E-cad、Snail在垂體腺瘤組織中的表達(dá)及其意義

代紅偉 楊 揚(yáng) 李 惺

垂體腺瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)的良性腫瘤，具有較高的發(fā)生率，約占顱內(nèi)腫瘤的12%[1]。E-鈣黏蛋白(E-cad)是1種同親型結(jié)合、Ca2+依賴的細(xì)胞黏著糖蛋白，E-cad已被證實(shí)在肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤中表達(dá)降低[2]。而Snail蛋白則具有抑制E-cad表達(dá)，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲能力的作用。本研究主要采用免疫組化方法檢測(cè)垂體腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表達(dá)水平，具體內(nèi)容如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2013月7月至2014年7月于我院行垂體腺瘤切除術(shù)患者60例(經(jīng)蝶手術(shù)34例，經(jīng)開(kāi)顱手術(shù)26例)作為實(shí)驗(yàn)組，其中男性31例、女性29例，年齡25～64歲，平均年齡(35.21±2.63)歲。另選癌旁正常組織60例作為對(duì)照組，其中男性32例、女性28例，年齡25～64歲，平均年齡(35.41±2.82)歲。該研究已經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

納入標(biāo)準(zhǔn)： 患者均符合《外科學(xué)》(第8版)垂體腺瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；垂體腺瘤為單一分泌類型者；年齡在25～65歲；了解本研究并自愿簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：垂體腺瘤卒中或囊變者；垂體腺瘤為混合型分泌者；凝血功能嚴(yán)重障礙者；心、肝、腎等重要器官嚴(yán)重障礙者；對(duì)研究及隨訪不能配合者。

1.2 方法

主要試劑： 鼠抗人E-cad單克隆抗體購(gòu)自北京中衫生物工程公司；兔來(lái)源Snail抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；二抗試劑:二步法兔/鼠通用免疫組化試劑盒，抗體使用前按說(shuō)明進(jìn)行稀釋。

病理切片染色： 使用石蠟對(duì)病理組織進(jìn)行包埋，4 μm后連續(xù)切片，將切片置于60 ℃的烤箱中30 min，再使用二甲苯脫蠟；將切片放進(jìn)4 ℃經(jīng)冷藏后的枸櫞酸鹽緩沖液中，微波修復(fù)后自然冷卻；滴入一抗，孵育6 h；滴入二抗，孵育30～60 min；滴加新配的DAB顯色劑在切片上，顯色越2 min后用自來(lái)水沖洗；蘇木精復(fù)染3 min，脫水后用中性樹(shù)膠封片；用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知垂體腺瘤切片作陽(yáng)性對(duì)照。

資料收集：收集所有患者術(shù)前臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、KNOSP分期及復(fù)發(fā)情況，通過(guò)門診復(fù)查和電話等方式隨訪患者術(shù)后5年生存情況。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)率；分析E-cad、Snail蛋白表達(dá)與垂體腺瘤臨床病理特征的關(guān)系；分析E-cad、Snail表達(dá)水平與垂體腺瘤患者存活時(shí)間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0進(jìn)行研究資料分析。觀測(cè)資料中主要為計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率描述。組間比較為卡方檢驗(yàn)或校正卡方檢驗(yàn)(統(tǒng)計(jì)量為χ2)，相關(guān)分析為Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。 生存等時(shí)間隊(duì)列資料建立Kaplan-Meier乘積限生存曲線模型，組間生存率比較為L(zhǎng)ogrank檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比

實(shí)驗(yàn)組患者組織中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率為18.33%，對(duì)照組受試者組織中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率為86.67%，實(shí)驗(yàn)組患者組織中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組患者組織中Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為51.67%，對(duì)照組受試者Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為8.33%，實(shí)驗(yàn)組患者組織中Snail陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比(例，%)

2.2 實(shí)驗(yàn)組E-cad、Snail蛋白表達(dá)的相關(guān)性

由Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，E-cad與Snail蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.425，P=0.000)。見(jiàn)圖1。

圖1 E-cad、Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖

2.3 E-cad、Snail蛋白表達(dá)與垂體腺瘤臨床病理特征的關(guān)系

在60例垂體腺瘤患者中，E-cad與Snail蛋白表達(dá)均與年齡、性別及腫瘤直徑無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad陽(yáng)性率顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有復(fù)發(fā)患者E-cad陽(yáng)性率顯著低于無(wú)復(fù)發(fā)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白陽(yáng)性率顯著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有復(fù)發(fā)患者E-cad陽(yáng)性率顯著高于無(wú)復(fù)發(fā)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 E-cad、Snail蛋白表達(dá)與垂體腺瘤臨床病理特征的關(guān)系/例

2.4 E-cad、Snail表達(dá)水平與垂體腺瘤患者存活時(shí)間的關(guān)系

由Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，E-cad陽(yáng)性和陰性患者5年內(nèi)生存率分別為86.15%和49.01%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rank：χ2=21.631，P<0.001)。Snail蛋白陽(yáng)性和陰性患者5年內(nèi)生存率分別為40.67%和83.36%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-Rank：χ2=19.154，P<0.001)，見(jiàn)圖2。

