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    規(guī)模化羊場(chǎng)支原體感染的流行病學(xué)調(diào)查

    2021-03-01 13:16:40王雅雯李仕林姜水兵郭良帥努爾麥麥提麥麥提敏焦海宏
    現(xiàn)代畜牧獸醫(yī) 2021年2期
    關(guān)鍵詞:羊場(chǎng)綿羊規(guī)?;?/a>

    王雅雯,李仕林,姜水兵,郭良帥,努爾麥麥提·麥麥提敏,焦海宏

    (塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,新疆 阿拉爾843300)

    綿羊肺炎支原體(Mycoplasmasheep pneumoniae)是由綿羊支原體(Mycoplasma ovis,MO)引起的具有傳染性的典型性肺炎[1-3]。綿羊和山羊均可感染支原體,且羔羊的發(fā)病率和死亡率較高,成為危害養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。支原體肺炎臨床癥狀表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、腹式呼吸、漸進(jìn)性消瘦及增生性、化膿性肺炎。單純由綿羊支原體引起的綿羊肺炎支原體通常呈慢性肺炎,早期大多數(shù)病羊沒(méi)有明顯臨床癥狀,當(dāng)與其他病原體交叉感染或發(fā)生應(yīng)激時(shí)會(huì)出現(xiàn)常見(jiàn)的肺炎感染癥狀,感染率和死亡率較高[4]。研究表明,綿羊支原體不僅在患病羊的肺中可以分離得到,在健康羊的肺中也可分離得到[5-8]。

    近幾年,國(guó)內(nèi)部分省先后開(kāi)展區(qū)域性綿羊支原體感染的流行病學(xué)調(diào)查。綿羊支原體本身并不會(huì)對(duì)宿主機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p害,通常只是慢性肺炎,只有在繼發(fā)性感染其他病原體或發(fā)生應(yīng)激時(shí)才會(huì)導(dǎo)致病情發(fā)展成常見(jiàn)的肺炎感染癥狀[9]。綿羊支原體對(duì)山羊和綿羊有很強(qiáng)的致病性,綿羊感染后發(fā)病率很高。近年來(lái),此病的死亡率不斷上升,嚴(yán)重威脅著綿羊和山羊的生產(chǎn)效率,可為羊養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    規(guī)?;驁?chǎng)采集羊血液樣品169份;烏什某規(guī)?;驁?chǎng)病羊組織樣品2份;某規(guī)模化羊場(chǎng)羊血清DNA樣本15份;塔里木大學(xué)試驗(yàn)站的疑似病例鼻拭子2份、病死羊1只。

    1.2 試驗(yàn)試劑

    TE緩 沖 液、2XPowerTaqPCRMasterMix、D2000、GeneGreen核酸染料購(gòu)自北京天根生物工程有限公司;DNAzolReagent購(gòu)自美國(guó)英杰生命技術(shù)有限公司;羊支原體抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳市豫崧生物技術(shù)有限公司。

    1.3 分子鑒定

    根據(jù)患病羊的流行病學(xué)資料、臨床癥狀和解剖病理變化等,初步判斷為支原體感染。根據(jù)參考文獻(xiàn)[10]中的已知引物序列進(jìn)行分析驗(yàn)證,合成支原體屬綿羊支原體檢測(cè)引物。lmf:GACTTCATCCTGCACTCTGT;lmr:TGAACGGAATATGTTAGCTT,產(chǎn)物長(zhǎng)度361 bp,由北京華大基因進(jìn)行合成。使用DNAzol Reagent提取疑似發(fā)病羊的肺臟、脾臟、鼻拭子樣品的DNA,具體操作步驟均參考說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以提取的DNA為模板,采用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系(25μL):2×Power Taq PCR MasterMix12.5μL、去離子水9.5μL、提取DNA 2μL、上下游引物各0.5μL。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min;95℃變性30 s,55℃退火40 s,72℃延伸50 s,72℃延伸5 min,35個(gè)循環(huán),4℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物在2%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳,電泳完成后在凝膠成像儀中觀察結(jié)果。

    1.4 血清抗體監(jiān)測(cè)

    對(duì)規(guī)?;驁?chǎng)的羊血清進(jìn)行羊支原體抗體檢測(cè),檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。試驗(yàn)建立的前提條件為陰性對(duì)照(N)OD值<0.2,且陽(yáng)性對(duì)照(P)OD值>0.5。判定標(biāo)準(zhǔn):S/P值=樣品OD值/陽(yáng)性對(duì)照OD平均值,S/P值≥0.4則為陽(yáng)性;S/P值<0.4則為陰性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 解剖病理變化

