號(hào)SIH-428-25MG）；肌酸激酶同工酶（CK-MB，貨號(hào)E4606-100）和心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnⅠ，貨號(hào)PRO-345）檢測(cè)試劑盒（默沙克公司），白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測(cè)試劑盒（默沙克公司，貨號(hào)分別為PAB16919、583311-96、K4754-100）；TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（湖南玉堂春生物公司，貨號(hào)KTA2010）；兔抗大鼠Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3、LC3、Beclin 1、p62、β-actin抗體（英國Abcam公司）。

1.3 分組、造模和給藥

將實(shí)驗(yàn)大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組和益心泰低、中、高劑量組，每組12只。采用冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法復(fù)制大鼠MIRI模型[8]：大鼠腹腔注射2%異氟烷麻醉，仰臥位固定，氣管插管，連接微型人工呼吸機(jī)，正壓通氣。于左側(cè)第4肋間打開胸腔，剝開心包，暴露心臟。在左心耳根部與肺動(dòng)脈圓錐間用6-0絲線穿過，將冠狀動(dòng)脈左前降支（LAD）暫時(shí)結(jié)扎。以心電圖Ⅱ?qū)?lián)ST段抬高≥0.1 mV或T波高聳、心肌變暗紅色為結(jié)扎成功標(biāo)志。阻斷大鼠前降支血流30 min，恢復(fù)血供再灌注24 h。假手術(shù)組大鼠除不結(jié)扎LAD外，余手術(shù)步驟均相同。益心泰各劑量組根據(jù)成人體表面積換算法，按低（2.1 g/kg）、中（4.2 g/kg）、高（8.4 g/kg）劑量灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃，給藥體積均為10 mL，每日1次，連續(xù)7 d。為分析JAK2/STAT3信號(hào)通路在益心泰干預(yù)MIRI大鼠中作用，用AG490（1 mg/mL）單獨(dú)并與高劑量益心泰10 mL同時(shí)灌胃MIRI大鼠。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 心肌損傷標(biāo)記物

采集大鼠頸動(dòng)脈血，室溫放置30 min，3000 r/min離心15 min，收集血清。按照試劑盒說明書檢測(cè)血清CK-MB和cTnⅠ含量。

1.4.2 心肌梗死面積

大鼠處死后摘取心臟，將心臟垂直于心臟長(zhǎng)軸切開，切成3 mm切片。使用TTC染色，溫育、靜置24 h后用數(shù)碼相機(jī)拍攝圖像，檢測(cè)梗死區(qū)域面積。染色后非梗死區(qū)心肌呈深紅色，梗死區(qū)心肌呈淡白色。使用Image J軟件測(cè)量心肌梗死區(qū)域面積與心肌切片總面積的比值，用百分比表示。

1.4.3 細(xì)胞凋亡

取出心臟，擠干血液，沖洗干凈后取部分心肌組織，固定、脫水、包埋后，常規(guī)切片，厚度4 μm，用TUNEL法檢測(cè)，熒光顯微鏡（×200）下拍照，凋亡小體呈綠色熒光，細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)。細(xì)胞凋亡指數(shù)（%）＝凋亡細(xì)胞÷細(xì)胞總數(shù)×100%。每組動(dòng)物切5張片，每張取5個(gè)高倍視野統(tǒng)計(jì)凋亡細(xì)胞數(shù)，取平均值。

結(jié)合圖9、圖10可以得到，方鉛礦具有較好浮選回收率的礦漿電位區(qū)間與元素硫存在的電位-pH區(qū)間大致重合，這是因?yàn)樵诖藚^(qū)間內(nèi)生成的元素硫具有良好的疏水性，從而提高了方鉛礦浮選回收率。當(dāng)?shù)V漿電位過低時(shí)，溶液具有強(qiáng)還原性，此時(shí)硫元素會(huì)被還原成親水性的兩性離子HS-，使礦物疏水性減弱，回收率降低。當(dāng)?shù)V漿電位過高時(shí)，溶液呈強(qiáng)氧化性，會(huì)生成PbO，形成親水鈍化層[8]，同樣會(huì)影響方鉛礦浮選，使回收率降低。

1.5 JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)

取大鼠心肌組織，采用Western blot檢測(cè)Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3、LC3、Beclin 1及p62蛋白的表達(dá)，用GE AI600多功能成像儀掃描條帶，并用Gel-Pro Analyzer 4.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.6 炎癥因子含量檢測(cè)