圖2 E-cad和Snail蛋白表達(dá)與垂體腺瘤患者總生存率的關(guān)系

3 討論

垂體腺瘤是發(fā)病率較高的顱內(nèi)腫瘤之一，好發(fā)年齡為20～35歲[4]。該病主要表現(xiàn)為垂體激素異常分泌導(dǎo)致代謝紊亂和器官損害，腫瘤壓迫垂體導(dǎo)致應(yīng)周圍靶腺體的萎縮，腫瘤壓迫視神經(jīng)等導(dǎo)致視力降低等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[5]。垂體腺瘤可分為非侵襲性和侵襲性垂體腺瘤，以及垂體腺癌[6]。其中，非侵襲性垂體腺瘤病灶體積小，無(wú)典型表現(xiàn)，臨床隱匿性較強(qiáng)，因此早期較難發(fā)現(xiàn)[7]。侵襲性垂體腺瘤能夠入侵周圍的硬膜、骨質(zhì)、海綿竇等結(jié)構(gòu)。侵襲性垂體腺瘤具有增殖能力強(qiáng)，侵襲能力強(qiáng)，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，治愈率低等特點(diǎn)[8]。有文獻(xiàn)指出，侵襲性垂體腺瘤即使通過(guò)手術(shù)做到鏡下全切，其復(fù)發(fā)率仍高達(dá)20%[9]。因此，早期診斷出垂體腺瘤并進(jìn)行有效的治療，有利于患者的生命安全。本研究主要采用免疫組化方法檢測(cè)垂體腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表達(dá)水平，探討這兩者在垂體腺瘤病情診斷及預(yù)后評(píng)估的臨床價(jià)值。

有研究報(bào)道證實(shí)，在侵襲性垂體腺瘤中發(fā)現(xiàn)E-cad表達(dá)水平降低，E-cad低表達(dá)可能作為垂體腺瘤患者預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)[10]。同時(shí)，也有研究指出，在腫瘤惡性進(jìn)展中，隨著腫瘤惡化程度的加重，E-cad表達(dá)水平降低，而E-cad的表達(dá)異常則會(huì)造成細(xì)胞連接出現(xiàn)障礙，起到腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的作用，這將促進(jìn)腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展[11]。上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，是指上皮細(xì)胞通過(guò)特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程。ETM在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中具有重要作用，E-cad表達(dá)減少是其主要特征之一。E-cad廣泛存在與表皮組織中，是一種細(xì)胞跨膜糖蛋白，也是調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附反應(yīng)的重要因子，E-cad在維持組織細(xì)胞正常分化、增殖中起著重要作用[12]。當(dāng)E-cad表達(dá)降低時(shí)組織內(nèi)細(xì)胞黏附強(qiáng)度下降，導(dǎo)致細(xì)胞活動(dòng)能力增加，這增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[13]。有研究顯示，在惡性腫瘤中，Snail蛋白高表達(dá)，E-cad低表達(dá)，發(fā)生EMT而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[14]。Snail蛋白是間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的標(biāo)志物，也可調(diào)控EMT，主要機(jī)制是抑制E-cad的表達(dá)在促進(jìn)EMT進(jìn)程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[15]。本研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組E-cad陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于對(duì)照組，Snail陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組。垂體腺瘤中E-cad低表達(dá)，Snail蛋白高表達(dá)，這與上述言論具有一致性，提示E-cad、Snail蛋白可能作為垂體腺瘤診斷的指標(biāo)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad的陽(yáng)性率顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,有復(fù)發(fā)患者E-cad的陽(yáng)性率顯著低于無(wú)復(fù)發(fā)患者，KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白的陽(yáng)性率顯著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,有復(fù)發(fā)患者E-cad的陽(yáng)性率顯著高于無(wú)復(fù)發(fā)患者，這提示E-cad、Snail蛋白與垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性，原因在于E-cad、Snail均可調(diào)控EMT，對(duì)于腫瘤的進(jìn)展有密切聯(lián)系。由Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，E-cad陽(yáng)性患者5年內(nèi)平均存活時(shí)間顯著高于陰性患者，Snail陽(yáng)性患者5年內(nèi)平均存活時(shí)間顯著低于陰性患者，提示E-cad、Snail蛋白均是可影響患者生存的危險(xiǎn)因素，對(duì)于患者預(yù)后具有重要的評(píng)估作用。

綜上所述，垂體腺瘤中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率較低，Snail蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高，兩者在垂體腺瘤的發(fā)生、進(jìn)展中表達(dá)異常，E-cad陰性、Snail蛋白陽(yáng)性時(shí)垂體腺瘤病理分期更高、更易發(fā)生復(fù)發(fā)，且與患者存活時(shí)間相關(guān)，E-cad與Snail蛋白可能垂體腺瘤病情診斷及預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。