高脂飼料誘導(dǎo)代謝性疾病動(dòng)物模型

羅建波，李軍暉，王海江，周小玉，曾 濤，周 佳，朱獻(xiàn)軍

（1. 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，成都 610212；2. 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院人類疾病基因研究四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 610072）

為給疾病的治療制定科學(xué)的診療方案，人類疾病動(dòng)物模型常應(yīng)用于前期的理論研究。利用高脂日糧中各養(yǎng)分的缺乏、過量以及比例失衡，觀察疾病發(fā)展過程，以此獲得基礎(chǔ)數(shù)據(jù)[1]。成熟的動(dòng)物模型表現(xiàn)的疾病發(fā)生過程與人類相似，具備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率低、操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性強(qiáng)、成本低廉等特點(diǎn)[2]。近年來，高脂飼料配方被廣泛應(yīng)用于制作代謝性疾病動(dòng)物模型，并取得了大量的研究成果。為給廣大科研人員研究提供理論和實(shí)踐依據(jù)，現(xiàn)對(duì)常見高脂日糧誘導(dǎo)的代謝性疾病模型及其作用方式進(jìn)行綜述。

1 代謝性疾病模型

1.1 高脂血癥

高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中和糖尿病等疾病的主要誘因，常表現(xiàn)為血液中三酰甘油和膽固醇水平異常[3]。誘導(dǎo)該模型的飼料主要以基礎(chǔ)料+ 膽固醇+ 豬油為主。由于大鼠無膽囊結(jié)構(gòu)，缺乏對(duì)飼料中膽固醇等成分的消化能力，因此用大鼠建立的高脂血癥疾病模型中，丙基硫氧嘧啶(0.2%)常被添加進(jìn)造模飼料配方[4]。血清中的總膽固醇、三酰甘油和脂蛋白水平等指標(biāo)變化常被用來反映模型建立情況[5-9]（表1）。血液中的膽固醇和三酰甘油需要以脂蛋白的形式運(yùn)輸?shù)襟w內(nèi)組織進(jìn)行代謝。高熱量和高膽固醇日糧能夠提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟組織中膽固醇的含量，影響脂蛋白受體合成及其表面受體活性，導(dǎo)致血液中膽固醇和三酰甘油的轉(zhuǎn)運(yùn)受阻而不斷在血液中蓄積。

表 1 高脂日糧誘導(dǎo)下的高脂血癥模型Table 1 High-fat diet induced hyperlipidemia animal models

1.2 動(dòng)脈粥樣硬化

當(dāng)機(jī)體發(fā)生代謝異常時(shí)，動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積，纖維基質(zhì)成分和平滑肌的細(xì)胞增殖引起內(nèi)膜灶性纖維性增厚及粥樣斑塊形成，使動(dòng)脈壁變厚，管腔狹窄，最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化形成[10]。誘導(dǎo)該模型的飼料以基礎(chǔ)料+膽固醇+豬油+糖為主[11-14]（表2），并在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前期灌胃維生素D3（7 ×105U/kg）。研究認(rèn)為，大劑量維生素D3 能夠引起動(dòng)脈鈣超負(fù)荷，使血漿脂蛋白易沉積在內(nèi)皮下層，動(dòng)脈發(fā)生鈣化，增加脂質(zhì)對(duì)內(nèi)皮的損傷作用[15]。動(dòng)脈粥樣硬化是發(fā)生在動(dòng)脈壁的一種慢性疾病過程，主要由于炎性細(xì)胞的聚集以及炎性因子的釋放引起[16]。在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病初期，血液中的低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）與單核細(xì)胞在動(dòng)脈中內(nèi)皮細(xì)胞受損的情況下直接進(jìn)入動(dòng)脈壁，血液中的LDL因被氧化，不斷引起單核細(xì)胞趨化，同時(shí)誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化因子-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）產(chǎn)生，促使內(nèi)膜下的單核-巨噬細(xì)胞分化成泡沫細(xì)胞，疾病不斷發(fā)展。在核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）途徑介導(dǎo)下生成的炎性因子、抗氧化酶和黏附分子等進(jìn)一步誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化形成與發(fā)展[17]。

