生山楂、制何首烏、決明子提取物對(duì)高脂血癥模型大鼠調(diào)脂作用的初步研究

馮翠娟，王 信，田衛(wèi)東，李 靜

（1.甘肅衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州市第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730046；3.甘肅寶石花醫(yī)院，甘肅 蘭州 730060）

高脂血癥可嚴(yán)重危害人們的健康，近些年備受關(guān)注，成為國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。隨著乙肝疫苗的普遍接種以及丙肝標(biāo)準(zhǔn)化治療的實(shí)施，高脂血癥已成為未來(lái)肝病學(xué)發(fā)展的主要方向[1-7]。生山楂、制何首烏和決明子是用于高脂血癥治療的常用藥對(duì)，在中國(guó)藥典2015年版一部成方制劑中，被血脂寧丸、血脂靈片、脂脈康膠囊組方所包含，在群眾中也有大量食療應(yīng)用。為了進(jìn)一步研究生山楂、制何首烏、決明子藥對(duì)在治療高脂血癥方面的作用，本文以生山楂、制何首烏、決明子提取物對(duì)高脂血癥模型大鼠脂代謝的影響做了相關(guān)研究，以期為進(jìn)一步研究提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性 Wistar大鼠 64只，體重（190±20）g，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供，使用許可證號(hào)：SYXK（甘）2015-0005。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

1.2.1 受試藥物 山楂、何首烏、決明子藥材飲片均購(gòu)自蘭州復(fù)興厚藥材有限責(zé)任公司，經(jīng)檢驗(yàn)為合格飲片。以上飲片按照4∶5∶4（日常用量），經(jīng)煎煮濃縮干燥制成提取物。

1.2.2 陽(yáng)性對(duì)照藥 血脂康膠囊，0.3 g/粒，由北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950029（批號(hào)：20160107），人臨床用量為1.2 g/日。

1.2.3 高脂飼料配制 本實(shí)驗(yàn)用高脂飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司按基礎(chǔ)飼料+10%豬油+10%蛋黃粉+1%膽固醇+0.2%膽酸鈉配方加工，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0010。

1.3 主要試劑

總膽固醇試劑盒（TC，96T，批號(hào)：40927）、甘油三酯試劑盒（TG，96T，批號(hào)：20161014）、低密度脂蛋白膽固醇試劑盒（LDL-C，96T，批號(hào)：20161011）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（HDL-C，96T，批號(hào)：20161012）。AST 檢測(cè)試劑盒（96T，20161014）、ALT檢測(cè)試劑盒（96T，20161014）、SOD 檢測(cè)試劑盒（96T，20161010）及MDA檢測(cè)試劑盒（96T，20161012）均為南京建成生物工程有限公司產(chǎn)品。蘇木素-伊紅染色試劑盒為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.4 儀器和設(shè)備

JYI001電子天平，上海精密儀器有限公司；TDLSO-2B離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；752型紫外可見(jiàn)光柵分光光度計(jì)，北京光學(xué)儀器廠；AU680全自動(dòng)生化檢測(cè)儀，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組

普通環(huán)境飼養(yǎng)條件，溫度：18℃～29℃，日溫差≤4℃，相對(duì)濕度：40%～70%，換氣次數(shù)：8～10 次/h，氣流速度：0.1～0.2 m/s，噪聲≤50 dB，自然光照；每日自由取水，自由采食。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物先在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)7天，然后正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。將大鼠分為6組：正常組，模型組，生山楂、制何首烏、決明子提取物（簡(jiǎn)稱(chēng)SZJ提取物）大劑量組、中劑量組、小劑量組，血脂康組。

2.2 造模評(píng)價(jià)指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，64只大鼠分為正常組和模型組，正常組（12只）給予基礎(chǔ)飼料，而其余（52只）大鼠均從基礎(chǔ)飼料改為高脂飼料，均自由飲水。各組動(dòng)物喂養(yǎng)4周后，禁食12 h，各取2只大鼠，眼眶取血測(cè)定血脂。結(jié)果高脂飼料大鼠血清中TC、TG與正常組比較，差異有顯著性（P＜0.01），并通過(guò)肝臟組織切片的病理學(xué)觀察，表明Wistar大鼠高脂血癥模型造模成功。

