高效液相色譜法測(cè)定食品中蘇丹紅的方法優(yōu)化

◎ 陳偉潔，陸溶艷，聶 丹，莫志斌

（梧州海關(guān)，廣西 梧州 543002）

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)用水為超純水。辣椒粉、辣椒醬、辣椒油和臘腸樣品，均購自當(dāng)?shù)爻小?/p>

100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)溶液，20 μg·mL-1蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液，均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷，均為色譜純，購自Fisher Chemical 公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20A 型高效液相色譜儀（島津公司），配SPD-M20A 型光電二極管陣列檢測(cè)器和LCsolution 工作站；SB25-120 型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；TDL-40B 型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；I-8-UV 型超純水機(jī)（賽多利斯）；EFAA-AC-02型氮吹儀（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；渦旋儀；ME204 型電子天平（梅特勒-托利多）；蘇丹紅專用固相萃取柱（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確移取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)品各1 mL，準(zhǔn)確移取蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mL，用乙腈定容至10 mL，配成濃度10 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 高效液相色譜工作條件

采 用SHIMADZA VP-ODS 色 譜 柱（4.6 mm×250 mm，4.6 μm），柱溫為35 ℃；進(jìn)樣量為20 μL；流動(dòng)相為乙腈∶水（95%∶5%）；流速為1 mL·min-1；波長(zhǎng)為500 nm。

1.5 樣品前處理

1.5.1 辣椒粉

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入20 mL 正己烷，超聲5 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發(fā)瓶中，重復(fù)加入10 mL 正己烷超聲離心至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL 以下，待過柱凈化。

1.5.2 辣椒油稱取0.5 g 油樣，加入3 mL 正己烷渦旋混合震蕩溶解10 s，待過柱凈化。

1.5.3 辣椒醬

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入10 mL 正己烷，渦旋2 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發(fā)瓶中，用重復(fù)加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL 以下，待過柱凈化。

1.5.4 臘腸

稱取1 g 粉碎樣品于50 mL 離心管中，加入10 mL正己烷渦旋混合振蕩5 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發(fā)瓶中，重復(fù)加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL以下，待過柱凈化。

1.5.5 SPE 操作過程

依次用5 mL 二氯甲烷，5 mL 正己烷活化柱子；將待凈化樣液轉(zhuǎn)移到柱子中，再用2 mL 正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，潤(rùn)洗液一并轉(zhuǎn)移至柱子中；用5 mL 正己烷淋洗柱子，用5 mL 二氯甲烷洗脫并收集，將收集液在40 ℃下氮吹近干，用1 mL 乙腈定容，超聲1 min，再渦旋混合10 s，過0.45 μm 有機(jī)濾膜，待上機(jī)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液于180 ～800 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明蘇丹紅Ⅰ在波長(zhǎng)478 nm 處有最大吸收峰，蘇丹紅Ⅱ在波長(zhǎng)485 nm 處有最大吸收峰，蘇紅Ⅲ在波長(zhǎng)506 nm 處有最大吸收峰，蘇丹紅Ⅳ在波長(zhǎng)510 nm 處有最大吸收峰，進(jìn)行綜合考慮，選擇500 nm 作為試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)[4]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈依次稀釋成0.1 μg·mL-1，0.2 μg·mL-1，0.4 μg·mL-1，0.8 μg·mL-1，1.6 μg·mL-1和2.4 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，在儀器工作條件下測(cè)定，以蘇丹紅質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，其對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為0.1 ～2.4 μg·mL-1，線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表1。以3 倍信噪比計(jì)算方法的檢出限（3S/N），結(jié)果見表1。

表1 蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限表

2.3 精密度試驗(yàn)

按照儀器工作條件，對(duì)0.8 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行6 次重復(fù)測(cè)定，以測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）計(jì)算方法精密度，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為1.7%、2.3%、2.6%、1.9%，具體結(jié)果見表2。

2.4 回收試驗(yàn)

取有代表性的4 種陰性食品類樣品，按照《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》（GB 27404—2008）標(biāo) 準(zhǔn) 規(guī) 定，分 別 添 加0.4 μg·mL-1、0.8 μg·mL-1、1.6 μg·mL-1濃度水平的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度水平進(jìn)樣3 次，取平均值計(jì)算回收率，用于驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，試驗(yàn)結(jié)果見表3。

由表3 可知，4 種食品的回收率為87.5%～98.1%。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

以辣椒粉為基底，添加0.4 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算測(cè)定值的RSD，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為2.4%、1.5%、2.0%和2.2%，說明該方法具有良好的重現(xiàn)性，見表4。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果表

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

表4 以辣椒粉為基底的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果表

3 結(jié)論

本試驗(yàn)對(duì)高效液相色譜法檢測(cè)蘇丹紅的方法進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化后的方法采用乙腈和水按95%∶5%的比例洗脫，大大縮短了出峰時(shí)間，且峰型良好；用SPE 小柱代替國標(biāo)中自制的中性氧化鋁小柱，縮短了前處理時(shí)間，凈化效果顯著且回收率有所提高；優(yōu)化后的方法具有靈敏度高、精密度好，重現(xiàn)性高和易于操作的優(yōu)點(diǎn)[5]，適用于食品中蘇丹紅含量的日常檢測(cè)。