FOXC1、FAT4及YAP1蛋白在上皮性卵巢癌組織表達(dá)水平及意義研究

吳東雅 徐括琴 劉 芳 楊小風(fēng)

在我國(guó)，上皮性卵巢癌的發(fā)病率占卵巢腫瘤的50%～70%[1]。在臨床上，上皮性卵巢癌的惡化速度非?？欤∷缆史浅８遊2-3]。相關(guān)研究在對(duì)患者病情進(jìn)展機(jī)制的研究過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子水平變化可以促使卵巢上皮細(xì)胞發(fā)生異常病變，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生和病情進(jìn)展。yes相關(guān)蛋白(YAP1蛋白)的表達(dá)可以激活HIPPO的信號(hào)通路，從而提高了卵巢上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)卵巢上皮細(xì)胞的異常核分離過程[4]；轉(zhuǎn)錄因子叉頭框架蛋白(FOXC1)的表達(dá)，能夠通過穩(wěn)定癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄基因的活性，降低癌基因的激活程度，進(jìn)而穩(wěn)定癌細(xì)胞的生物學(xué)特征[5]；果蠅基因ft的同源基因(FAT4)的表達(dá)上升，能夠通過提高細(xì)胞的變形能力，促進(jìn)上皮細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而促進(jìn)惡性腫瘤的病情進(jìn)展[6]。為了揭示FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達(dá)與卵巢惡性腫瘤之間的關(guān)系，為臨床上對(duì)上皮性卵巢癌的診療或者預(yù)后評(píng)估提供參考意見，本文收集了我院在2018年1月至2020年1月期間保存的72例上皮性卵巢癌組織標(biāo)本進(jìn)行研究，現(xiàn)將結(jié)果進(jìn)行如下報(bào)告。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

在上皮性卵巢癌組織標(biāo)本72例中，年齡范圍為31～70歲，平均年齡(50.20±1.12)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：①經(jīng)病理組織學(xué)已確診者；②術(shù)前均未行放療、化療者；③相關(guān)病理資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：①非初次治療者；②合并有其他惡性腫瘤者。同時(shí)選取正常卵巢組織標(biāo)本60例，年齡30～68歲，平均年齡49.50歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次研究將石蠟連續(xù)性切片后脫蠟至水，然后再H2O2室溫下孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，用8%的蛋白粉封閉液(由BSA 購(gòu)自南京博奧生物科技公司生產(chǎn))封閉2 h，再倒去封閉液，加入兔來源(濃度1∶1000～1500)一抗，放置于4 ℃冰箱過夜，然后再次用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，加入鼠來源( 1∶400～500)二抗，放置于室溫孵育20～30 min，再次用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，然后加入辣根酶或堿性磷酸酶作為標(biāo)記物，放置于室溫孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，滴加顯色劑(由DAB 購(gòu)自南京博奧生物科技公司生產(chǎn))，復(fù)染，脫水，封片，完成實(shí)驗(yàn)。

1.3 療效判定

FOXC1、FATA4及YAP1以胞內(nèi)出血棕黃色顆粒為陽(yáng)性，采用半定量積分法進(jìn)行判斷，陽(yáng)性細(xì)胞比例：<5%計(jì)為0分，5%～25%計(jì)為1分，26%～50%計(jì)為2分，51%～75%計(jì)為3分，>75%計(jì)為4分；染色強(qiáng)度：無著色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，黃色計(jì)為2分，棕黃色計(jì)為3分；當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度得分之積，>4分則為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本文所得到的計(jì)數(shù)資料應(yīng)用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。以P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 上皮性卵巢癌和正常卵巢組織中FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達(dá)

上皮性卵巢癌組織FOXC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常卵巢組織，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，而FAT4和YAP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 上皮性卵巢癌和正常卵巢組織FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達(dá)(例，%)

2.2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系

Ⅲ期、中低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FOXC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期、高分化及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；中低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FAT4、YAP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高分化及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；Ⅲ期患者YAP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表2。

表2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

上皮性卵巢癌組織FOXC1蛋白與FAT4、YAP1蛋白呈負(fù)相關(guān)(γs=-0.297和-0.294，P<0.05)，F(xiàn)AT4蛋白與YAP1蛋白呈正相關(guān)(γs=0.471，P<0.05)。