2.3 管理與給藥

2.3.1 分組 （1）正常組10只（基礎(chǔ)飼料+生理鹽水）；（2）模型組10只（高脂飼料+生理鹽水）；（3）SZJ大劑量組10只（高脂飼料+SZJ提取物大劑量，1.434 0 g/kg·d）；（4）SZJ中劑量組 10 只（高脂飼料+SZJ提取物中劑量，0.717 0 g/kg·d）；（5）SZJ小劑量組 10 只（高脂飼料+SZJ提取物小劑量，0.358 5 g/kg·d）；（6）血脂康組10只（高脂飼料+血脂康膠囊，0.096 0 g/kg·d）。

2.3.2 動(dòng)物喂養(yǎng) 方法如上，實(shí)驗(yàn)造模成功后，正常組給予基礎(chǔ)飼料，其余各組動(dòng)物繼續(xù)喂以高脂飼料，自由飲水。藥物劑量：SZJ提取物劑量根據(jù)一般成人臨床用量（0.80 g/kg），按照體表面積換算，得到大鼠等效劑量（0.358 5 g/kg·d），分別按其1倍、2倍和4倍設(shè)定大、中、小3個(gè)劑量。血脂康膠囊的劑量根據(jù)一般成人臨床用量（1.20 g/日·人，相當(dāng)于0.02 g/kg），按體表面積換算給藥，即0.096 0 g/kg。給藥方法：正常組、模型組給予等體積生理鹽水；SZJ提取物大、中、小劑量組分別給予相應(yīng)劑量的混懸液；血脂康組給予血脂康膠囊混懸液。所有大鼠均給藥2 mL，各組大鼠每日灌胃一次，連續(xù)8周。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 體重 實(shí)驗(yàn)期間每日稱(chēng)取剩余飼料量，比較各組大鼠平均進(jìn)食量、活動(dòng)及毛發(fā)等情況。每周測(cè)量大鼠體重一次，以比較各組大鼠體重變化情況。

2.4.2 大鼠血清生化指標(biāo)的測(cè)定（1）血樣標(biāo)本采集。所有大鼠在藥物實(shí)驗(yàn)8周停喂飼料，禁食12 h，采用乙醚吸入式麻醉，在大鼠腹部做切口打開(kāi)腹腔，暴露腹主動(dòng)脈，用注射器進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血4～5 mL，放于試管靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，收集于EP管中，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。?）血清生化指標(biāo)測(cè)定方法。所有指標(biāo)均采用貝克曼AU680全自動(dòng)生化檢測(cè)儀進(jìn)行測(cè)定，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0 for Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 給藥前后各組大鼠體重的比較（見(jiàn)表1）

由表1可見(jiàn)，非酒精性高脂血癥模型組大鼠給藥前后體重增重與正常組比較，差異具有顯著性（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)?zāi)?，各藥物治療組大鼠與模型組比較，體重增重明顯減少（P＜0.05）。而各藥物治療組大鼠體重增加與正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 給藥前后各組大鼠體重的比較（±s，g）

表1 給藥前后各組大鼠體重的比較（±s，g）

注：與模型組均值比較，*P＜0.05

組別n 體重增重4周1 0周正常組模型組S Z J提取物大劑量組S Z J提取物中劑量組S Z J提取物小劑量組血脂康組1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 2 1 8.3±1 6.4 2 4 0.0±1 8.2 2 3 5.4±1 7.8 2 3 9.3±1 6.6 2 3 0.9±1 9.8 2 2 9.7±1 7.5 2 9 6.7±2 9.7 3 5 3.5±4 5.1 2 9 5.1±2 8.6 2 8 6.3±1 9.4 3 0 7.7±2 7.5 3 1 2.3±2 6.6 7 8.4*1 1 3.5 5 9.7*4 7.0*7 6.8*8 2.6*

