組蛋白去乙?；敢种苿┰谠煅杉?xì)胞體外擴(kuò)增中的作用

陳 苗，莊俊玲

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院血液科，北京 100730

造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells，HSCs)具有維持自我更新和多向分化為不同譜系血細(xì)胞的特性，不同發(fā)育階段及不同譜系分化受到嚴(yán)格調(diào)控，其中表觀遺傳調(diào)控在造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞的分裂、擴(kuò)增和譜系限制中發(fā)揮重要作用[1- 2]。表觀遺傳通過(guò)高度協(xié)調(diào)的基因激活和沉默，促使HSCs分化為多系成熟血細(xì)胞。

HSCs是處于G0/G1的靜止細(xì)胞，在體外培養(yǎng)環(huán)境下，經(jīng)歷有限次數(shù)細(xì)胞分裂，不可控制地進(jìn)入分化過(guò)程，喪失自我更新能力。研究者采用了多種技術(shù)方法，嘗試促進(jìn)HSCs自我更新復(fù)制，抑制定向分化，以期獲得大量干細(xì)胞應(yīng)用于干細(xì)胞治療，并更深入地理解造血干細(xì)胞更新和分化的機(jī)制[3- 5]?；诮M蛋白乙?；揎棇?duì)于基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要作用，研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylase inhibitors，HDACIs)影響干細(xì)胞中的表觀遺傳密碼[6- 7]，在體外培養(yǎng)中能促進(jìn)HSCs擴(kuò)增，抑制分化。本文探討了HDACIs在造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增中的作用及可能的機(jī)制。

組蛋白乙?；揎椀霓D(zhuǎn)錄調(diào)控作用

HSCs定向分化過(guò)程中的轉(zhuǎn)變主要取決于基因表達(dá)模式的改變，維持自我更新的基因沉默，促進(jìn)細(xì)胞分化的基因激活。表觀遺傳修飾是調(diào)控基因表達(dá)的重要機(jī)制之一，主要包括DNA/RNA甲基化、組蛋白修飾、組蛋白變體、染色質(zhì)重塑、非編碼RNA等[8- 10]。在干細(xì)胞分化過(guò)程中，表觀遺傳標(biāo)記由染色質(zhì)修飾酶動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，并應(yīng)答于胞外分化誘導(dǎo)信號(hào)[11]。維持干細(xì)胞數(shù)量和干性需要穩(wěn)定抑制與干細(xì)胞分化有關(guān)的基因，增加多能基因的表達(dá)[12- 13]。

組蛋白翻譯后修飾可以調(diào)控基因表達(dá)，包括乙?；⒓谆?、磷酸化、泛素化等多種共價(jià)修飾[7- 9]，其中特征最明顯的就是賴氨酸乙?；＝M蛋白乙?；腿ヒ阴；绊懭旧|(zhì)的轉(zhuǎn)錄活性。組蛋白乙?；{(diào)節(jié)組蛋白的整體電荷，影響其與帶負(fù)電荷DNA的相互作用，開放染色質(zhì)，通過(guò)染色質(zhì)構(gòu)象改變控制基因表達(dá)，一般和轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)[14]。因此，組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的賴氨酸乙?；龠M(jìn)基因轉(zhuǎn)錄，組蛋白去乙?；复呋嚢彼崛ヒ阴；瘜?dǎo)致染色質(zhì)失活。HDACIs則維持組蛋白乙酰化，使染色質(zhì)變構(gòu)促進(jìn)基因表達(dá)。

