22份小麥粉中4種真菌毒素的快速檢測(cè)

◎ 牛偉偉，楊 瑩，郭 舟，徐 程，邱韻心

（襄陽市公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖北 襄陽 441000）

玉米赤酶烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和黃曲霉毒素B1是在小麥、玉米和大麥中常見的4種真菌毒[1]。當(dāng)小麥在田間受到真菌毒素污染時(shí)，小麥粉也會(huì)存在一定量的真菌毒素，而小麥粉是我國(guó)主要的糧食加工品，其安全問題與人們的日常飲食息息相關(guān)[2]，而目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中檢測(cè)真菌毒素對(duì)儀器條件要求較高，且操作復(fù)雜[3]。本試驗(yàn)采用快速試劑條和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比，旨在研究快速試劑卡大批量篩查小麥粉中4種真菌毒素的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市面上隨機(jī)抽取22份不同廠家的小麥粉；4種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液、快速檢測(cè)試劑條、免疫親和柱（檢測(cè)試劑盒）。

1.2 儀器與設(shè)備

島津LC-20AT高效液相色譜（帶紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器）、酶標(biāo)儀、離心機(jī)、渦旋儀、氮吹儀、空氣壓力泵、電子天平、微量移液槍、玻璃纖維濾紙。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋，配制成10.26 ng·mL-1，51.30 ng·mL-1、102.6 ng·mL-1、205.2 ng·mL-1和513.0 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

磷酸鹽緩沖溶液：精確稱取8.00 g氯化鈉、1.20 g磷酸氫二鈉、0.20 g硫酸二氫鉀，用900 mL純水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0，用水定容至1 000 mL。

取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋，配制成50 ng·mL-1，100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和400 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)曲線

清洗緩沖溶液：精確稱取25.0 g氯化鈉5.0 g磷酸氫二鈉，加入0.1 mL吐溫20，用水稀釋至1 L。

取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋，配制成2.85 ng·mL-1、7.125 ng·mL-1、14.25 ng·mL-1、28.5 ng·mL-1和57.0 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.4 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線

取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋成配制成2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和50 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 前處理及儀器條件

1.4.1 玉米赤霉烯酮

（1）快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉于10 mL離心管中，加入4 mL 70%甲醇-水溶液，渦旋混勻后，離心5 min，取20 μL上清液加入0.3 mL樣品稀釋液，渦動(dòng)備用，吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中，待紫色顆粒完全溶解，室溫放置3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出，根據(jù)說明書判定結(jié)果。

（2）高效液相色譜法。熒光檢測(cè)器；色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：乙腈-水-甲醇（46∶46∶8）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)274 nm，發(fā)射波長(zhǎng)440 nm，進(jìn)樣量：50 μL；柱溫：35 ℃。

1.4.2 嘔吐毒素

（1）快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入6 mL 70%甲醇-水溶液，渦旋混勻后離心，取50 μL上清液加入0.35 mL（或0.75 mL）樣品稀釋液混勻備用，吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中，紫色顆粒完全溶解后放置3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中，5 min后判讀結(jié)果。

（2）高效液相色譜法。紫外檢測(cè)器；色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：甲醇-水（20∶80）；流速：0.8 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：218 nm；進(jìn)樣量：50 μL；柱溫：35 ℃。

1.4.3 赭曲霉毒素A

（1）快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入4 mL 50%甲醇-水溶液，渦旋混勻離心取100 μL上清液加入300 μL樣品稀釋液混勻備用，吸取 200μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中，待紫色顆粒完全溶解后放置3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出，1 min內(nèi)判讀結(jié)果。

（2）高效液相色譜法。熒光檢測(cè)器；色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：乙腈-水-冰乙酸（96∶102∶2）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)333 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm，進(jìn)樣量：50 μL；柱溫：35 ℃。

1.4.4 黃曲霉毒素B1

（1）快速檢測(cè)試劑條法。稱取1 g小麥粉加入3 mL 70%甲醇-水溶液，振蕩后離心，取100 μL上清液加入300 μL樣品稀釋液混勻備用，吸取200 μL待測(cè)液于金標(biāo)微孔中，待紫色顆粒完全溶解后放置3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5 min后取出，1 min內(nèi)判讀結(jié)果。

（2）酶聯(lián)免疫吸附法。稱取20 g小麥粉與三角瓶中，加100 mL 70%甲醇-水，振蕩提取，靜置后過濾，用緩沖液稀釋，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。用酶標(biāo)儀在450 nm濾鏡及示差濾鏡630 nm下讀取結(jié)果。

1.5 結(jié)果判定

若檢測(cè)值低于方法的檢出限，則該項(xiàng)目結(jié)果視為未檢出，各方法的檢出限具體見表1。

表1 4種真菌毒素的檢出限表

2 結(jié)果與分析

兩種檢測(cè)方法結(jié)果具體見表2，22批小麥粉中玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素A和黃曲霉毒素B1的檢測(cè)結(jié)果一致，均為未檢出，其中4批小麥粉用兩種方法均檢出了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，數(shù)據(jù)結(jié)果基本一致。

表2 4種真菌毒素?cái)?shù)據(jù)結(jié)果表（單位：μg·kg-1）

續(xù)表2

3 討論

用快速檢測(cè)卡和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)小麥粉中4種真菌毒素，通過對(duì)比結(jié)果發(fā)現(xiàn)快速檢測(cè)卡和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果基本一致，而且此操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，可適用于大批量快速篩查。