3.2 SZJ提取物對(duì)肝指數(shù)的影響

與正常組比較，模型組肝指數(shù)升高較為明顯（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組肝指數(shù)明顯降低（P＜0.05）；SZJ提取物大、中劑量組肝指數(shù)較血脂康組降低更明顯（P＜0.05），SZJ提取物小劑量組肝指數(shù)與血脂康組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組肝指數(shù)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)藥物有劑量依賴(lài)性，SZJ提取物大、中劑量組療效較小劑量組好，見(jiàn)表2。

表2 SZJ提取物對(duì)肝指數(shù)的影響（±s）

表2 SZJ提取物對(duì)肝指數(shù)的影響（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，※P＜0.05

組別n 肝指數(shù)正常組模型組SZJ提取物大劑量組SZJ提取物中劑量組SZJ提取物小劑量組血脂康組10 10 10 10 10 10 2.81±0.29#△4.03±0.26*△3.05±0.38*#△※3.36±0.60*#△※3.72±0.35*#※3.60±0.32*#

3.3 大鼠血清生化指標(biāo)測(cè)定

3.3.1 正常組與高脂飼料各組血脂水平比較 喂養(yǎng)4周后，高脂飼料各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清TC、TG水平與正常組比較，均有顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明Wistar大鼠非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型造模成功，見(jiàn)表3。

表3 喂養(yǎng)4周后大鼠血脂變化（±s，mmol/L）

表3 喂養(yǎng)4周后大鼠血脂變化（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05

組別TG正常組高脂飼料各組TC 0.62±0.06 1.09±0.22*1.83±0.15 2.45±0.19*

3.3.2 SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血脂相關(guān)指標(biāo)的影響（1）SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響。與正常組比較，模型組大鼠血清 TC、TG顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組 TC、TG 均降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大劑量組TC的含量降低（P＜0.05），其余SZJ劑量組TC、TG降低作用不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，大劑量組TC、TG降低明顯（P＜0.05），略顯劑量依賴(lài)性，見(jiàn)表4。

表4 SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響（±s，mmol/L）

表4 SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠TC、TG的影響（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物中、小劑量組比較，※P＜0.05

組別n T G正常組模型組S Z J提取物大劑量組S Z J提取物中劑量組S Z J提取物小劑量組血脂康組1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 T C 0.5 7 1±0.0 8 6#0.9 8 4±0.1 3 7*0.6 0 7±0.1 4 3*#△※0.7 5 2±0.1 7 6*#△0.7 4 7±0.0 8 6*#△0.7 0 3±0.1 2 9*#1.9 2 3±0.0 4 6 2.4 3 5±0.5 7 3*1.8 9 1±0.2 4 8#△※2.2 3 2±0.1 9 6*△2.1 4 9±0.2 0 8*△1.5 3 7±0.1 1 2*#

（2）SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響。與正常組比較，模型組大鼠血清 HDL-C降低、LDL-C升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中劑量組LDL-C降低（P＜0.05），SZJ提取物 3個(gè)劑量組 HDL-C 升高（P＜0.05）；與血脂康組相比，SZJ提取物大劑量組的HDL-C升高（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組對(duì)LDL-C降低程度不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，對(duì)LDL-C、HDL-C含量影響有劑量依賴(lài)性，大、中劑量組療效較小劑量組好，見(jiàn)表5。

表5 SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響（±s，mmol/L）

表5 SZJ提取物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠脂蛋白的影響（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n LDL-C HDL-C正常組模型組SZJ提取物大劑量組SZJ提取物中劑量組SZJ提取物小劑量組血脂康組10 10 10 10 10 10 0.502±0.214#△1.225±0.415*△0.917±0.495*#△※0.985±0.261*#△※1.362±0.192*#△0.699±0.580*#1.808±0.108#△0.925±0.115*△1.385±0.073*#△※1.132±0.231*#※1.093±0.159*#1.212±0.089*#

（3）SZJ提取物對(duì)血清SOD和MDA的影響。與正常組比較，模型組血清SOD降低、MDA升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組 SOD 顯著升高（P＜0.05），SZJ提取物大、中劑量組MDA降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大劑量組 SOD 水平升高（P＜0.05），MDA 水平降低（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組在升高 SOD、降低MDA方面對(duì)藥物有劑量依賴(lài)性，大、中劑量組療效較小劑量組要好，見(jiàn)表6。