    病羊病理變化主要為肺泡充血、病變部位肺容積增大、斷面光滑、肺放入水中不下沉、肺組織變軟。

    2.2 支原體病原學(xué)檢查結(jié)果(見(jiàn)圖1)

    圖1 綿羊支原體基因片段PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 PCR amplification result of Mycoplasma ovis gene fragments

    支原體病原學(xué)檢查結(jié)果陽(yáng)性樣品4個(gè),其中烏什綿羊場(chǎng)1個(gè);某規(guī)?;驁?chǎng)3個(gè),陽(yáng)性率為26.67%(4/15);試驗(yàn)站疑似病例未檢出。

    由圖1可知,4份陽(yáng)性樣品基因片段均在361 bp,與支原體通用引物基因片段一致。

    2.3 綿羊支原體肺炎血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)表1)

    表1 綿羊肺炎支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Serological test results of Mycoplasma sheep pneumoniae

    由表1可知,阿拉爾市陽(yáng)性率為58.82%;沙雅縣陽(yáng)性率為84.00%;民豐縣陽(yáng)性率為48%;策勒縣陽(yáng)性率為50.00%;烏什縣42.11%,5個(gè)縣合計(jì)陽(yáng)性率為52.07%。

    3 討論

    綿羊肺炎支原體是綿羊養(yǎng)殖過(guò)程中常見(jiàn)的呼吸道傳染病之一,對(duì)養(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展造成極大的影響.長(zhǎng)期以來(lái),我國(guó)對(duì)綿羊肺炎支原體沒(méi)有得到較好的控制。該病原可長(zhǎng)期存在動(dòng)物體內(nèi),難以及時(shí)發(fā)現(xiàn),當(dāng)出現(xiàn)明顯的臨床癥狀時(shí)往往發(fā)病較為嚴(yán)重,易造成死亡。

    本次試驗(yàn)通過(guò)使用PCR和ELISA方法檢測(cè)規(guī)?;驁?chǎng)進(jìn)行綿羊支原體。PCR檢測(cè)的陽(yáng)性率為26.67%。經(jīng)序列對(duì)比后發(fā)現(xiàn),本試驗(yàn)的PCR產(chǎn)物與NCBI公布的1株美國(guó)肺炎支原體分離株和1株土耳其綿羊肺炎支原體分離株同源性為100%。分子生物學(xué)證明本試驗(yàn)檢測(cè)到的為綿羊肺炎支原體。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,南疆各規(guī)?;驁?chǎng)綿羊肺炎支原體的陽(yáng)性率為52.07%。烏什縣某規(guī)模化羊廠中有7份樣品的S/P值大于1,經(jīng)過(guò)臨床觀察該7只羊都有明顯的呼吸道癥狀,表明樣品的S/P值大于1,臨床上會(huì)出現(xiàn)明顯羊支原體肺炎的癥狀,而其他羊存在著支原體感染,只是在臨床上未表現(xiàn)出來(lái)。

    剡文亮等[11]研究表明,新疆5個(gè)地區(qū)的規(guī)?;驁?chǎng)的羔羊血清綿羊支原體抗體陽(yáng)性率為46.66%~100.00%,表明5個(gè)地區(qū)的羊場(chǎng)都被綿羊支原體感染;山羊肺炎支原體抗體陽(yáng)性率為19.05%~58.33%,說(shuō)明山羊肺炎支原體抗體和抗原陽(yáng)性低于綿羊支原體陽(yáng)性率。吳錦艷等[12]研究表明,國(guó)內(nèi)部分地區(qū)羊血清中綿羊支原體陽(yáng)性率為31.92%,山羊支原體山羊肺炎亞種陽(yáng)性率為10.67%,說(shuō)明我國(guó)養(yǎng)羊地區(qū)大多都存在羊支原體肺炎的感染。

    4 結(jié)論

    本試驗(yàn)結(jié)果表明,PCR檢測(cè)的陽(yáng)性率為26.67%。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,南疆各規(guī)?;驁?chǎng)綿羊肺炎支原體的陽(yáng)性率為52.07%。結(jié)果提示,羊場(chǎng)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和本病的防控。

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