細(xì)胞周期蛋白D1、基質(zhì)金屬蛋白酶 -9 在胃癌組織中的表達(dá)水平及與幽門螺桿菌感染的相關(guān)性

陸 蓮

（江南大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，江蘇無錫 214062）

胃癌是一種惡性腫瘤，其發(fā)病初期無明顯癥狀，隨著病情發(fā)展進(jìn)入晚期，患者將表現(xiàn)出消化道出血癥狀，如疼痛、嘔血、黑便等，如提示疼痛持續(xù)放射性向腰背部展開，則表示腫瘤已經(jīng)侵犯胰腺被膜。腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡在惡性腫瘤的發(fā)展中起著重要的作用，細(xì)胞周期蛋白D1（cyclinD1）具有促進(jìn)細(xì)胞增殖由G1 期轉(zhuǎn)變?yōu)镾 期的作用，cyclinD1 蛋白表達(dá)的增加主要見于惡性腫瘤的發(fā)生過程；基質(zhì)金屬蛋白酶 -9（MMP-9）是可對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障起破壞作用[1]。幽門螺桿菌（Hp）感染可引發(fā)機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)與炎癥損傷，進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)生[2]。相關(guān)研究表明，Hp 陽性患者胃癌發(fā)生率明顯高于Hp 陰性患者，且清除Hp 可以有效降低胃癌的發(fā)生率[3]。因此，本研究旨在探討cyclinD1、MMP-9 在Hp 感染性胃癌組織中的表達(dá)水平與Hp 感染的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018 年1 月至2021 年1月江南大學(xué)附屬醫(yī)院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，其中男性63 例，女性37 例；年齡48～73 歲，平均（58.37±7.42）歲；TNM 臨床分期[4]：Ⅰ+Ⅱ期40 例，Ⅲ+Ⅳ期60 例；分化程度[5]：中高分化65 例，低分化35 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《胃癌》[6]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；且經(jīng)病理學(xué)檢查確診者；臨床資料完整者；近期未接受抗Hp 治療者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有其他惡性腫瘤者；嚴(yán)重肝、腎等功能損傷者；胃癌復(fù)發(fā)者等。本研究已通過院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 Hp 感染 ①改良Giemsa 染色：取所有患者的病理組織，做石蠟切片，進(jìn)行脫蠟水化，在2%的Giemsa染色劑中染色30 min，取出后立即用自來水進(jìn)行沖洗脫水透明處理，采用油鏡觀察Hp 感染情況（×1 000），其中改良Giemsa 染色Hp 菌體呈紫紅色。②14C 呼氣實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)前采集所有患者空腹6 h，且口服14C 尿素膠囊后的100 mL 呼出氣體，進(jìn)行14C 紅外線能譜儀檢測(cè)；14C 呼氣實(shí)驗(yàn)Hp 陽性超基準(zhǔn)值（DOB） ＞2.5。Hp 感染判定標(biāo)準(zhǔn)：改良Giemsa 染色、C-14 呼氣實(shí)驗(yàn)均為陽性。

1.2.2 cyclinD1、MMP-9 表達(dá) 取所有患者的病理組織，做石蠟切片，進(jìn)行脫蠟水化，每隔3 min 用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗1 次，共沖洗3 次。使用微波將pH值 = 6.0 的檸檬酸鹽緩沖液加熱至沸騰，取出組織切片后，放置于耐高溫塑料切片架上，靜置自然泠卻10 min后，每隔3 min 用蒸餾水和PBS 反復(fù)沖洗各2 次。滴1 滴3%的過氧化氫于切片上，靜置10 min 后，PBS再次沖洗3 次。cyclinD1 陽性染色主要定位于細(xì)胞核，陽性著色為棕黃色；MMP-9 陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性著色為棕黃色。綜合判定標(biāo)準(zhǔn)為染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞的百分比，染色強(qiáng)度：棕褐色（3分）、棕黃色（2 分）、淡黃色（1 分）、無染色（0 分）；陽性細(xì)胞數(shù)在腫瘤細(xì)胞中占比：＞50%（3 分）、25%～49%（2分）、5%～24%（1 分）、＜5%（0 分），最后計(jì)算兩項(xiàng)結(jié)果的乘積，乘積 ＞ 2 則判定為陽性[7]。