表6 SZJ提取物對(duì)血清SOD和 MDA的影響（±s）

表6 SZJ提取物對(duì)血清SOD和 MDA的影響（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）正常組10212.34±25.14#△4.78±0.92#模型組10128.61±18.67*△5.92±0.95*△SZJ提取物大劑量組10168.45±16.07*#△※4.57±1.15#△※SZJ提取物中劑量組10155.31±8.17*#※5.19±1.28#※△SZJ提取物小劑量組10144.08±19.26*#△5.70±1.31*△血脂康組10151.62±19.33*#4.74±1.29#

（4）SZJ提取物對(duì)肝功能的影響。與正常組比較，模型組血清 ALT和AST均升高（P＜0.05）；與模型組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組的ALT和AST明顯降低（P＜0.05）；與血脂康組比較，SZJ提取物大、中、小劑量組ALT的含量明顯降低（P＜0.05），SZJ提取物各組降 AST 作用不及血脂康組（P＜0.05）；SZJ提取物大、中、小劑量組間比較，三者血清ALT和AST的降低對(duì)藥物有劑量依賴(lài)性，見(jiàn)表7。

表7 SZJ提取物對(duì)肝功能的影響（±s，U/L）

表7 SZJ提取物對(duì)肝功能的影響（±s，U/L）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與血脂康組比較，△P＜0.05；與SZJ提取物小劑量組比較，※P＜0.05

組別n AST ALT正常組10169.26±17.28#△25.312±3.128#△模型組10240.17±29.33*△60.071±18.753*△SZJ提取物大劑量組10201.75±51.84*#△※33.513±12.501*#△※SZJ提取物中劑量組10209.97±38.06*#△※39.207±8.994*#△※SZJ提取物小劑量組10225.36±41.88*#△44.182±11.875*#△血脂康組10189.18±19.13*#47.631±11.640*#

4 討論

（1）一般狀態(tài)觀察。正常組大鼠精神狀態(tài)良好，活潑好動(dòng)，皮毛光澤色白，進(jìn)食及大便正常。實(shí)驗(yàn)早期高脂飼料各組部分大鼠出現(xiàn)腹瀉、納食減少，7天后逐漸恢復(fù)正常；實(shí)驗(yàn)后期模型組大鼠體毛暗淡無(wú)光澤、蓬松，精神萎靡，食欲減退，行動(dòng)遲緩，部分出現(xiàn)稀便，說(shuō)明血脂升高后機(jī)體會(huì)出現(xiàn)脾氣虛的表現(xiàn)；后期血脂康組部分出現(xiàn)軟便；后期SZJ提取物各劑量組與模型組比較，活動(dòng)、精神、體毛、大便基本正常。實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠均無(wú)死亡。（2）生山楂、制何首烏、決明子提取物能夠調(diào)節(jié)血脂代謝，顯著降低 TC、LDL-C、MDA、ALT 和肝指數(shù)，升高 HDL-C、SOD，使肝細(xì)胞脂肪變明顯減輕，具有防治非酒精性高脂血癥并保護(hù)肝臟的作用，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。（3）在選擇陽(yáng)性對(duì)照組藥物時(shí)，我們選擇了血脂康膠囊，因?yàn)樗鳛閲?guó)家藥品基本目錄中的唯一純中藥降血脂制劑，主要起效成分為洛伐他汀及其類(lèi)似物，以其作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，既比較了中藥和西藥在治療方面各自的特征，又能為降血脂的純中藥制劑提供新的選擇。臨床和實(shí)驗(yàn)研究均顯示：它可明顯降低血中膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋白 B（Apo B）的含量[8]，增加低密度脂蛋白（LDL）受體活性[9]，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化[10-13]，減輕脂質(zhì)沉積于內(nèi)膜，從而起到降血脂的作用，同時(shí)也可進(jìn)一步評(píng)價(jià)此藥在臨床上的調(diào)脂藥效。