收集小鼠血清，按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)。將樣品加入反應(yīng)孔，37 ℃孵育45 min，用洗滌液洗滌4次，加入生物素標(biāo)記的抗體，37 ℃孵育30 min，洗滌后加鏈霉親和素-HRP，混勻，37 ℃孵育30 min，加入顯色劑避光顯色15 min，再加終止液終止反應(yīng)，于波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)IL-6、IL-1β和TNF-α吸光度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 益心泰對(duì)模型大鼠心肌損傷標(biāo)志物及梗死面積的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織CK-MB及cTnⅠ水平明顯升高，心肌梗死面積明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）；與模型組比較，益心泰低、中、高劑量組大鼠心肌組織CK-MB及cTnⅠ水平明顯降低，心肌梗死面積明顯減少（＜0.01），且各指標(biāo)均呈劑量依賴關(guān)系，見圖1。TTC染色結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠心肌組織纖維排列整齊，無纖維結(jié)構(gòu)改變；模型組大鼠心肌組織纖維紊亂，出現(xiàn)肌絲溶解、空泡變性等病理變化；益心泰中、高劑量組大鼠心肌組織病理變化較模型組明顯改善。見圖2。

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.益心泰低劑量組；D.益心泰中劑量組；E.益心泰高劑量組；與A比較，**P＜0.01；與B比較，##P＜0.01

圖2 各組大鼠心肌組織形態(tài)（TTC染色，×400）

2.2 益心泰對(duì)模型大鼠心肌組織細(xì)胞凋亡的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織細(xì)胞凋亡率顯著增加（＜0.01）；與模型組比較，益心泰各劑量組大鼠心肌組織細(xì)胞凋亡率明顯降低（＜0.01）。見圖3。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織Bax表達(dá)升高，Bcl-2表達(dá)降低，Bax/Bcl-2比值、Caspase-3明顯升高（＜0.01）；與模型組比較，益心泰各劑量組大鼠心肌組織Bax表達(dá)降低，Bcl-2表達(dá)升高，Bax/Bcl-2比值、Caspase-3明顯降低（＜0.01），且各指標(biāo)均呈劑量依賴關(guān)系。見圖4。

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.益心泰低劑量組；D.益心泰中劑量組；E.益心泰高劑量組；與A比較，**P＜0.01；與B比較，##P＜0.01

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.益心泰低劑量組；D.益心泰中劑量組；E.益心泰高劑量組；與A比較，**P＜0.01；與B比較，##P＜0.01

2.3 益心泰對(duì)模型大鼠心肌細(xì)胞自噬的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表達(dá)明顯升高（＜0.01），p62蛋白表達(dá)明顯降低（＜0.01）；與模型組比較，益心泰各劑量組大鼠心肌LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表達(dá)明顯降低，p62蛋白表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01），且各指標(biāo)均呈劑量依賴關(guān)系。見圖5。

2.4 益心泰對(duì)模型大鼠心肌炎癥因子水平的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌IL-6、IL-1β和TNF-α含量明顯增加（＜0.01）；與模型組比較，益心泰各劑量組大鼠心肌IL-6、IL-1β和TNF-α含量明顯減少（＜0.01）。見圖6。

2.5 益心泰對(duì)模型大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路的影響

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.益心泰低劑量組；D.益心泰中劑量組；E.益心泰高劑量組；與A比較，**P＜0.01；與B比較，##P＜0.01

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.益心泰低劑量組；D.益心泰中劑量組；E.益心泰高劑量組；與A比較，**P＜0.01；與B比較，##P＜0.01

2.6 JAK2特異性抑制劑聯(lián)合益心泰對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠的影響

為進(jìn)一步證實(shí)益心泰通過JAK2/STAT3信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)MIRI大鼠保護(hù)作用，用JAK2特異性抑制劑AG490單獨(dú)及和益心泰同時(shí)干預(yù)MIRI大鼠。AG490可逆轉(zhuǎn)益心泰對(duì)MIRI大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白的磷酸化、心肌損傷標(biāo)記物、炎癥因子、細(xì)胞凋亡及自噬相關(guān)蛋白的影響。見圖8～圖12。

注：B.模型組；E.益心泰高劑量組；F. AG490組；G. AG490＋益心泰高劑量組；與B比較，**P＜0.01；與E比較，##P＜0.01

注：B.模型組；E.益心泰高劑量組；F. AG490組；G. AG490＋益心泰高劑量組；與B比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與E比較，##P＜0.01