1.3 觀察指標(biāo) ①Hp 感染、cyclinD1、MMP-9 表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，其中臨床病理特征包括胃癌TNM 臨床分期、分化程度。②胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用[ 例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)系數(shù)法進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hp 感染與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 100 例胃癌患者中Hp 感染70 例，非Hp 感染30 例；非Hp 感染胃癌患者TNM 臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者，但經(jīng)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 Hp 感染與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系比較[ 例(%)]

2.2 cyclinD1 陽性表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 免疫組化染色結(jié)果顯示，cyclinD1 表達(dá)陽性57例，陰性43 例；cyclinD1 陰性患者中胃癌TNM 臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均顯著低于cyclinD1 陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 cyclinD1 表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系比較[ 例(%)]

2.3 MMP-9 陽性表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 免疫組化染色結(jié)果顯示，MMP-9 表達(dá)陽性80 例，陰性20例；MMP-9 陰性患者中胃癌TNM 臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均顯著低于MMP-9 陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 MMP-9 表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系比較[ 例(%)]

2.4 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達(dá)的相關(guān)性 與Hp 感染患者比，非Hp 感染患者中胃癌組織cyclinD1 陽性、MMP-9 陽性患者占比均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表4。

表4 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 的表達(dá)水平的關(guān)系比較[ 例(%)]

2.5 胃癌患者Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達(dá)的相關(guān)性 胃癌患者中，Hp 感染與cyclinD1 陽性、MMP-9陽性表達(dá)均呈正相關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= 0.462、0.571，均P＜0.05）。

3 討論

胃癌是由飲食、感染等致病因素導(dǎo)致機(jī)體胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生癌變的一種疾病。手術(shù)切除仍是目前臨床治療胃癌的主要方法，也是治療胃癌的主要手段，由于大多數(shù)胃癌患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)屬于晚期腫瘤，所以仍有大部分患者在術(shù)后存在復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的情況[8]。

Hp 是一種革蘭氏陰性菌，在大氣或絕對(duì)厭氧環(huán)境下不能生長(zhǎng)，常寄居在胃黏膜內(nèi)壁，但胃黏膜上皮脫落較快，所以寄居在胃黏膜上的Hp 會(huì)隨著胃黏膜上皮的更新而脫落，脫落后順著腸道從糞便排到體外，使食物和水源受到污染。但也有一部分Hp 不會(huì)隨著腸道排出，會(huì)經(jīng)過胃 - 食管反流進(jìn)入口腔，通過唾液傳播感染，Hp 可加重胃黏膜的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腸內(nèi)消化和萎縮，進(jìn)而加快癌變[9]。cyclinD1 含量隨細(xì)胞周期而變化，不同細(xì)胞周期時(shí)細(xì)胞內(nèi)cyclinD1 的含量和活性的高峰均不同[10]。MMP-9 是一種依賴性較強(qiáng)的金屬酶，可有效降解細(xì)胞外基質(zhì)。本研究結(jié)果，非Hp 感染患者胃癌TNM 臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者；cyclinD1 陰性患者與MMP-9 陰性患者中胃癌分期Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度占比均顯著低于cyclinD1 陽性與MMP-9 陽性患者，表明在胃癌中，Hp 感染可明顯促進(jìn)cyclinD1、MMP-9 的表達(dá)，進(jìn)而加快病情進(jìn)展。MMP-9 是一類蛋白水解酶，在正常的生理過程與疾病過程中參與細(xì)胞外基質(zhì)的分解，破壞機(jī)體抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的天然屏障，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。胃癌患者中Hp 自身及其代謝產(chǎn)物在一定程度上具有致癌活性，其可促進(jìn)cyclinD1 基因的激活、擴(kuò)增等，同時(shí)其可通過對(duì)胃黏膜的炎癥損傷進(jìn)行促進(jìn)MMP-9 的表達(dá)，從而加重患者臨床癥狀[11]。本研究中，非HP 感染患者中cyclinD1 陽性、MMP-9 陽性患者均顯著低于Hp 感染患者；Hp 感染與cyclinD1陽性、MMP-9 陽性均呈正相關(guān)，表明胃癌Hp 感染與cyclinD1、MMP-9 表達(dá)水平的關(guān)系密切。

綜上，Hp 感染性胃癌中，cyclinD1、MMP-9 表達(dá)水平較高，且其與Hp 感染均呈正相關(guān)，可為胃癌患者預(yù)后分析提供參考，但本研究樣本量較少，且為單中心研究，因此后期可增加樣本后進(jìn)行多中心、多方面深入研究，以便提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確度。