1.3 2 型糖尿病

動(dòng)物機(jī)體自身雖然能夠產(chǎn)生胰島素，但分泌量相對(duì)不足，引發(fā)血糖升高，即產(chǎn)生2 型糖尿病。誘導(dǎo)該模型的飼料以基礎(chǔ)料+膽固醇+豬油為主；為誘導(dǎo)模型的形成，實(shí)驗(yàn)通過高糖高脂飼料喂養(yǎng)2 個(gè)月后，采用腹腔注射的方式，用劑量為30 mg/kg 的亞致病鏈脲佐菌素直接破壞胰島β 細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素分泌異常。2 型糖尿病模型除監(jiān)測(cè)血清中總膽固醇、脂類和脂蛋白等指標(biāo)外，還增加了氧化應(yīng)激指標(biāo)，例如丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性等，并輔以口服葡萄糖耐量試驗(yàn)、肝臟和胰腺切片法觀察模型建立情況[18-20]（表3）。研究認(rèn)為，由氧化應(yīng)激引起的β 細(xì)胞功能受損是引發(fā)2 型糖尿病的核心。在機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激后，促凋亡蛋白Bax 和抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平失衡，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活化作用增強(qiáng)，β 細(xì)胞凋亡數(shù)量上升[21]。同時(shí)，在超量自由基作用下，c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）信號(hào)通路被活化，胰十二指腸同源框因子-1（pancreatic duodenal homeobox-1，PDX-1）活性降低，誘發(fā)細(xì)胞核內(nèi)的PDX-1 移至細(xì)胞質(zhì)，使PDX-1 與胰島素啟動(dòng)子不能結(jié)合，降低胰島素基因表達(dá)和分泌量，動(dòng)物體內(nèi)血糖水平維持功能下降，導(dǎo)致2 型糖尿病發(fā)生[22]。

表 2 高脂日糧誘導(dǎo)的動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化模型Table 2 High-fat diet induced atherosclerosis animal models

表 3 高脂日糧誘導(dǎo)的動(dòng)物2 型糖尿病模型Table 3 High-fat diet inducesd type 2 diabetes animal models

1.4 胰島素抵抗

研究指出，受體部位對(duì)體內(nèi)外胰島素的敏感性下降是直接造成胰島素抵抗的核心機(jī)制。臨床研究認(rèn)為，胰島素抵抗容易引起糖尿病和動(dòng)脈粥樣疾病的發(fā)生率升高，同時(shí)與肥胖和心血管等疾病有密切聯(lián)系[23]。誘導(dǎo)該模型的飼料以基礎(chǔ)料+膽固醇+豬油+糖為主，并可通過增加糖分含量縮短模型建立周期[24-26]（表4）；高脂飼料在制備環(huán)節(jié)中，蛋白質(zhì)、脂肪與碳水化合物充分混合加熱，導(dǎo)致高級(jí)糖化產(chǎn)物（advanced glycation end-products，AGEs）的形成 , 更加有利于該疾病模型的建立[27]。研究認(rèn)為，胰島素抵抗的發(fā)生主要是由于長(zhǎng)期血液中高水平的游離脂肪酸（free fat acid，F(xiàn)FA）引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自由基侵襲、細(xì)胞凋亡和炎性反應(yīng)，使正常的胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)不能實(shí)現(xiàn)，引起胰島素抵抗發(fā)生；其中，信號(hào)途徑c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和核因子-κB 激酶抑制劑/核轉(zhuǎn)錄因子-κB（inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase/nuclear transcription factor-κB，IKK/NF-κB）之間交互作用造成的損傷是FFA 誘發(fā)胰島素抵抗的主要誘因[28]。血液FFA可使胰島素受體的結(jié)構(gòu)因發(fā)生磷酸化而改變，影響正常的酪氨酸磷酸化和磷脂酰肌醇-3 激酶（phosphoinositide 3-kinases，PI3Ks）活性，胰島素信號(hào)通路受阻。此外，活化后的絲氨酸/ 蘇氨酸激酶（serine/threonine kinases，AKT）可以通過調(diào)節(jié)包括糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）在內(nèi)的一系列下游分子而增加糖原生成，同時(shí)叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O 亞族1（forkhead box O1，F(xiàn)oxO1）磷酸化后導(dǎo)致自身功能異常，影響磷酸烯醇式丙酮酸激酶（phosphoenol- pyruvatecarboxy-kinase 1，PCK1）和葡萄糖-6-磷酸酶（glucose 6 phosphatase，G6Pase）在體內(nèi)的糖異生作用，增加胰島素抵抗的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[29]。