3 討論

卵巢一旦出現(xiàn)上皮細(xì)胞的異常病變或癌基因的突變，就能夠促進(jìn)使上皮性卵巢癌的發(fā)生，尤其劍與見于合并生殖系統(tǒng)惡性腫瘤家族史者，上皮性卵巢癌的發(fā)病率會(huì)進(jìn)一步的升高[7]。在臨床上，上皮性卵巢癌患者的臨床預(yù)后整體較差，綜合性治療措施治療后，很多患者的無瘤生存時(shí)間、無進(jìn)展生存期仍然沒有得到改善[8-9]。本文從上皮性卵巢癌患者病灶組織中不同細(xì)胞因子和蛋白的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)：①對(duì)于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達(dá)分析研究，能夠?yàn)榕R床上卵巢癌患者的血清學(xué)腫瘤指標(biāo)的診斷提供潛在研究指標(biāo)；②對(duì)于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的研究，能夠?yàn)槁殉舶┗颊叩呐R床預(yù)后的評(píng)估提供依據(jù)。

FOXC1是叉頭轉(zhuǎn)錄因子家族成員，其能夠通過降低癌基因的激活程度，抑制癌基因轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子或者增強(qiáng)子的活性，能夠降低癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄速度，從而抑制癌細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖過程；FAT4是果蠅ft同源基因家族成員，其能夠激活癌細(xì)胞內(nèi)不同腫瘤信號(hào)的通路，提高癌細(xì)胞內(nèi)AKT或者NF-KB活性，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的生物學(xué)特征的改變；YAP1蛋白是HIPPO信號(hào)通路家族的重要成員，其能夠提高HIPPO下游腫瘤相關(guān)因子的激活，降低癌細(xì)胞的凋亡程度，促使癌細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，導(dǎo)致生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生[10]。有研究指出，F(xiàn)OXC1蛋白在食管癌或者甲狀腺癌患者中表達(dá)降低與相關(guān)惡性腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系[11]，但是對(duì)于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達(dá)與卵巢癌的關(guān)系研究卻很少。

本文對(duì)于卵巢癌患者病灶組織中FOXC1、FAT4及YAP1的表達(dá)分析進(jìn)行分析結(jié)果顯示，在病例組患者中，F(xiàn)OXC1的表達(dá)顯著下降，低于卵巢良性組織組，而FAT4及YAP1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率均顯著上升，遠(yuǎn)高于卵巢良性組織組，這表明FOXC1、FAT4及YAP1的異常表達(dá)可以促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展。這可能與FOXC1、FAT4及YAP1以下特性有關(guān)[12-14]：①FOXC1的表達(dá)下降，失去了其對(duì)于癌基因的穩(wěn)定和沉默作用，導(dǎo)致癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄基因的激活程度的提高；②FAT4的升高可以提高卵巢上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征的變化，促使上皮細(xì)胞發(fā)生異型；③YAP1的上升能夠促進(jìn)HIPPO信號(hào)通路的激活，加劇了癌細(xì)胞增殖。有研究從卵巢癌病灶組織發(fā)現(xiàn)[15-17]，F(xiàn)OXC1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可平均下降35%以上，尤其是在短期內(nèi)病情進(jìn)展速度較快或者遠(yuǎn)期病死率較高的卵巢癌患者中，F(xiàn)OXC1下降則更加明顯。從免疫組化染色結(jié)果可見，在癌細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域，F(xiàn)AT4和YAP1蛋白的染色強(qiáng)度也較深，進(jìn)一步說明相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)于卵巢癌細(xì)胞的形態(tài)特征的影響。在探討FOXC1、FAT4及YAP1的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，在臨床分期和癌細(xì)胞分化程度較低或是發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，F(xiàn)OXC1的表達(dá)均下降顯著，說明FOXC1的表達(dá)與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要于FOXC1的表達(dá)缺失能夠?qū)е掳┘?xì)胞細(xì)胞成熟障礙有關(guān)，促進(jìn)了癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和粘附過程；中低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FAT4、YAP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高，同時(shí)在臨床分期較晚的患者中，YAP1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步的升高，說明相關(guān)指標(biāo)與卵巢癌病情的關(guān)系，臨床上可以通過隨訪FAT4及YAP1的表達(dá)，進(jìn)而評(píng)估卵巢癌的病情。相關(guān)分析研究也可見[18-20]，F(xiàn)OXC1、FAT4及YAP1的表達(dá)具有顯著的相關(guān)性，這表明某些指標(biāo)在影響卵巢上皮細(xì)胞惡性腫瘤的病變過程中起著重要的作用。

總之，F(xiàn)OXC1的表達(dá)在卵巢癌患者中明顯下降，F(xiàn)AT4與YAP1的表達(dá)則明顯升高，此外相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)與卵巢癌患者臨床分期、癌細(xì)胞分化程度或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。