不同國標(biāo)法對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測定

◎ 趙 平，郭瑩瑩，王玉芝，王哲明，楊 光

（黑龍江省質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院，黑龍江 哈爾濱 150028）

嬰幼兒食品是各國非常重視的一類食品。嬰幼兒對食品營養(yǎng)要求較高，所以為了滿足需求，需對食品進行營養(yǎng)強化。但嬰幼兒機體生命活動較為敏感，過高或過低的營養(yǎng)強化物質(zhì)會影響其身體健康，添加量必須在嬰幼兒能夠適應(yīng)的范圍內(nèi)，故應(yīng)重視對營養(yǎng)強化劑的檢測監(jiān)控。泛酸是在20世紀(jì)90年代首次從酵母中分離得到，在生物界中廣泛存在，又叫做遍多酸，是水溶性維生素B5。泛酸具有酸性，易溶于乙醇和水，不溶于脂溶劑，在酸性環(huán)境中易分解，在中性環(huán)境中較為穩(wěn)定，是嬰幼兒乳粉中添加的重要營養(yǎng)強化劑[1-4]?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn)嬰兒配方食品》（GB 10765—2010）[5]與《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)較大嬰兒和幼兒配方食品》（GB 10767—2010）[6]中對泛酸的添加量都有嚴(yán)格的規(guī)定。針對泛酸含量的測定，主要是測定游離泛酸和總泛酸兩種，泛酸的檢測方法主要有微生物法、高效液相色譜法、熱射流液相色譜-質(zhì)譜法、氨氣敏電極法及高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法等[2]。嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測定方法主要是采用國標(biāo)法微生物法和高效液相色譜法，目前主要采用微生物法測定嬰幼兒配方乳粉中的泛酸含量。

由于2018年，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)勘誤，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）[7]在勘誤中替代了《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）[8]，而新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)中樣品的提取方法有很大差別，對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的檢測帶來一定的影響。本文主要通過精密度實驗與加標(biāo)回收實驗來考察并比較新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)中不同提取方法對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量測定的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉，購自超市。

KWIKSTIK植物乳桿菌（美國Microbiologics公司）、泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，北京曼哈格生物科技有限公司）、乳酸桿菌瓊脂（美國BD公司）、乳酸桿菌肉湯（美國BD公司）泛酸測定培養(yǎng)基（北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司）。

1.2 儀器設(shè)備

KQ5200DE型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）、MLS-3780型高壓蒸汽滅菌器（日本三洋公司）、PB-10型pH計（德國賽多利斯公司）、2266型潔凈工作臺（上海拜艾斯凈化設(shè)備有限公司）、DH6000Ⅱ型電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特儀器有限公司）、T6新世紀(jì)紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.3 方法

按《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法與《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法進行實驗，并分別測定兩種方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD與回收率。

1.3.1 菌液的制備

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014轉(zhuǎn)入乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中，36 ℃培養(yǎng)24 h；再轉(zhuǎn)接至乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基中，36 ℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)好的乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)物作為貯備菌種。貯備菌種接種乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)24 h。在無菌條件下離心該培養(yǎng)液，棄去上清液。用生理鹽水振蕩洗滌菌體，離心，棄去上清液，再用生理鹽水振蕩清洗，重復(fù)操作。再加生理鹽水，混勻，制成測試菌液。

1.3.2 泛酸的提取

按《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法中試樣的處理方法采用121 ℃水解15 min與《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法試樣提取中的直接提取法超聲提取法，分別對5種不同品牌嬰幼兒配方乳粉進行泛酸提取，并稀釋至相應(yīng)濃度。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及試樣管的制作

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)中方法進行，加入蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)溶液（試樣）和培養(yǎng)基于試管中，一式3份。

1.3.4 滅菌

將所有測定管塞好試管塞，滅菌。GB 5413.17—2010第一法為121 ℃，滅菌5min，GB 5009.210—2016第一法為121 ℃，滅菌15 min。

1.3.5 接種及培養(yǎng)

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)進行實驗，測定系列管冷卻至室溫后，在無菌操作條件下向每支測定管滴加測試菌液50 μL。塞好試管塞，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20 h。

1.3.6 測定

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)進行測定，在波長550 nm條件下讀取吸光度值。

1.3.7 結(jié)果計算分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。按公式計算結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度實驗

實驗以不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉作為實驗樣品，每個樣品做7個平行試驗。分別用新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)的方法進行實驗。結(jié)果見表1與表2。

表1 GB 5413.17—2010第一法精密度分析結(jié)果表

表2 GB 5009.210—2016第一法精密度分析結(jié)果表

從表1結(jié)果中可以得出，利用GB 5413.17—2010第一法檢測的5種不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個樣品的7個平行數(shù)值較接近，RSD值為1.06%～2.75%，說明方法精密度較高；利用GB 5009.210—2016第一法檢測的5中不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個樣品的7個平行數(shù)值較接近，RSD值為1.37%～2.84%，說明方法精密度同樣較高。

2.2 加標(biāo)回收實驗

實驗以某一品牌嬰幼兒配方乳粉作為實驗樣品，加標(biāo)按GB 5413.17—2010第一法與GB 5009.210—2016第一法方法進行實驗，本底樣品與加標(biāo)樣品分別做7個平行實驗，結(jié)果見表3與表4。

表3 GB 5413.17—2010第一法加標(biāo)回收結(jié)果表

表4 GB 5009.210—2016第一法加標(biāo)回收結(jié)果表

從表3與表4結(jié)果得出兩種方法的平均回收率分別為98.3%與97.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.54%與2.51%，回收率穩(wěn)定符合回收率的要求，方法精密度高。

3 結(jié)論

從結(jié)果對比中可以看出，兩種方法得出的結(jié)果不一致，利用GB 5009.210—2016第一法檢測的泛酸含量要高于GB 5413.17—2010第一法檢測的泛酸含量，回收率都很穩(wěn)定，符合要求，且精密度都較高。比較兩版標(biāo)準(zhǔn)的差異，只是樣品的前處理上有較大差異，在GB 5413.17—2010標(biāo)準(zhǔn)中泛酸的提取是通過121 ℃水解、調(diào)節(jié)pH值為4.5、過濾來實現(xiàn)的，在加熱水解和調(diào)節(jié)pH酸性時可能造成游離泛酸的分解而導(dǎo)致最終總泛酸結(jié)果有差異；而GB 5009.210—2016標(biāo)準(zhǔn)中泛酸的提取是通過超聲提取來實現(xiàn)的，省去了調(diào)節(jié)pH值、過濾等步驟，樣液較渾濁，會影響結(jié)果，可能會造成結(jié)果偏高，故建議采用過濾的方法除去背景渾濁，再進行實驗。

本實驗通過對新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)檢測嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量結(jié)果精密度與加標(biāo)回收率進行比較，兩版標(biāo)準(zhǔn)只是提取方法有所不同，但兩種方法的精密度都很高、加標(biāo)回收率也很穩(wěn)定能夠達(dá)到要求。本文通過兩種國標(biāo)方法的數(shù)據(jù)對比，希望能夠為嬰幼兒配方乳粉生產(chǎn)企業(yè)與檢驗檢測機構(gòu)在嬰幼兒配方乳粉的泛酸含量測定方面提供一些數(shù)據(jù)支持。