表 4 高脂日糧誘導(dǎo)的動(dòng)物胰島素抵抗模型Table 4 High-fat diet induced insulin resistance animal models

1.5 肥胖

動(dòng)物攝入熱量高于消耗熱量，即造成體內(nèi)脂肪過量、分布異常，引發(fā)肥胖癥的發(fā)生[30]，其主要特征為血脂水平的提高以及體質(zhì)量、腹腔脂肪質(zhì)量、Lee’s 指數(shù)改變等[31]，可增加其他代謝性疾病的發(fā)病率[32]。肥胖疾病模型常選擇SD 大鼠、C57BL/6J 小鼠、ICR 小鼠和KM 小鼠[32]。誘導(dǎo)該模型的飼料以基礎(chǔ)料+豬油為主，模型建立時(shí)間為6～8 周[31,33-34]（表5）。研究發(fā)現(xiàn)，在高脂或高脂高糖飼料造模結(jié)果中，由于部分動(dòng)物的采食狀況存在差異，影響營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的建立，因此，動(dòng)物樣本需要加倍，防止因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物數(shù)量不足而影響下一步實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行[35]。高脂飼料誘導(dǎo)后，過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferator activated receptors α，PPARα）和 PPARγ 表達(dá)水平上調(diào)，導(dǎo)致脂蛋白脂肪酶（lipoprtein lipase，LPL）活性提高，三酰甘油解離為FFA 且被脂肪組織大量吸收；在脂肪組織二酰甘油的?；D(zhuǎn)移酶（diacylglycerol acyl-transferase，DGAT）表達(dá)上調(diào)的情況下，機(jī)體中三酰甘油重新貯存。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（sterol-regulatory element binding protein-1c，SREBP-1c）在調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，高脂飼料通過破壞體內(nèi)胰島素和葡萄糖平衡，激活PI3K/AKT/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白1（mammalian target of rapamycin 1，mTORC1）途徑，上調(diào)脂肪代謝和葡萄糖代謝調(diào)控因子SREBP-1c及其下游脂肪合成相關(guān)靶基因如低密度脂蛋白受體基因（low density lipoprotein receptor，LDLR）、乙酰輔A 羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，ACC）和脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)ASN）等的表達(dá)，引起糖脂代謝紊亂和脂肪組織的異位沉積[36]。另一方面，脂肪分解酶如脂肪三酰甘油脂酶（adipose triglyceride lipase，ATGL）、脂肪組織激素敏感脂酶（hormone-sensitive triglayceride lipase，HSL）及三酰甘油水解酶（triacylglycerol hydrolase，TGH）表達(dá)下調(diào)，引起動(dòng)物體質(zhì)增加、腹腔脂肪增多等肥胖疾病的典型癥狀[32]。