組蛋白去乙酰化酶和HDACIs

組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)作為多蛋白復(fù)合物的亞基存在于細(xì)胞中，去除賴氨酸殘基乙?；?，抑制基因轉(zhuǎn)錄。在哺乳動(dòng)物中，有18種HDACs，根據(jù)序列同源性分為以下4類：Ⅰ類HDACs(HDAC1、2、3和8)，Ⅱ類HDACs(HDAC4、5、6、7、9和10)，Ⅳ類(HDAC 11)和Ⅲ類(sirtuin家族：SIRT1- 7)[15- 16]。其中 Ⅰ 類HDACs與酵母轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子鉀依賴性降低3(reduced potassium dependency，RPD3)關(guān)系最為密切[17]，Ⅱ 類HDACs分為兩個(gè)亞組：Ⅱa類，有1個(gè)大的C-末端；Ⅱb類，有2個(gè)去乙酰酶結(jié)構(gòu)域。Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ類HDACs依賴鋅離子(Zn2+)并共享1個(gè)類似的催化核心催化乙酰賴氨酸水解，而 Ⅲ 類HDACs酶活性依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD)[18- 19]。Ⅰ類HDACs廣泛存在，主要分布在細(xì)胞核內(nèi)；而Ⅱ類HDACs具有組織特異性，可以在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間穿梭。轉(zhuǎn)錄共抑制因子，如哺乳動(dòng)物sin3因子(mammalian Sin3，mSIN3)、核受體共抑制因子(nuclear receptor co-repressor，NCoR)和維甲酸與甲狀腺激素受體轉(zhuǎn)錄沉默子(silencing mediator of retinoid and thyroid hormone receptor，SMRT)將Ⅰ類和Ⅱ類HDACs招募到轉(zhuǎn)錄因子中并發(fā)生相互作用，抑制基因表達(dá)[15]。

HDACIs抑制HDACs的活性和功能，增加賴氨酸乙?；?，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，HDACIs可分為羥肟酸、羧酸、苯甲酰胺和環(huán)肽類[20]，各類代表化合物及其作用特點(diǎn)見(jiàn)表1。

表1 HDACIs的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類及特點(diǎn)

HDACIs可以抑制HSCs中HDACs的活性，增加組蛋白乙酰化水平，使調(diào)節(jié)關(guān)鍵細(xì)胞和分子功能的基因數(shù)量增加[21]。研究表明，丙戊酸鈉(valproate acid，VPA)聯(lián)合細(xì)胞因子培養(yǎng)明顯增加臍帶血(cord blood，CB)CD34+細(xì)胞組蛋白H3乙酰化水平，紅系特異性基因(如Eklf、EpoR、Gata2、Pu.1)及干細(xì)胞基因(c-Kit)啟動(dòng)子的組蛋白H3K9/14和H3K27乙?；黾訑?shù)倍[1]。采用3種Ⅰ類和Ⅱ類HDACIs(包括SCR、C433、VPA)分別處理CB-CD34+細(xì)胞24 h，檢測(cè)HDACs活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ⅰ類(HDAC1、 2、3)、Ⅱa類(HDAC4、5)和Ⅱb類(HDAC6)活性不同程度下降，不同HDACIs作用強(qiáng)度有差異，其中SCR和C433抑制活性最強(qiáng)；但VPA對(duì)CB-CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增率最高，HDACIs對(duì)CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增效率并不與對(duì)HDACs的抑制強(qiáng)度直接相關(guān)[2]。

HDACs的過(guò)度表達(dá)在一些疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，HDACIs已經(jīng)被用于多種疾病的治療，尤其是抗腫瘤治療，如SAHA/Vorinostat和FK228/Romidepsin治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤[22- 23]，PXD101/Belinostat治療外周T細(xì)胞淋巴瘤[24]，LBH589/Panobinostat治療多發(fā)性骨髓瘤[25]。還有一些HDACIs則被用來(lái)在體外培養(yǎng)中促進(jìn)干細(xì)胞重編程。