注：B.模型組；E.益心泰高劑量組；F. AG490組；G. AG490＋益心泰高劑量組；與B比較，**P＜0.01；與E比較，##P＜0.01

注：B.模型組；E.益心泰高劑量組；F. AG490組；G. AG490+益心泰高劑量組；與B比較，**P＜0.01；與E比較，##P＜0.01

注：B.模型組；E.益心泰高劑量組；F. AG490組；G. AG490＋益心泰高劑量組；與B比較，**P＜0.01；與E比較，##P＜0.01

3 討論

MIRI因其多發(fā)性和不可避免性受到越來越多的關(guān)注。MIRI對(duì)手術(shù)效果和疾病轉(zhuǎn)歸都有直接的影響。MIRI是在多因素共同作用下發(fā)生的，機(jī)制十分復(fù)雜，迄今仍未完全明了。目前研究表明，細(xì)胞自噬、細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)均與MIRI關(guān)系密切[9]。

凋亡是受多因素調(diào)控的程序化細(xì)胞死亡，其中Bcl-2家族蛋白是凋亡的核心因素，目前發(fā)現(xiàn)的Bcl-2成員有22種，它們是一組同源或異源二聚體，按照其在凋亡過程中所起的不同作用，可分為以Bcl-2及Bcl-w為代表的抗凋亡蛋白，和以Bax及Bak為代表的促凋亡蛋白。細(xì)胞的生存與否，取決于其中促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的比例。研究顯示，MIRI過程中，促凋亡蛋白Bax、Bak等可被激活和上調(diào)，并促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡[10-11]。有研究顯示，敲除大鼠Bax基因可有效緩解MIRI、抑制心肌細(xì)胞凋亡、縮小心肌梗死面積，起到心肌保護(hù)作用[12]。Bcl-2蛋白的高表達(dá)可使轉(zhuǎn)基因大鼠心肌細(xì)胞凋亡量明顯下降[13]。此外，Caspase是細(xì)胞凋亡程序的又一個(gè)關(guān)鍵因素，根據(jù)其功能差異，Caspase家族蛋白分為啟動(dòng)型和執(zhí)行型。Caspase蛋白在一般狀態(tài)下均以前體形式存在于細(xì)胞中，在上游凋亡信號(hào)的刺激下才能啟動(dòng)，先激活啟動(dòng)型蛋白，繼而激活執(zhí)行型蛋白，在活化的執(zhí)行型Caspase蛋白的作用下，裂解特異性底物，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-3為執(zhí)行型蛋白，是整個(gè)凋亡過程的直接執(zhí)行者，直接反映凋亡程度[14-15]。本研究結(jié)果表明，益心泰可抑制MIRI大鼠細(xì)胞凋亡，減少Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)，增加Bcl-2蛋白表達(dá)。

炎癥反應(yīng)普遍存在于機(jī)體各組織器官的病理生理過程中，MIRI也不例外，在MIRI過程中最直接的表現(xiàn)是炎癥因子水平升高，其主要已知機(jī)制是白細(xì)胞對(duì)心肌缺血組織的病理浸潤，同時(shí)誘導(dǎo)心肌細(xì)胞釋放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子，同步加重心肌損害[16]。IL-1是炎癥反應(yīng)啟動(dòng)因子，同時(shí)激發(fā)機(jī)體防御反應(yīng)[17]。研究發(fā)現(xiàn)，MIRI后抑制IL-1β的表達(dá)可緩解炎癥反應(yīng)，減少心肌梗死面積。IL-6是反映MIRI炎癥程度的關(guān)鍵指標(biāo)，IL-6表達(dá)升高會(huì)加劇炎癥反應(yīng)[18]。TNF-α在炎癥反應(yīng)中的主要功能是促進(jìn)炎性介質(zhì)釋放，從不同途徑加劇炎癥反應(yīng)，TNF-α表達(dá)處于低水平時(shí)，能有效增加機(jī)體免疫力，而過多的表達(dá)則會(huì)改變細(xì)胞膜通透性，引發(fā)組織損傷[17]。有研究表明，受損心肌細(xì)胞中TNF-α含量明顯增加[19]。本研究顯示，益心泰可下調(diào)MIRI大鼠心肌細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，從而達(dá)到保護(hù)心肌的效果。

