◎ 陳偉潔,陸溶艷,聶 丹,莫志斌
(梧州海關(guān),廣西 梧州 543002)
試驗(yàn)用水為超純水。辣椒粉、辣椒醬、辣椒油和臘腸樣品,均購自當(dāng)?shù)爻小?/p>
100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)溶液,20 μg·mL-1蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液,均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷,均為色譜純,購自Fisher Chemical 公司。
LC-20A 型高效液相色譜儀(島津公司),配SPD-M20A 型光電二極管陣列檢測器和LCsolution 工作站;SB25-120 型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司);TDL-40B 型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);I-8-UV 型超純水機(jī)(賽多利斯);EFAA-AC-02型氮吹儀(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司);渦旋儀;ME204 型電子天平(梅特勒-托利多);蘇丹紅專用固相萃取柱(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。
準(zhǔn)確移取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)品各1 mL,準(zhǔn)確移取蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mL,用乙腈定容至10 mL,配成濃度10 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液。
采 用SHIMADZA VP-ODS 色 譜 柱(4.6 mm×250 mm,4.6 μm),柱溫為35 ℃;進(jìn)樣量為20 μL;流動(dòng)相為乙腈∶水(95%∶5%);流速為1 mL·min-1;波長為500 nm。
1.5.1 辣椒粉
稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中,加入20 mL 正己烷,超聲5 min,4 000 r·min-1離心5 min,取上清液至平底蒸發(fā)瓶中,重復(fù)加入10 mL 正己烷超聲離心至洗出液為無色,合并上清液,氮吹濃縮至5 mL 以下,待過柱凈化。
1.5.2 辣椒油稱取0.5 g 油樣,加入3 mL 正己烷渦旋混合震蕩溶解10 s,待過柱凈化。
1.5.3 辣椒醬
稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中,加入10 mL 正己烷,渦旋2 min,4 000 r·min-1離心5 min,取上清液至平底蒸發(fā)瓶中,用重復(fù)加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色,合并上清液,氮吹濃縮至5 mL 以下,待過柱凈化。
1.5.4 臘腸
稱取1 g 粉碎樣品于50 mL 離心管中,加入10 mL正己烷渦旋混合振蕩5 min,4 000 r·min-1離心5 min,取上清液至平底蒸發(fā)瓶中,重復(fù)加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色,合并上清液,氮吹濃縮至5 mL以下,待過柱凈化。
1.5.5 SPE 操作過程
依次用5 mL 二氯甲烷,5 mL 正己烷活化柱子;將待凈化樣液轉(zhuǎn)移到柱子中,再用2 mL 正己烷潤洗樣品瓶,潤洗液一并轉(zhuǎn)移至柱子中;用5 mL 正己烷淋洗柱子,用5 mL 二氯甲烷洗脫并收集,將收集液在40 ℃下氮吹近干,用1 mL 乙腈定容,超聲1 min,再渦旋混合10 s,過0.45 μm 有機(jī)濾膜,待上機(jī)分析。
分別取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液于180 ~800 nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果表明蘇丹紅Ⅰ在波長478 nm 處有最大吸收峰,蘇丹紅Ⅱ在波長485 nm 處有最大吸收峰,蘇紅Ⅲ在波長506 nm 處有最大吸收峰,蘇丹紅Ⅳ在波長510 nm 處有最大吸收峰,進(jìn)行綜合考慮,選擇500 nm 作為試驗(yàn)的檢測波長[4]。
將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈依次稀釋成0.1 μg·mL-1,0.2 μg·mL-1,0.4 μg·mL-1,0.8 μg·mL-1,1.6 μg·mL-1和2.4 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列,在儀器工作條件下測定,以蘇丹紅質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),其對應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性范圍為0.1 ~2.4 μg·mL-1,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表1。以3 倍信噪比計(jì)算方法的檢出限(3S/N),結(jié)果見表1。
表1 蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限表
按照儀器工作條件,對0.8 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行6 次重復(fù)測定,以測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)計(jì)算方法精密度,蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為1.7%、2.3%、2.6%、1.9%,具體結(jié)果見表2。
取有代表性的4 種陰性食品類樣品,按照《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》(GB 27404—2008)標(biāo) 準(zhǔn) 規(guī) 定,分 別 添 加0.4 μg·mL-1、0.8 μg·mL-1、1.6 μg·mL-1濃度水平的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)溶液,每個(gè)濃度水平進(jìn)樣3 次,取平均值計(jì)算回收率,用于驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性,試驗(yàn)結(jié)果見表3。
由表3 可知,4 種食品的回收率為87.5%~98.1%。
以辣椒粉為基底,添加0.4 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照試驗(yàn)方法進(jìn)行測定,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次,計(jì)算測定值的RSD,蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為2.4%、1.5%、2.0%和2.2%,說明該方法具有良好的重現(xiàn)性,見表4。
表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果表
表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果表
表4 以辣椒粉為基底的重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果表
本試驗(yàn)對高效液相色譜法檢測蘇丹紅的方法進(jìn)行了優(yōu)化,優(yōu)化后的方法采用乙腈和水按95%∶5%的比例洗脫,大大縮短了出峰時(shí)間,且峰型良好;用SPE 小柱代替國標(biāo)中自制的中性氧化鋁小柱,縮短了前處理時(shí)間,凈化效果顯著且回收率有所提高;優(yōu)化后的方法具有靈敏度高、精密度好,重現(xiàn)性高和易于操作的優(yōu)點(diǎn)[5],適用于食品中蘇丹紅含量的日常檢測。