體外HDACIs促進(jìn)造血干細(xì)胞擴(kuò)增、抑制分化

HSCs的分裂有3種模式：(1)不對(duì)稱分裂：1個(gè)HSC細(xì)胞分裂為1個(gè)HSC和1個(gè)分化的造血祖細(xì)胞(hematopoietic progenitor cells，HPCs)，既保持了HSC數(shù)量，同時(shí)使HPCs進(jìn)行性增加；(2)對(duì)稱分裂(包括2種模式)：1個(gè)HSC可以分裂產(chǎn)生2個(gè)HSC(對(duì)稱更新，使HSCs池?cái)U(kuò)張)或2個(gè)分化的造血祖細(xì)胞(對(duì)稱分化，產(chǎn)生分化細(xì)胞而HSC耗竭)[4- 5]。HSC在體內(nèi)通過(guò)控制不對(duì)稱和對(duì)稱的細(xì)胞分裂比例，能夠平衡自我更新和分化，但在體外培養(yǎng)中會(huì)失去這種平衡，導(dǎo)致HSCs分化。使用細(xì)胞因子組合[包括干細(xì)胞因子、Fms樣酪氨酸激酶(FMS like tyrosine kinase，F(xiàn)LT- 3)配體、血小板生成素、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)- 3、IL- 6或促紅細(xì)胞生成素等不同組合]組成體外培養(yǎng)系統(tǒng)來(lái)擴(kuò)增HSCs，有利于細(xì)胞大量增殖、分化，但產(chǎn)生大量祖細(xì)胞，不具備干細(xì)胞的長(zhǎng)期重建能力[26]。多種小分子化合物被用來(lái)在體外培養(yǎng)中處理HSCs，抑制分化、促進(jìn)對(duì)稱性自我更新分裂，如芳香烴受體(AhR)拮抗劑(stemregenin 1，SR1)、嘧啶吲哚衍生物UM171，以及HDACIs[26]。HDACIs可以上調(diào)將早期HPCs重編程為HSCs的基因表達(dá)，這些與HSCs擴(kuò)增和功能維持有關(guān)的基因在HSCs培養(yǎng)過(guò)程中被沉默，組蛋白乙?；艽龠M(jìn)這些基因表達(dá)。

羧酸類HDACI丙戊酸(valproate acid，VPA)抑制Ⅰ類和Ⅱa類HDACs，能使CB-CD34+細(xì)胞表觀重編程，促進(jìn)CB-HSCs擴(kuò)增。研究發(fā)現(xiàn)，含血清培養(yǎng)體系下VPA處理HSCs產(chǎn)生更多分化細(xì)胞，即大量祖細(xì)胞和短期重建細(xì)胞而非長(zhǎng)期重建細(xì)胞[7]。Chaurasia等[2]將CB-CD34+細(xì)胞采用無(wú)血清培養(yǎng)基細(xì)胞因子組合預(yù)分化后，加入VPA培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)多能細(xì)胞(CD34+CD90+)顯著擴(kuò)增。將預(yù)分化CB-CD34+細(xì)胞加入VPA培養(yǎng)(不含細(xì)胞因子)和VPA與細(xì)胞因子組合共同培養(yǎng)7 d相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)后者擴(kuò)增效果和移植重建造血能力更強(qiáng)，VPA的重編程作用和細(xì)胞因子的促增殖作用具有協(xié)同效應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)支持使用無(wú)血清培養(yǎng)基，并將細(xì)胞因子組合和表觀修飾劑聯(lián)合，來(lái)擴(kuò)增HSC。VPA處理使CD34+細(xì)胞中乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase，ALDH)活性增加，CD90、CD117、CD49f和 CXCR4表達(dá)增強(qiáng)。以這種方式擴(kuò)增的HSCs能夠在1、2、3和4級(jí)免疫缺陷小鼠受體中植入，重建多系造血。Walasek等[27]研究表明，在體外培養(yǎng)條件下，單獨(dú)VPA處理或與氯化鋰聯(lián)用均能夠保持小鼠HSCs的功能，與干細(xì)胞維持相關(guān)基因的上調(diào)和分化相關(guān)基因的下調(diào)，有效抑制誘導(dǎo)分化的細(xì)胞因子作用。

