妊娠后期限飼對母羊肝臟功能及抗氧化的影響

王 鋆，石育銘，郭海杰

(1.葉縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南平頂山 467200；2.平頂山市畜牧技術(shù)推廣站，河南平頂山 467000；

3.葉縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南平頂山 467200)

妊娠血毒癥主要發(fā)生在妊娠后期母羊身上，它是一種代謝性疾病，其特點是低血糖和高酮血癥，在負(fù)能量平衡時期，由于缺乏維持能量平衡能力，進(jìn)而導(dǎo)致糖異生作用受損，最常見的臨床癥狀是虛弱、抑郁、精神遲鈍、行動障礙、厭食、失明，最后在發(fā)病3～10 d后出現(xiàn)橫臥和死亡（郭冬生等，2011）。妊娠期嚴(yán)重的血毒癥是導(dǎo)致肝功能障礙的主要原因，威脅胎兒和母體的存活力（Panther和Blum，2008）。對于綿羊來說，40%的感染母羊即使經(jīng)過強(qiáng)化處理也會死亡，20%的母羊在分娩前或分娩后立即死亡。肝臟調(diào)節(jié)血漿成分，清除代謝的最終產(chǎn)物，并提供恒定的葡萄糖以滿足外周組織的能量需求，同時肝臟作為重要的代謝器官，是機(jī)體能量平衡的重要協(xié)調(diào)中心（Frise和Williamson，2013）。此外，肝臟在組織損傷時，發(fā)揮酮體形成和代謝的重要功能，促進(jìn)纖維蛋白原和其他急性期反應(yīng)物的合成。更重要的是，妊娠期間發(fā)生肝臟疾病可能與妊娠狀態(tài)相關(guān)，在妊娠后期，肝酮體利用降低，促進(jìn)了血毒癥的發(fā)生（Harmeryer和Schlumbohm，2006）。目前肝臟對血毒癥的發(fā)病機(jī)制知之甚少。因此，本研究旨在探討妊娠后期限制采食量對母羊肝功能、抗氧化能力和急性期蛋白合成的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與處理 試驗選擇平均體重為（52.82±2.72）kg的妊娠后期母羊（2～3胎次）36只，隨機(jī)分為3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)2頭羊。各組分別飼喂對照組日糧（代謝能：0.68 MJ/kg代謝體重/d）、處理1組日糧（代謝能：0.17 MJ/kg代謝體重/d）、處理2組日糧（代謝能：0.34 MJ/kg代謝體重/d），試驗從妊娠90 d持續(xù)至140 d。妊娠后期母羊牧草、飼料成分及養(yǎng)分?jǐn)z入量見表1。

表1 妊娠后期綿羊采食量及牧草成分

試驗期間所有母羊均被單獨圈養(yǎng)，并飼喂切碎的干草。經(jīng)過一周馴化后，在整個限飼期間，動物的飼料量保持不變。每天早上8點和下午4點各飼喂1次，而對照組每天早上8點、11點和下午4點各飼喂1次。試驗期間，動物可自由取水和舔舐礦物塊。每天收集剩余飼料，并進(jìn)行化學(xué)分析。妊娠140 d時，每組分別選擇6只母羊，頸靜脈采血10 mL，分離血清，之后對母羊進(jìn)行屠宰，稱量肝重。

1.2 樣品分析 用常規(guī)養(yǎng)分分析方法測定肝臟水分、蛋白質(zhì)、脂肪和灰分含量，并用其含量與肝臟重量的百分比表示其占比。肝臟和血清生化指標(biāo)及肝臟抗氧化指標(biāo)采用南京建成生物研究所的商品試劑盒測定。肝臟結(jié)合珠蛋白和C-反應(yīng)蛋白含量用ELISA試劑盒測定。

1.3 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SAS軟件單因素方差分析程序進(jìn)行分析。采用Ducan’s法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 妊娠后期限飼對母羊體重、肝臟體重及成分的影響 由表2可知，與對照組相比，限飼組母羊體重、肝臟重量、肝臟水分和蛋白質(zhì)含量顯著降低（P＜0.05），而處理1組母羊肝臟脂肪含量較對照組和處理2組顯著提高288.03%和282.48%（P＜0.05）。與對照組相比，處理1組肝臟水分、灰分和蛋白質(zhì)占比顯著降低19.28%、44.32%和45.83%（P＜0.05），但處理1組肝臟脂肪占比較對照組顯著提高210.19%（P＜0.05）。

表2 妊娠后期限飼對母羊體重、肝臟重和肝臟化學(xué)成分的影響

2.2 妊娠后期限飼對母羊肝臟和血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，處理1組和處理2組血清非酯化脂肪酸含量較對照組分別提高199.94%和185.51%（P＜0.05）。與對照組相比，處理1組血清β-羥丁酸和肝臟甘油三酯含量顯著提高392.45%和329.55%（P＜0.05）。而處理1組和處理2組肝臟脂蛋白脂肪酶和脂肪酶活性較對照組顯著降低43.67%、30.77%和47.74%、31.31%（P＜0.05），處理1組乙酰膽堿酯酶活性較對照組顯著降低31.14%（P＜0.05）。