表 5 高脂日糧誘導(dǎo)下的動(dòng)物肥胖模型Table 5 High-fat diet induced obesity animal models

1.6 非酒精性脂肪肝

非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種以非飲酒方式作用下引起的肝細(xì)胞病變，高水平的血脂及脂肪過量沉積和胰島素敏感性降低都可誘發(fā)NAFLD 的發(fā)生[37]。誘導(dǎo)該模型的飼料以基礎(chǔ)料+膽固醇+膽鹽+豬油+糖為主[38-41]（表6），除血清常規(guī)指標(biāo)外，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 指標(biāo)也常用于檢測(cè)模型建立情況。研究發(fā)現(xiàn)，高脂日糧誘發(fā)NAFLD 主要是依靠?jī)蓷l途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡：（1）脂肪代謝紊亂。高脂日糧導(dǎo)致肝臟細(xì)胞內(nèi)FFA 持續(xù)積累，引起肝臟中脂肪代謝平衡破壞，降低肝臟組織中脂肪酸β 氧化能力，同時(shí)引起合成或分泌VLDL 的能力下降，減少三酰甘油轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟，導(dǎo)致細(xì)胞脂肪變性，發(fā)生脂肪肝病變，破壞細(xì)胞線粒體的超微結(jié)構(gòu)，造成呼吸鏈因磷酸化發(fā)生障礙，電子傳遞受到干擾，分子氧因獲得電子而攻擊機(jī)體正常細(xì)胞，JNK/Bcl-2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活，細(xì)胞走向凋亡。（2）胰島素通路受阻。高脂日糧不斷刺激機(jī)體分泌胰島素，使其受體底物發(fā)生磷酸化，結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，PI3K 活性下降，導(dǎo)致胰島素敏感性下降，直接引發(fā)線粒體依賴途徑下的細(xì)胞凋亡[42-43]。

2 誘導(dǎo)建模的高脂飼料成分

建模飼料以基礎(chǔ)日糧和高熱量成分為主要構(gòu)成，輔以添加幫助脂肪消化和破壞動(dòng)物特定組織的額外成分，通過調(diào)整各成分比例來滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。

2.1 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧含有促進(jìn)動(dòng)物正常生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需求，其所含的營(yíng)養(yǎng)濃度需要整體考慮營(yíng)養(yǎng)參數(shù)和各成分添加比例，使高脂日糧中各營(yíng)養(yǎng)成分滿足動(dòng)物需要。一般情況下，酪蛋白、蛋黃粉和奶粉可用于補(bǔ)充高脂日糧中的蛋白質(zhì)和氨基酸，磷酸氫鈣和石粉用于補(bǔ)足動(dòng)物鈣和磷等需要，維生素（礦物質(zhì)）添加劑用于補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的維生素（微量元素）需要，不足部分可用玉米淀粉填充。

2.2 膽固醇和膽鹽

在模型飼料中加入膽固醇，提高動(dòng)物體內(nèi)該物質(zhì)水平，引發(fā)炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激，促進(jìn)疾病的形成。因此，為構(gòu)建動(dòng)物模型，膽固醇是模型飼料的重要成分[4]。需要注意的是，膽固醇添加比例過高容易導(dǎo)致腹瀉，造成動(dòng)物死亡，而比例太低時(shí)造模周期長(zhǎng)，不易形成病變，故常用比例建議為5%以下。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼料中的膽鹽雖然可以幫助促進(jìn)脂肪在體內(nèi)的吸收利用，但是膽鹽味苦，會(huì)嚴(yán)重影響動(dòng)物食欲，且易引起體質(zhì)量下降；當(dāng)膽固醇添加量大于2%時(shí)，考慮加入膽鹽，一般添加比例為0.5%。值得注意的是，在小鼠模型飼料中，考慮到小鼠對(duì)膽固醇的消化能力較弱，常在膽固醇含量為1%時(shí)就加入一定比例的膽鹽，以幫助建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中，總膽固醇及LDL水平受飼料中膽固醇及膽鹽的影響，其中飼料成分中膽固醇的作用更大[4]。

