OTUD1在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理特征的相關(guān)性

王延朋 王啟船 柳云飛 謝 陽 陳濤利 高新雅

目前，隨著環(huán)境惡化、吸煙人口及職業(yè)暴露的上升，肺癌發(fā)病率已居世界癌癥首位，其中75%～80%患者為非小細胞肺癌(NSCLC)，因其5年生存率低，病死于浸潤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的患者占90%以上，其中，NSCLC不良預(yù)后的重要原因為相關(guān)基因異常表達[1-2]。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)是細胞內(nèi)蛋白降解途徑，其降解途徑屬于可逆過程；去泛素化酶(DUBs)在細胞生長、凋亡、遺傳性腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等中發(fā)揮著重要作用，其主要成員為卵巢癌結(jié)構(gòu)域蛋白酶(OTUD)，在人類腦、肺、腎等組織內(nèi)有廣泛表達[3-4]。然而，肺癌組織病理與OTUD1基因表達相關(guān)性的報道尚不多見。本研究旨在探究OTUD1在NSCLC中的表達情況?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2019年10月在南陽市第二人民醫(yī)院治療的70例NSCLC患者，選取其癌組織石蠟標(biāo)本(n=70)及對應(yīng)癌旁組織(n=70)。男性44例，女性26例；年齡50～75歲，平均(58.05±0.20)歲；病理類型：腺癌32例，鱗癌32例，其它6例；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期23例；40例有吸煙史，25例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有標(biāo)本均于手術(shù)中采集。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核并通過本研究。

1.2 免疫組織化學(xué)染色及評分

NSCLC及癌旁正常組織切片均應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法對其進行染色。滴加一抗兔抗人OTUD1抗體4 ℃過夜，室溫將其置于生物素化的二抗辣根過氧化物酶中繼續(xù)孵育30 min。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，封片后觀察并攝片。由2名專業(yè)病理科醫(yī)生獨立評估免疫組織化學(xué)結(jié)果，根據(jù)切片中細胞是否顯色、深淺評分，對染色強度進行詳細的分類：無著色為0分；淺黃色為1分；深黃色為2分；棕褐色為3分。計算每100個細胞中陽性細胞所占百分比，其中占比<1/3為1分；>1/3～2/3為2分；>2/3為3分。2組評分相乘，陰性(-)<1分；陽性(+)2～4分；強陽性(++)>5分。OTUD1低表達0～4分，OTUD1高表達5～7分。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達水平。(2)采用COX回歸分析性別、年齡、吸煙與否、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、TNM分期、病理類型與OTUD1蛋白表達的相關(guān)性。(3)經(jīng)Kaplan-Meier及COX回歸分析影響患者預(yù)后的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 22.0分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料使用頻數(shù)表示，卡方檢驗進行比較；使用Kaplan-Meier及COX進行相關(guān)性分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達水平比較

肺癌組織的OTUD1高表達率為48.57%(34/70)，顯著高于癌旁正常組織的5.71%(4/70),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=35.840，P<0.05)。

2.2 OTUD1與非小細胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

非小細胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者組織中OTUD1表達率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，TNM分期Ⅰ～Ⅱ者低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ者(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床特征間OTUD1表達水平比較/例

2.3 NSCLC患者生存的影響因素分析

經(jīng)Kaplan-Meier及COX回歸分析顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、OTUD1表達是患者生存的影響因素(P<0.05)，見圖1。見表2。

表2 NSCLC患者生存的影響因素分析表

圖1 NSCLC患者OTUD1表達情況與生存分析圖

3 討論

隨著外科手術(shù)方式的改進及綜合治療方案的實施，以及分子生物靶向藥物的出現(xiàn)，肺癌患者的臨床治療取得較大的進展，但總體5年生存率仍不樂觀，因此倡導(dǎo)個體化和精準(zhǔn)化治療成為目前的主流治療模式[5-6]。

近幾年，臨床廣泛關(guān)注泛素化酶與DUBs對于細胞周期調(diào)控及其與腫瘤發(fā)生的關(guān)系[7]。OTUDs屬于去泛素化酶家族一個重要成員，OTUD1為最早在體外證實可以發(fā)揮去泛素化酶活性作用的OTUD蛋白，包含1個由130個氨基酸組成的OTUD結(jié)構(gòu)域，且高度保守[8-10]。去泛素化酶可將泛素從泛素連接底物上移除，發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞的增殖、周期進程、轉(zhuǎn)錄激活及信號傳導(dǎo)等過程。目前關(guān)于OTUD1作用機制有以下兩種觀點，一種觀點認為[11]，OTUD1可誘發(fā)p53依賴的細胞凋亡及抑制細胞增殖；另一種觀點認為[12]，OTUD1可以與SMAD2/3結(jié)合，被抑制磷酸化的SMAD2/3可以通過蛋白酶體途徑進行降解。姜維娜等[13]研究報道，OTUD1在結(jié)腸癌組織中的表達較癌旁組織高3.5倍，癌組織中OTUD1的蛋白表達水平也明顯高于癌旁組織。段菲[14]、熊金升[15]等分別在乳腺癌及膠質(zhì)細胞瘤中發(fā)現(xiàn)OTUD1在癌細胞組織中高表達的生物學(xué)行為。OTUD1高表達可作為預(yù)后不良的標(biāo)志物，其在卵巢癌和胃腺癌中促進癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移，通過抑制RAS泛素化促進肺癌的發(fā)展。本次研究證實了OTUD1在NSCLC組織中的表達顯著高于正常肺組織，然而，其與其他臨床及病理特征之間的相關(guān)性不顯著，表明在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中OTUD1高水平與之有著重要關(guān)系，上述研究的發(fā)現(xiàn)，可為以后關(guān)于肺癌的個體化及精準(zhǔn)化治療提供新的治療方向。國外學(xué)者研究報道[16]，OTUD1在結(jié)直腸癌組織中的表達水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤深度呈正相關(guān)，且可作為無進展生存期和總生存期的一個獨立預(yù)后因素。本次研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及OTUD1高表達與患者的生存質(zhì)量相關(guān)，與上述研究報道相一致。本次研究中，與OTUD1低表達患相比，OTUD1高表達患者預(yù)后較差，進一步表明，OTUD1高表達患者可能為預(yù)后高危人群。本研究對OTUBl蛋白在NSCLC中的作用機制提供了初步的實驗依據(jù)，相信進一步深入研究將為NSCLC的診治及新型化療藥物的研制提供新的方向。

綜上，OTUD1在NSCLC組織中高表達，與不良預(yù)后顯著相關(guān)，可以作為評估預(yù)后的獨立因素，并為NSCLC的生物靶向治療提供了一個新的思路。