宮頸上皮內(nèi)瘤變組織P16、Ki67表達(dá)及臨床意義

游娟 旦措毛 湛秀蓮 馮爽

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，具有高發(fā)病率與高病死率等特征，且近些年隨著生活方式改變，發(fā)病群體逐漸偏向年輕化[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN） 與 宮 頸 癌 密 切 相關(guān)，亦屬于一種子宮頸病變，其按嚴(yán)重程度可分為CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)，其中Ⅰ級(jí)CIN大多數(shù)可自行消退，而Ⅱ、Ⅲ級(jí)CIN則具有較大癌變可能[2]。目前臨床針對(duì)CIN的主要治療方式為手術(shù)治療，其中以宮頸高頻電波刀電圈切除術(shù)（loop electrosurgical excision procedure，LEEP）最為常見，其具有操作簡(jiǎn)便、微創(chuàng)等優(yōu)勢(shì)[3]。但相關(guān)研究顯示，手術(shù)治療雖安全有效，但手術(shù)引起的并發(fā)癥仍是一大難題[4]。因此對(duì)CIN患者進(jìn)行精準(zhǔn)分級(jí)對(duì)治療方案的制定有重要意義。近些年，組織標(biāo)本活檢逐漸成為進(jìn)行CIN分級(jí)的重要方式，其中主要以P16、Ki67為主[5]。鑒于此，本研究分析CIN組織中P16、Ki67的表達(dá)，分析其與CIN分級(jí)的相關(guān)性，旨在為臨床治療方案制定提供參考依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月-2020年1月本院病理科手術(shù)切除100例CIN患者的組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均經(jīng)第二代雜交捕獲試驗(yàn)（hybrid Capture Ⅱ，HC-2）和術(shù)后病理檢查確診為CIN。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并盆腔炎、尖銳濕疣或婦科腫瘤；（2）合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變；（3）合并血液性疾??；（4）合并免疫功能障礙?；颊吣挲g32～71歲，平均（48.73±2.59）歲；CIN分級(jí)：CINⅠ級(jí)65例，Ⅱ級(jí)35例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)后，患者及其家屬均知情且自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

組織樣本P16、Ki67的表達(dá)檢測(cè)。將所有標(biāo)本放置進(jìn)10%甲醛溶液中行固定處理，石蠟包埋后，作4 μm連續(xù)切片處理，而后行HE染色與免疫組化SP法染色，采用枸橘酸鈉進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，DAB溶液下行顯色處理。采用PBS溶液作為陰性對(duì)照，取已知P16、Ki67高表達(dá)的宮頸癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。其中P16、Ki67鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色溶液均購(gòu)自福州邁新供公司。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

（1）比較P16、Ki67在 CIN P16 Ⅰ、Ⅱ 級(jí)中的表達(dá)情況。P16判定標(biāo)準(zhǔn)：胞核著色或胞核與胞漿同時(shí)著色判定為陽(yáng)性，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比，0～10%細(xì)胞陽(yáng)性為陰性（-）；10%～50%細(xì)胞陽(yáng)性為弱陽(yáng)性（±）；＞50%細(xì)胞陽(yáng)性為陽(yáng)性（+）。Ki67判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性信號(hào)位于胞核。陽(yáng)性細(xì)胞僅位于基底或基底旁層為陰性（-）；陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)上皮下1/3層為弱陽(yáng)性（±）；陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)上皮中1/3層為陽(yáng)性（+）；陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)上皮上1/3層為強(qiáng)陽(yáng)性（++）。陽(yáng)性表達(dá)=陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性。（2）分析P16和Ki67與CIN分級(jí)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)進(jìn)行描述，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P16、Ki67在各分級(jí)CIN病變中活檢表達(dá)情況

CINⅠ級(jí)中P16、Ki67多為陰性與弱陽(yáng)性表達(dá)，分別為69.23%、80.77%；而CINⅡ級(jí)中P16、Ki67多為陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，均為77.14%；CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)患者P16和Ki67陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1、表2。

表1 P16在各分級(jí)CIN病變中活檢表達(dá)情況[例（%）]

