腸道菌群及血清炎癥因子在酒精性肝病發(fā)展中的作用

曹 軼，高廣甫，夏興洲，李沖慧

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，鄭州 450000)

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期階段通常表現(xiàn)為脂肪肝,如不及時干預(yù)可發(fā)展為ALD和酒精性肝硬化，甚至引發(fā)肝癌，有較高的發(fā)病率、病死率，嚴(yán)重威脅人類的健康，是世界性嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題[1-3]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查[4]顯示，近年來我國與歐美發(fā)達(dá)國家ALD發(fā)病率呈逐年上升趨勢。在我國中西部以及南方地區(qū)，成人患病率高達(dá)4.3%～6.5%，乙醇已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損害的第二大病因。有研究[5]顯示，乙醇不僅通過其代謝產(chǎn)物乙醛對肝臟造成直接損害，還可誘發(fā)腸道菌群紊亂失衡和機(jī)體免疫功能低下，導(dǎo)致腸道細(xì)菌移位，進(jìn)入機(jī)體循環(huán)，激發(fā)全身炎癥反應(yīng)，誘發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥。本研究旨在觀察ALD患者腸道菌群與血清炎癥因子的表達(dá)，為ALD的早期診斷與治療,延緩或逆轉(zhuǎn)肝纖維化及肝硬化的發(fā)生提供新思路。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2018年9月—2019年8月在鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院接受治療的ALD門診或住院的男性患者60例為ALD組，同期選取在本院體檢的30例男性健康體檢者作為對照組。2組均排除嗜肝病毒感染以及藥物性、中毒性和自身免疫性肝損傷，在1個月內(nèi)均未服用抗生素、酸奶等。ALD納入標(biāo)準(zhǔn)符合(2018年更新版)非酒精性脂肪性肝病防治指南診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)且患者知情同意。2組受試者年齡、體質(zhì)量指數(shù)、空腹血糖、總膽固醇、甘油三酯比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

1.2 方法

1.2.1 腸道菌群培養(yǎng)及檢測方法 采用微生物學(xué)方法定量分析糞便中的雙歧桿菌、糞腸球菌、大腸埃希桿菌、腸球菌含量，結(jié)果以每克糞便濕重中菌落形成單位的對數(shù)值表示(lgCFU·g-1)。

1.2.2 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)指標(biāo)檢測 采用美國Beckman AU5800全自動生化分析儀檢測，試劑盒由美康生物科技股份有限公司提供，批號：180904201、190604302、190803201；參考值：ALT(0～50 U·L-1)；AST(0～40 U·L-1)；TBIL(0～20 μmol·L-1)。取受試者空腹靜脈血5 mL，低溫4 ℃ 3 000 r·min-1離心15 min，取上層血清進(jìn)行檢測。

表1 2組受試者一般資料比較

1.2.3 血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)檢測 采用美國Beckman XL流式細(xì)胞儀檢測。試劑盒由江西賽基生物技術(shù)有限公司提供，批號：20190901；參考值：TNF-α(0.00～7.41 pg·mL-1)；IL-6(0.00～2.32 pg·mL-1)，其操作由專人嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；標(biāo)本制備，于上述血生化同批采靜脈血4 mL，以3 000 r·min-1離心15 min后,將分離血清置于密封凍存管中，-70 ℃保存待測。

2 結(jié)果

2.1 2組受試者肝功能指標(biāo)比較 ALD組ALT、AST、TBIL水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.2 2組受試者血清炎癥因子水平比較 ALD組TNF-α、IL-6水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 2組受試者肝功能指標(biāo)比較

表3 2組受試者血清炎癥因子水平比較

2.3 2組腸道菌群含量比較 ALD組腸球菌、糞腸球菌、大腸埃希桿菌含量高于對照組，雙歧桿菌含量低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 2組受試者腸道菌群含量比較

3 討論

酒精具有嗜肝性，近90%由肝臟氧化代謝，ALD是一種慢性進(jìn)行性疾病，其主要病因是乙醇過度攝入，目前治療除戒酒、補(bǔ)充營養(yǎng)、藥物治療、肝移植等方法外，仍缺乏有效的藥物治療手段。ALD的發(fā)病機(jī)制可能主要與酒精代謝相關(guān)的氧化應(yīng)激損傷、蛋氨酸代謝異常、腸道菌群失調(diào)與細(xì)菌移位、炎癥介質(zhì)相關(guān)損傷、營養(yǎng)失調(diào)、疊加病毒感染等有關(guān)。其中菌群失調(diào)是ALD發(fā)生發(fā)展的重要因素[6]。在正常人體中，腸道菌群處于動態(tài)平衡，維持著腸道的正常生理功能。有研究[7]證實(shí),長期攝入酒精后，酒精及其代謝產(chǎn)物通過引起腸道菌群數(shù)量改變，腸道通透性增加，細(xì)菌位移等方式，造成腸道菌群紊亂，激活機(jī)體免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)肝臟產(chǎn)生促炎癥因子，進(jìn)而促進(jìn)ALD的發(fā)生與發(fā)展。腸道菌群失調(diào)與炎癥因子的過度表達(dá)在ALD發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[8]。本研究結(jié)果顯示，ALD組ALT、AST水平及TBIL含量均高于對照組，同相關(guān)研究[9]結(jié)果相似。本研究發(fā)現(xiàn)，ALD組除雙歧桿菌含量低于對照組外，腸球菌、糞腸球菌、大腸埃希桿菌均高于對照組，進(jìn)一步驗(yàn)證了酒精可以誘導(dǎo)腸道菌群失調(diào)，失調(diào)情況與肝損傷的嚴(yán)重程度成正比，肝損傷越嚴(yán)重，腸道菌群失調(diào)情況越嚴(yán)重，從而使肝病惡化，與相關(guān)研究[10-11]結(jié)果相符。本研究結(jié)果顯示，ALD組TNF-α、IL-6水平高于對照組，其原因可能是ALD患者因長期飲酒，免疫力下降，慢性腹瀉導(dǎo)致營養(yǎng)不良，滲透性增加，腸道菌群失調(diào)，腸黏膜屏障功能下降，出現(xiàn)腸源性的內(nèi)毒素血癥，而內(nèi)毒素對肝臟的庫普弗細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞)產(chǎn)生刺激，促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子過量表達(dá)，進(jìn)一步加劇對肝臟的損傷作用，從而導(dǎo)致ALD的惡化[12]。

總之，通過本研究進(jìn)一步驗(yàn)證了酒精可以誘導(dǎo)腸道菌群失調(diào)，ALD能導(dǎo)致機(jī)體血清炎癥因子過量表達(dá)，二者協(xié)同在ALD病情的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。由于條件限制，本次樣本有限，還有很多研究尚未完成，準(zhǔn)備下一步將進(jìn)行動物造模擴(kuò)大樣本量，對ALD患者腸道菌群中的雙歧桿菌進(jìn)行高通量測序定量分析，為ALD的早期發(fā)現(xiàn)與治療提供可靠理論依據(jù)。