Bim和ULBP2的水平對(duì)腎母細(xì)胞瘤術(shù)后患兒復(fù)發(fā)及預(yù)后的影響

李艷麗 金建光 周亞麗 常新捷 馮玨利 閆俊強(qiáng)

腎母細(xì)胞瘤(Wilms tumor,WT)是兒科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居兒科腫瘤第四位，75%以上患兒發(fā)病年齡≤5歲，90%以上為單側(cè)腎母細(xì)胞瘤[1-2]。目前其治療手段多為手術(shù)治療聯(lián)合放、化療，常用手術(shù)方式包括：根治性瘤腎切除術(shù)(radical nephrectomy,RN)、保留腎單位腎切除術(shù)(nephron-sparing surgery,NSS)等[3-4]。隨著醫(yī)療手段的進(jìn)步和發(fā)展，腎母細(xì)胞瘤患兒治愈率已超過(guò)90%，但由于切除不徹底、術(shù)后放化療不及時(shí)等因素影響，中晚期腎母細(xì)胞瘤患兒常出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象，導(dǎo)致患兒生存率下降[5-6]。因此腎母細(xì)胞瘤術(shù)后對(duì)患兒預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，從而盡早采取附加手段進(jìn)行治療或預(yù)防，對(duì)腎母細(xì)胞瘤患兒康復(fù)具有重要意義。本研究對(duì)腎母細(xì)胞瘤術(shù)后患兒血清中Bim和ULBP2的水平變化進(jìn)行研究，并分析其對(duì)患兒術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后的影響，現(xiàn)詳述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月至2019年1月于我院進(jìn)行單側(cè)腎母細(xì)胞瘤手術(shù)的中晚期(Ⅱ～Ⅴ期)腎母細(xì)胞瘤患兒60例，其中男性33例，女性27例，年齡5個(gè)月～11歲，平均年齡(5.76±1.01)歲。60例患兒根據(jù)不同病理分期分為2組，分別為中期組(Ⅱ～Ⅲ期，43例)和晚期組(Ⅳ～Ⅴ期，17例)，各組患兒一般資料見(jiàn)表1，差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具可比性。

表1 患兒一般資料

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒年齡均<12歲；所有患兒均經(jīng)臨床病理學(xué)確診為腎母細(xì)胞瘤；所有患兒均為單側(cè)腎母細(xì)胞瘤；所有患兒均為中晚期腎母細(xì)胞瘤患兒(臨床分期Ⅱ期～Ⅴ期)。排除標(biāo)準(zhǔn)：有其他惡性腫瘤史；就診時(shí)已發(fā)生局部轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。本研究獲得了本院倫理學(xué)研究委員會(huì)批準(zhǔn)，入選患兒家屬均知情同意本研究?jī)?nèi)容并簽署同意書(shū)。

1.3 手術(shù)方法

所有患兒均進(jìn)行腹腔鏡下根治性瘤腎切除術(shù)，患兒經(jīng)氣管插管全身麻醉后，以左側(cè)腫瘤切除為例，采取左側(cè)70°臥位，抬高腰橋，常規(guī)導(dǎo)尿，采取三孔法進(jìn)行手術(shù)，首選單肺通氣，若患兒無(wú)法進(jìn)行單肺通氣，可封閉胸腔于臍上1 cm(A點(diǎn))建立人工氣胸進(jìn)行雙肺通氣并置入5 mm腹腔鏡，然后依次于右鎖骨中線肋緣下3 cm(B點(diǎn))、腋前線肋緣下3 cm(C點(diǎn))、劍突下3 cm(D點(diǎn))置入腹腔鏡，暴露術(shù)野。切開(kāi)后腹膜，暴露右腎動(dòng)靜脈和輸尿管，均以Hem-o-lok結(jié)扎鎖夾閉并離斷，清掃淋巴結(jié)，擴(kuò)大A點(diǎn)后，采用切割縫合器切除患兒腎母細(xì)胞瘤及部分周?chē)＝M織，關(guān)閉腹腔。術(shù)后患兒均采用流食，術(shù)后1 w實(shí)施輔助化療。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