2.3 妊娠后期限飼對母羊肝臟抗氧化及急性期蛋白含量的影響 由表4可知，處理1組肝臟超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化力活性較對照組顯著提高103.32%、83.36%和75.85%（P＜0.05），同時處理1組丙二醛含量較對照組和處理2組顯著提高54.52%和67.31%（P＜0.05）。處理2組與對照組對肝臟總抗氧化力、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。處理組肝臟結(jié)合珠蛋白濃度高于對照組，但無顯著差異（P＞0.05），同時對照組與處理2組對肝臟C-反應(yīng)蛋白濃度的影響無顯著差異（P＞0.05）。處理1組肝臟C-反應(yīng)蛋白濃度較對照組顯著降低48.56%（P＜0.05）。

表3 妊娠后期限飼對母羊肝臟和血清生化指標(biāo)的影響

表4 妊娠后期限飼對母羊肝臟抗氧化及急性期蛋白的影響

3 討論

Ismail等（2008）報道，血毒癥母羊的特點是血漿β-羥丁酸濃度通常高于1.6 mmol/ L。本研究處理1組β-羥丁酸濃度（2.61 mmol/L）升高提示妊娠后期母羊發(fā)生了重度血毒癥，其可能是由于限飼導(dǎo)致營養(yǎng)不良所致，因為嚴(yán)重的營養(yǎng)不足導(dǎo)致組織重量降低，尤其是代謝功能強(qiáng)大的器官——肝臟，其在母體代謝中起至關(guān)重要的作用。在本研究中，妊娠后期母羊采食量的減少導(dǎo)致肝臟重量和蛋白質(zhì)含量降低，體內(nèi)脂肪動員產(chǎn)生大量非酯化脂肪酸進(jìn)入肝臟，由于兩組限飼組脂蛋白脂肪酶和肝臟脂肪酶活性降低，導(dǎo)致非酯化脂肪酸重新酯化成甘油三酯等脂肪形式。更重要的是，妊娠后期母羊采食量減少不僅會導(dǎo)致脂肪積累，還會增加母羊肝纖維化，肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同病理過程，是破壞正常肝結(jié)構(gòu)和肝功能障礙的重要原因（Jiao等，2009）。

乙酰膽堿酯酶作為肝臟整體功能儲備的標(biāo)志，隨著肝細(xì)胞功能障礙的出現(xiàn)，膽堿酯酶的合成明顯下降，使得其成為比傳統(tǒng)肝功能測試更特異的肝功能障礙指標(biāo)（Montagnese等，2007）。妊娠期大多數(shù)肝功能障礙與妊娠狀態(tài)相關(guān)，本研究隨著母羊采食量的減少，處理1組肝臟乙酰膽堿酯酶活性降低，是肝功能適應(yīng)妊娠的較差信號。氧化應(yīng)激是機(jī)體細(xì)胞抗氧化防御和促氧化狀態(tài)失衡的結(jié)果。丙二醛是活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激指標(biāo)。本研究數(shù)據(jù)顯示，處理1組丙二醛含量增加，但超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化力活性增加，其中肝臟中丙二醛濃度升高提示氧化應(yīng)激發(fā)生，而處理1組β-羥丁酸等脂肪積累濃度升高、脂質(zhì)代謝變差可能是觸發(fā)氧化應(yīng)激的重要誘因，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。

急性期反應(yīng)是機(jī)體在各種應(yīng)激源作用下，對機(jī)體自身穩(wěn)態(tài)的局部或全身性干擾的一種顯著全身反應(yīng)。在急性期，急性期蛋白多在肝細(xì)胞內(nèi)合成，在介導(dǎo)炎癥過程中清除細(xì)胞碎片、修復(fù)組織發(fā)揮重要作用，急性期反應(yīng)的特點為肝脂生成增加、脂肪組織分解（Gruys等，2005）。但在本研究中，雖然肝臟結(jié)合珠蛋白濃度隨母羊采食量減少有升高趨勢，但處理1組肝臟C-反應(yīng)蛋白濃度降低。結(jié)合珠蛋白具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)的特性，是一種抗氧化蛋白，具有防止組織氧化損傷的功能（Gabay和Kusher，1999）。但饑餓狀態(tài)時，肝蛋白合成普遍受到抑制。Pepys和Hirschfield（2003）研究發(fā)現(xiàn)，C-反應(yīng)蛋白濃度與體重指數(shù)之間存在很強(qiáng)的正相關(guān)關(guān)系，體重減輕會降低C-反應(yīng)蛋白濃度，這與本研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

綜上所述，妊娠后期限制母羊采食量會導(dǎo)致肝臟重量和蛋白質(zhì)含量下降，同時引起肝臟脂肪積累，導(dǎo)致肝臟抗氧化功能失衡。