2.3 糖類

在高脂高糖飼料配方中，蔗糖和果糖是模型誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵成分。果糖和葡萄糖是具有相同分子式，而結(jié)構(gòu)上有較大差異的兩種化合物，可通過有機(jī)反應(yīng)相互結(jié)合生成蔗糖。蔗糖是由葡萄糖與果糖中功能基團(tuán)通過縮合脫水作用生成，其中蔗糖中的果糖成分在高糖飼料誘導(dǎo)的胰島素抵抗中起主要作用。添加糖類一方面可幫助誘導(dǎo)疾病的發(fā)生和發(fā)展，另一方面則通過改善日糧的適口性，增加動(dòng)物的采食；一般添加比例為20%以下，添加量過高不利于飼料加工成型，同時(shí)糖類成分過多會(huì)破壞配方設(shè)計(jì)中營(yíng)養(yǎng)的整體平衡。有研究者認(rèn)為，長(zhǎng)時(shí)間采食高糖類（蔗糖或果糖）物質(zhì)可以顯著促進(jìn)布勞特菌、羅伊乳桿菌和脆弱擬桿菌增殖，抑制糞腸腸球菌和黃色瘤胃球菌增殖，從而造成腸道菌群紊亂，導(dǎo)致腸道物理屏障作用削弱，提高腸道內(nèi)脂多糖的含量和通透性，脂多糖通過與腸細(xì)胞中Toll 樣受體4 結(jié)合而誘發(fā)NF-κB 途徑激活，提高促炎因子的表達(dá)，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生。此外，上調(diào)的促炎因子可以通過促進(jìn)糖尿病的發(fā)生和發(fā)展，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性降低，產(chǎn)生胰島素抵抗，激活還原型輔酶Ⅱ即煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH），誘導(dǎo)超氧陰離子產(chǎn)生，使機(jī)體進(jìn)一步遭受氧化損傷[44]。

2.4 脂肪

脂肪是機(jī)體重要的供能物質(zhì)。飼料中脂肪的加入能夠保證能量和必需脂肪酸的供給，也可幫助溶解飼料中的脂溶性物質(zhì)；然而，該物質(zhì)超過動(dòng)物正常需要量時(shí)，會(huì)直接導(dǎo)致血脂水平異常，引發(fā)心血管和肥胖等疾病，造成機(jī)體代謝異常，使自由基產(chǎn)生量超過機(jī)體清除能力，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生[45]。誘導(dǎo)疾病模型的飼料中常添加的脂肪源有豬油、棕櫚油和椰子油等，理論上飼料中脂肪含量越高越有利于疾病模型的建立，但當(dāng)脂肪比例大于20% 時(shí)，加工工藝的要求會(huì)增高，不利于實(shí)驗(yàn)飼料制備、儲(chǔ)存及定量飼喂。而且，飼料中過高比例的脂肪會(huì)直接降低動(dòng)物采食量，故一般添加比例建議不高于20%[45]。

豬油是一種飽和高級(jí)脂肪酸，外形為黃色、半透明液體狀。研究認(rèn)為，過量食用飽和脂肪會(huì)引發(fā)肝內(nèi)三酰甘油水平升高，導(dǎo)致脂肪酸在肝臟中蓄積，促進(jìn)膽固醇合成，誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生過量自由基，造成線粒體功能受損和胰島素抵抗[46]。棕櫚油含有豐富的棕櫚酸，飲食中高濃度的棕櫚油會(huì)對(duì)肝臟產(chǎn)生毒性作用，主要表現(xiàn)在細(xì)胞放射狀結(jié)構(gòu)的喪失和細(xì)胞體積的縮小，隨即細(xì)胞遭受不可逆損傷。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型中，高濃度棕櫚酸會(huì)直接作用于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，破壞細(xì)胞器穩(wěn)態(tài)，即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[47]。中鏈脂肪酸和長(zhǎng)鏈脂肪酸是椰子油中的主要脂肪形式。研究認(rèn)為，與長(zhǎng)鏈脂肪酸吸收不同的是，中鏈脂肪酸的吸收可通過腸道進(jìn)入血液，而不需要膽汁酸參與，因此中鏈脂肪酸更容易被機(jī)體利用，可在維持動(dòng)物體質(zhì)量的基礎(chǔ)上，減少體內(nèi)脂質(zhì)的大量蓄積，讓血液生化指標(biāo)保持正常水平，維持機(jī)體正常的脂質(zhì)代謝[48]。