取患兒術(shù)后切除的腎母細(xì)胞瘤組織，剪碎后制備成組織勻漿，全蛋白提取試劑盒(購(gòu)自Sigma-Aldrich)提取總蛋白，BCA蛋白定量試劑盒(購(gòu)自Sigma-Aldrich)進(jìn)行蛋白定量，然后上樣SDS-PAGE膠，轉(zhuǎn)膜后進(jìn)行Western blot檢測(cè)(β-Actin抗體、BIM抗體和ULBP2抗體)，圖像分析軟件分析目的蛋白條帶灰度，記錄其相對(duì)表達(dá)量；分別于術(shù)前1 d、術(shù)后1 h以及術(shù)后1 w(實(shí)施輔助化療前)對(duì)兩組患兒進(jìn)行靜脈取血，室溫下離心取血清，人BIM和ULBP2 ELISA試劑盒檢測(cè)兩組患兒血清中BIM和ULBP2的含量，操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)；記錄隨訪1年間(2019年1月至2020年1月)，兩組患兒預(yù)后情況，并進(jìn)行分析和比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前兩組患兒瘤組織中Bim和ULBP2的相對(duì)表達(dá)量比較

兩組瘤旁組織中BIM和ULBP2相對(duì)表達(dá)量相比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而與中期組瘤組織相比，晚期組瘤組織中BIM相對(duì)表達(dá)量均顯著降低，ULBP2相對(duì)表達(dá)量均顯著增加(P<0.05)。與瘤旁組織相比，兩組瘤組織中BIM相對(duì)表達(dá)量均顯著降低，ULBP2相對(duì)表達(dá)量均顯著增加(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 術(shù)前兩組患兒瘤組織中Bim和ULBP2相對(duì)表達(dá)量比較

2.2 術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)兩組患兒血清中Bim和ULBP2的含量比較

與術(shù)前1 d和術(shù)后1 h相比，術(shù)后1 w兩組患兒血清中Bim含量均顯著上升，ULBP2含量均顯著下降(P均<0.05)，而兩組患兒術(shù)前1 d和術(shù)后1 h相比，兩指標(biāo)變化均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。與中期組相比，晚期組術(shù)前1 d、術(shù)后1 h以及術(shù)后1 w，患兒血清中Bim含量均顯著上升，ULBP2含量均顯著下降(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)兩組患兒血清中Bim和ULBP2的含量比較

2.3 患兒腎母細(xì)胞瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況分析

與中期組相比，晚期組術(shù)后復(fù)發(fā)、肺轉(zhuǎn)移以及死亡等不良預(yù)后狀況的總發(fā)生率顯著上升(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 患兒腎母細(xì)胞瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況分析(例，%)

2.4 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，腎母細(xì)胞瘤患兒預(yù)后狀況與其根治性瘤腎切除術(shù)后血清中Bim的含量呈顯著負(fù)相關(guān)(γ=-0.630，P=0.011)，與血清中ULBP2的含量呈顯著正相關(guān)(γ=0.644，P=0.007)。

3 討論

腎母細(xì)胞瘤是15歲以下兒童常見(jiàn)腎臟腫瘤之一，患者平均發(fā)病年齡約3.5歲，單側(cè)腎母細(xì)胞瘤占93%～95%[1]。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，近五年該腫瘤治愈率已超過(guò)90%[7]。相關(guān)研究提出：約10%的腎母細(xì)胞瘤患兒在術(shù)后會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)、局部轉(zhuǎn)移、需再次進(jìn)行治療的問(wèn)題，尤以中晚期患兒為甚，這對(duì)患兒生存具有嚴(yán)重不利影響，目前該問(wèn)題也是該腫瘤疾病目前仍待解決的難點(diǎn)問(wèn)題[8-9]。因此，盡早確定患兒預(yù)后情況和不良因素，并針對(duì)性改善手術(shù)操作，這是降低腎母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)率以及提高患兒生存率的重要措施[10]。