羥肟酸基團(tuán)類非選擇性HDACIs曲古他汀A(tricostatin A，TSA)也能促進(jìn)CD34+細(xì)胞擴(kuò)增。Milhem等[28]將成人骨髓CD34+細(xì)胞用TSA和/或地西他濱處理后培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)TSA處理的細(xì)胞與僅用細(xì)胞因子培養(yǎng)的細(xì)胞相比，CD34+細(xì)胞增殖率為6倍，CD34+CD90+細(xì)胞增殖率為2.5倍。但在此研究中，單獨(dú)TSA處理的細(xì)胞在免疫缺陷小鼠中不能多系植入，而地西他濱和TSA先后聯(lián)合處理的細(xì)胞有多系植入能力。DNA甲基化也是分化期間發(fā)育調(diào)控者之一，表觀遺傳機(jī)制存在相互交聯(lián)，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase，DNMT1、3a)和HDAC相互作用抑制基因轉(zhuǎn)錄[29]。Saraf等[30]報(bào)道地西他濱/TSA處理動(dòng)員的外周血CD34+細(xì)胞，CD34+CD90+細(xì)胞擴(kuò)增(3.6±0.5)倍，原始克隆形成單位-混合(CFU-mix)擴(kuò)增(10.1±0.5)倍，長(zhǎng)期卵石樣區(qū)域形成細(xì)胞(cobble stone-area forming cells，CAFC)增加(2.2±0.5)倍，并具有體內(nèi)造血重建能力。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑和HDACI聯(lián)合可能具有協(xié)同激活沉默基因的作用，提示不同途徑表觀修飾劑聯(lián)合可能具有協(xié)同擴(kuò)增HSCs作用。

Tatetsu等[31]系統(tǒng)評(píng)估了466種小分子藥物對(duì)人動(dòng)員的外周血CD34+CD90+HSPCs的擴(kuò)增能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)表觀遺傳修飾劑，尤其是HDACIs，能優(yōu)先維持和擴(kuò)增這些細(xì)胞。特別是單劑量HDACI濃度為50 nmol/L的TSA處理CD34+PBSCs與對(duì)照組(DMSO和細(xì)胞因子)相比CD34+CD90+細(xì)胞擴(kuò)增最大(11.7倍)，TSA處理的PBSC-CD34+細(xì)胞異種移植實(shí)驗(yàn)中植入率顯著高于對(duì)照組。這個(gè)小分子篩選實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了HDACIs在HSCs體外維持/擴(kuò)增培養(yǎng)技術(shù)中的強(qiáng)大作用。

HDACIs體外擴(kuò)增造血干細(xì)胞的機(jī)制

HDACIs體外擴(kuò)增HSCs的主要機(jī)制為上調(diào)與HSCs自我更新和功能維持有關(guān)的多能基因及將早期HPCs重編程為HSCs的基因表達(dá)。VPA培養(yǎng)擴(kuò)增使CD34+細(xì)胞中乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase，ALDH)活性增加，多能基因(包括SOX2、OCT4、NANOG和Z1C3)的上調(diào)，敲除這些多能基因可以消除這種擴(kuò)增作用[2]。VPA處理能夠使小鼠HSCs的與干細(xì)胞維持相關(guān)基因的上調(diào)和分化相關(guān)基因的下調(diào)，抑制誘導(dǎo)分化的細(xì)胞因子[27]。TSA處理人動(dòng)員的外周血CD34+HSCs，與HSPC相關(guān)基因(如GATA2和SALL4)表達(dá)增加[31]。地西他濱/TSA處理動(dòng)員的外周血CD34+細(xì)胞，HSCs自我更新相關(guān)基因(包括HOXB4、GATA2、EZH2)的轉(zhuǎn)錄水平增加，髓系分化相關(guān)的基因(PU.1)轉(zhuǎn)錄水平下降[30]。HDACIs通過(guò)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮作用，并可能與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑具有協(xié)同作用。

