急性白血病患者紅細胞生成素及EPOR的表達及其臨床意義

董奎良，姚洋，劉嬌媛

（大石橋市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 營口 115100）

急性白血病屬于臨床中發(fā)生率較高的一種血液系統(tǒng)腫瘤，是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病，臨床主要表現(xiàn)為白血病細胞出現(xiàn)異常增殖，凋亡受到阻礙，抑制正常造血[1]?；熓乾F(xiàn)階段臨床治療急性白血病的主要方式，但臨床治療效果不佳，具有較高的復發(fā)率和死亡率[2]。有研究[3]結(jié)果顯示，急性白血病的發(fā)生、發(fā)展與基因和相關(guān)信號通路異常密切相關(guān)。本研究主要分析急性白血病患者紅細胞生成素（EPO）及紅細胞生成素受體（EPOR）的表達及其臨床意義，以期為急性白血病的防治提供指導，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2018年2月至2019年7月收治的急性白血病患者80例，其中急性髓系白血病患者（AML組）與急性淋巴細胞白血病（ALL組）各40例，并選擇同期收治的40例非血液系統(tǒng)疾病患者作為對照組。AML 組男28 例，女12例；年齡3～44 歲，平均（21.2±2.3）歲。ALL 組男 25 例，女15例；年齡4～43歲，平均（20.6±2.7）歲。對照組男23例，女17例；年齡8～52歲，平均（20.3±3.1）歲。3組臨床資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。納入標準：急性白血病患者均滿足相關(guān)的診斷標準；肝腎功能無異常；患者知情同意并簽署知情同意書；本研究經(jīng)本院倫理協(xié)會審核批準。排除標準：凝血功能異常者；精神疾病者；意識障礙者；嚴重肝腎功能異常者。

1.2 方法 ①選擇ELISA法對骨髓血漿中的EPO、EPOR水平進行檢測：收集研究對象骨髓上清液，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，根據(jù)ELISA試劑盒操作步驟開展相關(guān)檢測。②采用RTPCR法檢測EPO、EPOR的mRNA表達水平：收集研究對象骨髓沉淀，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，根據(jù)RNAis Plus操作步驟提取骨髓RNA，檢測其濃度，選擇TaKaRa Prime seripttm RT reagen tKit逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量PCR法檢測mRNA水平。③采用Westernblot法檢測EPO、EPOR蛋白表達水平：收集研究對象骨髓沉淀，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，采用BCA法測定蛋白濃度，配制濃度為5%的濃縮膠和濃度為10%的SDS-PAGE 分離膠，50 μg 蛋白上樣電泳，轉(zhuǎn)至 0.2 μm PVDF膜，選擇濃度為5%的脫脂奶粉在室溫下封閉2 h，一抗4 ℃孵育過夜，然后進行洗膜處理，二抗室溫孵育1 h，然后選擇ECL顯影曝光。

1.3 觀察指標 比較AML 組、ALL 組和對照組骨髓血漿中EPO、EPOR水平及其mRNA、蛋白水平表達情況。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以“”表示，比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組骨髓血漿中 EPO、EPOR 水平比較 ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO表達明顯高于對照組，EPOR表達明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；ALL組、AML組骨髓血漿中的EPO、EPOR表達比較差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 3組骨髓血漿中EPO、EPOR水平表達比較（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

表1 3組骨髓血漿中EPO、EPOR水平表達比較（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

注：與對照組比較，aP＜0.05

組別ALL組AML組對照組EPOR表達（ng/mL）1.61±0.48a 1.59±0.87a 8.43±1.24例數(shù)40 40 40 EPO表達（pg/mL）830.34±261.44a 940.24±330.96a 486.28±57.15

2.2 3 組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA 水平比較 ALL組、AML組骨髓血漿中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平均明顯高于對照組（P＜0.05）；ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

2.3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達比較 ALL組、AML 組骨髓血漿中EPO、EPOR 蛋白水平表達明顯高于對照組（P＜0.05）；而ALL 組、AML 組骨髓血漿中EPO、EPOR 蛋白水平表達比較差異無統(tǒng)計學意義，見表3。

表2 3組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

表2 3組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

注：與對照組比較，aP＜0.05

EPOR mRNA 2.76±1.73a 3.02±1.33a 0.81±0.25組別ALL組AML組對照組例數(shù)40 40 40 EPO mRNA 3.86±1.17a 4.09±1.76a 0.84±0.14

表3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達比較（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

表3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達比較（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

注：與對照組比較，aP＜0.05

EPOR蛋白水平表達2.35±0.92a 3.35±1.08a 0.44±0.05組別ALL組AML組對照組例數(shù)40 40 40 EPO蛋白水平表達1.46±0.25a 1.42±0.26a 0.72±0.18

3 討論

本研究結(jié)果顯示，急性白血病患者EPO、EPOR 均呈高表達，與焦楨等[4]研究結(jié)果一致。白血病患者骨髓中的白血病細胞增殖現(xiàn)象較顯著，機體處于持續(xù)缺氧狀態(tài)，導致EPO、EPOR分泌出現(xiàn)異常增加；同時，EPO/EPOR參與的JAK/STAT信號通路被激活，導致白血病細胞出現(xiàn)無線增值，而有關(guān)其具體的作用機制還應深入探討[5-6]。相關(guān)研究結(jié)果顯示，在前列腺癌、膀胱移行癌、卵巢癌等腫瘤患者也存在EPO、EPOR高表達；同時，與分級、預后、危險度密切相關(guān)，患者惡性程度越嚴重，表示患者局部缺氧現(xiàn)象越明顯，EPO分泌也越顯著[7-8]。以上結(jié)果表明，通過檢測EPO、EPOR 表達可對急性白血病患者的預后進行判斷。

本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO表達明顯升高（P＜0.05）；ALL組、AML組骨髓血漿中的EPOR 表達明顯降低（P＜0.05）。急性白血病患者EPOR信號通路中的JAK/STAT 途徑表現(xiàn)為持續(xù)活化狀態(tài)，導致大量的EPOR轉(zhuǎn)入到細胞內(nèi)，參與到基因調(diào)控中，進而減少血漿中的表達量，然而該論點還應通過深入研究進一步論證[9-10]。

綜上所述，急性白血病患者的EPO、EPOR呈高表達，可根據(jù)EPO、EPOR表達量對患者預后進行判斷。