BIM(Bcl-2 interacting mediator of cell death)是與凋亡調(diào)節(jié)相關(guān)的基因，是Bcl-2家族中BH3-only亞家族的成員，其低表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展以及患者的預(yù)后密切相關(guān)，BIM途徑在腫瘤化療及靶向治療中具有重要意義[11-12]。人巨細(xì)胞病毒糖蛋白ULl6結(jié)合蛋白(ULl6 binding protein,ULBP)可激活自然殺傷細(xì)胞，是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤相關(guān)的蛋白，相關(guān)研究表明其在腎母瘤組織中高表達(dá)可預(yù)示不良預(yù)后[13]。

本研究探討腎母細(xì)胞瘤術(shù)后患兒血清中Bim和ULBP2的水平變化，并分析其對(duì)患兒術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后的影響，結(jié)果顯示：與中期組瘤組織相比。晚期組瘤組織中BIM相對(duì)表達(dá)量均顯著降低，ULBP2相對(duì)表達(dá)量均顯著增加(P<0.05)，與瘤旁組織相比，兩組瘤組織中BIM相對(duì)表達(dá)量均顯著降低，ULBP2相對(duì)表達(dá)量均顯著增加(P均<0.05)，表明：腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生和進(jìn)展伴隨著B(niǎo)IM的低表達(dá)和ULBP的高表達(dá)，與相關(guān)研究結(jié)論一致[11，13]。另外，與術(shù)前1 d和術(shù)后1 h相比，術(shù)后1 w兩組患兒血清中Bim含量均顯著上升，ULBP2含量均顯著下降(P均<0.05)；與中期組相比，晚期組術(shù)前1 d、術(shù)后1 h以及術(shù)后1 w，患兒血清中Bim含量均顯著上升，ULBP2含量均顯著下降(P均<0.05)。表明：術(shù)后中期組和晚期組腎母細(xì)胞瘤患兒的恢復(fù)及痊愈則伴隨著其血清中Bim含量的上升和ULBP2含量的下降，且中期組的恢復(fù)速度及水平較晚期組更優(yōu)。而與中期組相比，晚期組術(shù)后復(fù)發(fā)、肺轉(zhuǎn)移以及死亡等不良預(yù)后狀況的總發(fā)生率顯著上升(P<0.05)，分析其原因可能在于：由于術(shù)后1 w后，兩組患兒血清中Bim和ULBP2的水平仍存在顯著差異，表明中期組術(shù)后恢復(fù)情況優(yōu)于晚期組，這可能也是兩組預(yù)后狀況出現(xiàn)差異的主要原因。另外，腎母細(xì)胞瘤患兒預(yù)后狀況與其根治性瘤腎切除術(shù)后血清中Bim和ULBP2水平的相關(guān)性分析結(jié)果結(jié)果表明：腎母細(xì)胞瘤患兒預(yù)后與術(shù)后患兒血清Bim的含量呈顯著負(fù)相關(guān)，與ULBP2含量呈顯著正相關(guān)(P均<0.01)。本研究不足之處在于，僅對(duì)腎母細(xì)胞瘤術(shù)后患兒血清中Bim和ULBP2的水平對(duì)其復(fù)發(fā)及預(yù)后的影響進(jìn)行分析，并未給出術(shù)后患兒血清中Bim和ULBP2的水平對(duì) 患兒造成不良預(yù)后的臨界值或其范圍，將在后續(xù)研究中進(jìn)行深入分析和探討。

綜上所述，腎母細(xì)胞瘤術(shù)后可通過(guò)患兒血清中Bim和ULBP2的水平變化檢測(cè)，從而對(duì)患兒復(fù)發(fā)及預(yù)后狀況進(jìn)行初步預(yù)估，其預(yù)后狀況與根治性瘤腎切除術(shù)后血清中Bim的含量呈顯著負(fù)相關(guān)，與血清中ULBP2的含量呈顯著正相關(guān)。