相同培養(yǎng)條件下，不同的HDACIs對(duì)HSC的命運(yùn)決定有不同的影響。每個(gè)HDACI具有1個(gè)獨(dú)特的表達(dá)模式，如VPA上調(diào)糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor，GCP)/STAT網(wǎng)絡(luò)(紅細(xì)胞生成需要)的轉(zhuǎn)錄，但scriptaid并不能使其上調(diào)[21]。采用不同HDACIs處理CB-CD34+細(xì)胞，包括TSA、SAHA、VPA、SCR、CAY10433(C433)、CAY10398(MD85)和CAY10603，擴(kuò)增效率有顯著差異；VPA可以重激活Oct4啟動(dòng)子，促進(jìn)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)產(chǎn)生，而TSA則無(wú)此作用[2]。暴露于不同的HDACIs會(huì)導(dǎo)致潛在調(diào)節(jié)因子在HSCs不同階段的不同表觀遺傳改變。非特異性HDACIs廣泛抑制所有HDACs，靶點(diǎn)多作用復(fù)雜。篩選特異性HDACIs抑制特定類型的HDAC，可能針對(duì)性更強(qiáng)。如HDAC5屬于Ⅱa型HDACs，特異性HDAC5抑制劑(LMK235)增加細(xì)胞核中p65乙酰化水平，顯著上調(diào)人CB-HSCs和HPCs表面CXCR4的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，促使SDF- 1/CXCR4-介導(dǎo)的趨化作用增強(qiáng)，增加干細(xì)胞在骨髓微環(huán)境中的歸巢，并增加SCID-重建細(xì)胞(SCID-repopulating cell，SRC)數(shù)和增強(qiáng)在NSG小鼠長(zhǎng)期重建能力[32]。下調(diào)HDAC3對(duì)于體外HSCs擴(kuò)增是必要的[33]。

不同來(lái)源的HSCs擴(kuò)增能力有差異，在相同的培養(yǎng)條件下，骨髓、動(dòng)員的外周血和臍帶血來(lái)源的CD34+CD90+細(xì)胞分別擴(kuò)增2.4、3.6和10.9倍[30]。這種差異可能與個(gè)體發(fā)育階段相關(guān)，也可能是由于不同來(lái)源HSC中促進(jìn)對(duì)稱分裂和重編程基因表達(dá)的表觀遺傳修飾深度差異所致。

表觀修飾劑不僅能在體外擴(kuò)增HSCs數(shù)量，對(duì)其免疫功能也產(chǎn)生影響。地西他濱/TSA擴(kuò)增后的臍血中樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)HLA-DR/CD86和HLA-DR/CD11c共表達(dá)及混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的同刺激能力均顯著下降。HSC分化為DC依賴于STAT3。地西他濱/TSA擴(kuò)增細(xì)胞中STAT3和STAT3抑制劑(包括SHP1、 p21和GATA1)的轉(zhuǎn)錄均顯著增加，但p-STAT3占總STAT3的比率明顯下降，說(shuō)明 STAT3失活。延長(zhǎng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，地西他濱/TSA擴(kuò)增細(xì)胞STAT3和STAT3抑制劑(包括SHP1)的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照相當(dāng)，而且仍能產(chǎn)生DC，說(shuō)明STAT3 失活只是暫時(shí)的。擴(kuò)增細(xì)胞中STAT3依賴的DC 分化被可逆性抑制導(dǎo)致同刺激能力下降[34]。

HDACIs擴(kuò)增造血干細(xì)胞的安全性

擴(kuò)增造血干細(xì)胞的目的是為臨床干細(xì)胞治療提供足夠數(shù)量的干細(xì)胞，必須明確體外小分子化學(xué)物質(zhì)處理后的細(xì)胞能否安全應(yīng)用于人體。采用重編程因子創(chuàng)造iPSCs目前并不適合用于產(chǎn)生大量可移植的HSCs，因?yàn)橛袗盒赞D(zhuǎn)化的傾向(如形成畸胎瘤)[35]。