3 高脂飼料的儲(chǔ)存

由于造模飼料含有較高脂肪，飼料在儲(chǔ)存過程中易發(fā)生氧化酸敗，生成醛、酮、酮酸等物質(zhì)，降低飼料的適口性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[49]。動(dòng)物攝入氧化酸敗的飼料后，氧化產(chǎn)物進(jìn)入細(xì)胞膜，體內(nèi)吞噬細(xì)胞為消滅異物，會(huì)產(chǎn)生大量自由基，損害生物細(xì)胞功能，造成動(dòng)物氧化應(yīng)激。因此，與普通飼料相比，高脂飼料的存儲(chǔ)條件更為苛刻。高脂飼料一般對(duì)溫度、光線和氧氣敏感，因此飼料需采用外包裝隔絕光照，同時(shí)抽盡包裝內(nèi)部空氣，并采用60Co 輻照滅菌。由于模型建立的實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，建議以1 個(gè)月的使用量為準(zhǔn)，分批定制造模飼料，并存儲(chǔ)于－4 ℃條件下；在使用前，需將帶包裝的飼料置于常溫下，達(dá)到室溫后，方可開始飼喂，以降低動(dòng)物消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

4 疾病模型的評(píng)估

疾病模型的建立需要花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，也是許多研究的前期基礎(chǔ)工作，因此為確保實(shí)驗(yàn)順利實(shí)施，從制定配方到進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都需要嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范，并全面評(píng)估各個(gè)環(huán)節(jié)。（1）模型飼料的營(yíng)養(yǎng)參數(shù)評(píng)估。在確定模型建立方向的前提下，對(duì)高脂飼料中各添加物質(zhì)的功能進(jìn)行綜合考量，同時(shí)對(duì)飼料中各項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)素的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行仔細(xì)分析，從而構(gòu)建營(yíng)養(yǎng)過載或缺乏的動(dòng)物模型配方。此外，在添加其他成分的前提下，某些營(yíng)養(yǎng)素含量被稀釋，因此應(yīng)該額外補(bǔ)足各自特定的基礎(chǔ)飼料營(yíng)養(yǎng)成分。實(shí)驗(yàn)開始前，需要按照飼料檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確測(cè)定各項(xiàng)參數(shù)的實(shí)際數(shù)值，與理論值進(jìn)行核對(duì)。（2）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程的評(píng)估。模型建立前期，需要逐步添加高脂飼料，避免營(yíng)養(yǎng)應(yīng)激對(duì)動(dòng)物造成影響。模型建立過程中，及時(shí)清除動(dòng)物食槽內(nèi)的剩余飼料；另外，高脂飼料由于脂肪比例較高，長(zhǎng)期暴露空氣中容易引發(fā)酸敗變質(zhì)，動(dòng)物采食后易引起腹瀉，因此，加料不宜過量。模型建立后期，動(dòng)物由于肥胖、高血糖和糖尿病等，會(huì)出現(xiàn)一系列病變，需加強(qiáng)對(duì)微生物的控制，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受其他因素的影響。（3）疾病特異性指標(biāo)評(píng)估。評(píng)價(jià)模型建立效果，不能僅僅只依據(jù)動(dòng)物生理生化參數(shù)是否達(dá)到要求，還要考慮疾病的進(jìn)程。例如，高脂血癥和脂肪肝都能夠引起血脂升高，單從血脂指標(biāo)來判斷動(dòng)物疾病模型的建立狀況顯然不夠充分，需要進(jìn)一步對(duì)肝臟進(jìn)行病理切片，進(jìn)一步明確模型階段，綜合考慮機(jī)體的整體反應(yīng)。

5 小結(jié)

以基礎(chǔ)料+豬油+糖+膽固醇+膽酸為主要成分而配制的高脂飼料，可根據(jù)疾病模型、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、造模周期和營(yíng)養(yǎng)需求，調(diào)整飼料中各成份的比例，同時(shí)考慮加入丙基硫氧嘧啶或注射維生素D3 等額外輔助手段，達(dá)到建立動(dòng)物模型的預(yù)期。在擬定新的造模飼料配方時(shí)，可結(jié)合高脂誘導(dǎo)的疾病模型建立機(jī)制，參考實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的代謝規(guī)律，考慮實(shí)驗(yàn)時(shí)間和造模周期，篩選出符合自身實(shí)驗(yàn)研究目的的高脂飼料配方，從而提高建模的成功率和有效性，為研究相關(guān)疾病提供理論基礎(chǔ)。