酪氨酸激酶Janus家族中有多個(gè)成員，其功能多樣，轉(zhuǎn)錄因子STAT是其明確的下游因子，JAK2/STAT3信號(hào)通路在心肌細(xì)胞中作用最明顯，是一條重要的通路，也是研究最為深入的通路之一[20]。JAK2/STAT3信號(hào)通路作用十分豐富，對(duì)氧化應(yīng)激及細(xì)胞自噬、增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)等發(fā)揮重要作用。JAK2與STAT3蛋白一般情況下都處于細(xì)胞質(zhì)中，其被應(yīng)激信號(hào)刺激后，會(huì)激活磷酸化，繼而轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，結(jié)合下游不同靶因子，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。因此，當(dāng)p-JAK2/JAK2及p-STAT3/STAT3比值增加時(shí)，認(rèn)為JAK2/STAT3信號(hào)通路被激活[21]，激活的JAK2/STAT3信號(hào)通路對(duì)心肌細(xì)胞有著明確的保護(hù)作用。有研究表明，激活的JAK2/STAT3信號(hào)通路可增加抗凋亡蛋白的表達(dá)，減少促凋亡蛋白的表達(dá)，縮小心肌梗死面積，改善心功能[22]。研究顯示，JAK2/STAT3信號(hào)通路是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的經(jīng)典途徑，通過對(duì)下游靶點(diǎn)的調(diào)控，可使諸多炎癥因子如核因子-κB、IL-1β及TNF-α等表達(dá)增加[23-25]。研究發(fā)現(xiàn)，小鼠MIRI模型及乳鼠心肌細(xì)胞H/R模型中發(fā)現(xiàn)，糖基化產(chǎn)物可通過STAT3途徑抑制模型動(dòng)物心肌自噬過度激活，從而保護(hù)心肌[26-27]。本研究結(jié)果表明，益心泰對(duì)MIRI大鼠JAK2/STAT3信號(hào)通路有明確的激活作用。因此，JAK2/STAT3信號(hào)通路可能是MIRI大鼠心肌細(xì)胞自噬、凋亡及相關(guān)炎癥反應(yīng)的共同上游靶點(diǎn)。在予AG490干預(yù)MIRI大鼠后，益心泰對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用被逆轉(zhuǎn)，進(jìn)一步證實(shí)益心泰是通過JAK2/STAT3信號(hào)通路調(diào)控MIRI大鼠心肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及過度自噬。

綜上所述，益心泰可通過激活JAK2/STAT3信號(hào)通路減輕MIRI大鼠炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡及過度自噬，從而保護(hù)心臟。

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Effects ofon JAK2/STAT3 Signaling Pathway Protein Expression in Rats with Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury

SUN Tao1, GUO Zhihua2, LI Ya2, LONG Yun1, ZENG Ying1, WANG Yue1

To observe the effects ofon JAK2/STAT3 signaling pathway protein expression in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury（MIRI）; To explore its myocardial protective mechanism.A rat model of MIRI was established by ligating the anterior descending coronary artery. Experimental rats were randomly divided into sham-operation group, model group andlow-, medium- and high-dosage groups. TTC staining was used to detect the area of myocardial infarction; TUNEL method was used to detect cell apoptosis; ELISA was used to detect the levels of IL-6, IL-1β and TNF-α. Western blot was used to detect Bax, Bcl-2, Caspase-3, LC3, Beclin 1, p62, JAK2, p-JAK2, STAT3 and p-STAT3 protein levels.Compared with the sham-operation group, the expressions of CK-MB and cTnⅠ in the model group increased significantly (<0.01); the area of myocardial infarction increased significantly (<0.01); the levels of TNF-α, IL-6 and IL-1β increased significantly (<0.01); expressions of LC3Ⅱ/LC3Ⅰ and Beclin 1 increased significantly (<0.01), and expression of p62 decreased significantly (<0.01); expressions of Bax/Bcl-2 and Caspase-3 protein increased, and apoptosis rate increased significantly (<0.01); p-JAK2/JAK2, p-STAT3/STAT significantly decreased (<0.01). Compared with the model group, expressions of CK-MB and cTnⅠ ingroups decreased significantly (<0.01); myocardial infarction area was significantly reduced (<0.01); levels of TNF-α, IL-6, IL-1β were significantly reduced (<0.01); expressionsof LC3Ⅱ/LC3Ⅰ and Beclin 1 protein decreased significantly (<0.01), and expression of p62 increased significantly (<0.01); expressions of Bax/Bcl-2 and Caspase-3 decreased, and the apoptosis rate decreased significantly (<0.01 ); p-JAK2/JAK2, p-STAT3/STAT increased significantly (<0.01). The JAK2-specific inhibitor AG490 could reverse the effects ofon the expressions of JAK2/STAT3 signaling pathway-related proteins, markers of myocardial injury, apoptosis, autophagy, and inflammation in rats with MIRI.can alleviate MIRI in rats by activating JAK2/STAT3 signaling pathway, inhibit cell apoptosis and excessive autophagy, thereby protecting the heart.

; ischemia-reperfusion injury; apoptosis; autophagy; inflammatory factor; JAK2/STAT3 signaling pathway; rats

R285.5

A

1005-5304(2021)02-0054-08

10.19879/j.cnki.1005-5304.202006405

國家自然科學(xué)基金（81673955）；湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（201833）；湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（19C1431）

郭志華，E-mail：guozhihua112@163.com

（收稿日期：2020-06-19）

（修回日期：2020-07-14；編輯：華強(qiáng)）