Lam等[36]報(bào)道在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，采用TSA和VPA擴(kuò)增CB-HSCs，臍血細(xì)胞中白血病相關(guān)基因，包括CDKN1C、CEBPα、HOXA9、MN1和DLK1表達(dá)上調(diào)。但目前在小分子HDACIs處理HSCs誘導(dǎo)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，均未觀察到明顯的惡性腫瘤，在移植擴(kuò)增后細(xì)胞的1代或2代NSG小鼠也未發(fā)現(xiàn)畸胎瘤的形成，而且在胚胎干細(xì)胞注射后形成畸胎瘤的部位注射擴(kuò)增后的臍血多能干細(xì)胞并沒(méi)有導(dǎo)致畸胎瘤形成[2]。表觀遺傳修飾劑(包括HDACIs、DNMTI)處理的HSCs未在受體小鼠中產(chǎn)生畸胎瘤或血液惡性腫瘤，可能是由于短期暴露于低劑量CMAs，多能性基因僅短暫上調(diào)，在連續(xù)移植后的人細(xì)胞中已觀察不到這種上調(diào)。這些小分子只是暫時(shí)激活HSCs自我更新所需的基因程序，建立一個(gè)有限但充分的表觀遺傳特征時(shí)期，允許更多HSCs在短暫的培養(yǎng)期間產(chǎn)生，但并未創(chuàng)造出不可逆改變的永生細(xì)胞系。培養(yǎng)結(jié)束后，去除表觀遺傳修飾劑，預(yù)期使HSCs擴(kuò)增的基因程序沉默，因此使白血病轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)最小化，但又不影響已產(chǎn)生的HSCs遺傳和功能特性。但HDACIs擴(kuò)增的干細(xì)胞應(yīng)用于細(xì)胞治療的安全性還有待更充分的數(shù)據(jù)支持。

展 望

表觀遺傳修飾在多種人體生理、病理過(guò)程中發(fā)揮不同作用，HDACIs已成功治療多種HDAC高表達(dá)的腫瘤性疾病，可誘導(dǎo)惡性克隆細(xì)胞凋亡和分化[22- 25]；在體外細(xì)胞研究中，HDACIs可以誘導(dǎo)髓系定向分化，如MS- 275誘導(dǎo)人K562紅白血病細(xì)胞系的紅系分化[37]，VPA增加人CD34+造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)巨核細(xì)胞/紅系祖細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)抑制了巨核細(xì)胞分化[38]；而在體外造血干細(xì)胞擴(kuò)增中，HDACIs促進(jìn)培養(yǎng)的正常CD34+細(xì)胞自我更新產(chǎn)生造血干祖細(xì)胞。組蛋白乙酰化修飾的復(fù)雜作用是進(jìn)一步研究的難點(diǎn)。從高選擇性HDACIs和特異性HDAC著手，可能有助于確定分化信號(hào)誘導(dǎo)染色質(zhì)修飾酶活性轉(zhuǎn)變的信號(hào)通路，從而解釋HDACIs的不同作用[39]。

體外擴(kuò)增造血干細(xì)胞，尤其是臍血造血干細(xì)胞，增加治療用干細(xì)胞的數(shù)量及干細(xì)胞歸巢、重建造血和重建免疫的能力，將大大促進(jìn)干細(xì)胞治療技術(shù)的進(jìn)步。信號(hào)通路化學(xué)小分子或骨髓基質(zhì)共培養(yǎng)體系體外擴(kuò)增的臍血細(xì)胞已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。表觀遺傳小分子擴(kuò)增造血干細(xì)胞在擴(kuò)增效率、維持長(zhǎng)期造血方面仍需提升，可以通過(guò)大規(guī)模高通量篩選擴(kuò)增作用強(qiáng)的HDACIs和選擇不同通路表觀修飾劑協(xié)同作用，預(yù)期將進(jìn)一步提高擴(kuò)增效果，提供更高質(zhì)量的干細(xì)胞產(chǎn)品。