表2 Ki67在各分級(jí)CIN病變中活檢表達(dá)情況[例（%）]

2.2 P16、Ki67表達(dá)與CIN病變分級(jí)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，P16、Ki67表達(dá)與宮頸病變程度均呈正相關(guān)（r=0.653、0.692，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌是臨床常見惡性腫瘤之一，CIN是發(fā)生于宮頸癌早期的一種子宮頸病變，根據(jù)異常程度分3級(jí)CIN（CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)和CINⅢ級(jí)），從CIN自然病史來(lái)看，極少數(shù)的CINⅠ級(jí)患者將發(fā)展成浸潤(rùn)性癌，大約23%的CINⅡ級(jí)患者將發(fā)展成浸潤(rùn)癌或者原位癌，大約15%的CINⅢ級(jí)患者可發(fā)展成浸潤(rùn)性癌[6]。目前臨床對(duì)于大多數(shù)CINⅠ級(jí)患者主要采用保守治療，而對(duì)于CINⅡ級(jí)、Ⅲ級(jí)主要為宮頸局部治療，如宮頸消融或LEEP術(shù)。有研究顯示，CIN各級(jí)具有一定自然消退可能性，且目前所采用的LEEP術(shù)具有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)，術(shù)后伴有諸如組織增生、宮頸管縮短等并發(fā)癥，不利于患者預(yù)后[7]。因此對(duì)于CIN患者的病理分級(jí)準(zhǔn)確判定對(duì)于治療方案制定具有重要臨床意義。

有研究指出，對(duì)于CINⅠ級(jí)的分級(jí)判斷與術(shù)后病理學(xué)診斷一致性僅為64%，而CINⅡ級(jí)與術(shù)后病理學(xué)診斷的一致性則低于50%，因此尋找一種高效、敏感的CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)判斷標(biāo)志物對(duì)于CIN患者治療方式制定迫在眉睫[8]。細(xì)胞分子生物學(xué)研究認(rèn)為，惡性腫瘤發(fā)生的本質(zhì)上是由于細(xì)胞周期的調(diào)控紊亂，呈現(xiàn)出過度增殖和凋亡不足的狀態(tài)。近年來(lái)，隨著對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控研究的不斷深入，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同了腫瘤的發(fā)生多與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)的觀點(diǎn)，因而檢測(cè)影響細(xì)胞周期調(diào)控的生物標(biāo)志物，可以預(yù)測(cè)腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，P16在CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)病變中陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.77%（20/65）、77.14%（27/35）；Ki67在CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)病變中陽(yáng)性表達(dá)率分別為20.00%（13/65）、77.14%（27/35），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CINⅠ級(jí)中P16、Ki67多為陰性與弱陽(yáng)性表達(dá)，分別為69.23%、80.77%；而CINⅡ級(jí)中P16、Ki67多為陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，均為77.14%。CIN患者P16、Ki67表達(dá)與CIN分級(jí)正相關(guān)（r=0.653、0.692，P＜0.05），提示P16、Ki67可作為CIN臨床病理分級(jí)參考依據(jù)。分析其原因可能在于，目前臨床對(duì)于CIN分級(jí)主要采用傳統(tǒng)的組織病理學(xué)判斷，有研究指出醫(yī)師的自身觀念、資歷不同可能對(duì)CIN分級(jí)做出不同判斷[9]。P16是一個(gè)腫瘤抑制基因，位于9p21，全長(zhǎng)8.5 kb，由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成，作為一種細(xì)胞周期素依賴性激酶（CDKs）抑制物，其可通過抑制CDK活性以達(dá)到抑制pRb的磷酸化效果，較低水平磷酸化的pRb可通過與轉(zhuǎn)錄因子E2F結(jié)合并抑制其活性，使得細(xì)胞處于較早期階段。人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）E7蛋白通過與pRb結(jié)合導(dǎo)致其失去活性并釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進(jìn)細(xì)胞繁殖，而細(xì)胞繁殖則可使P16呈高表達(dá)狀態(tài)，但因E7蛋白與pRb具有更高親和力，導(dǎo)致P16失去對(duì)于細(xì)胞周期的抑制效果從而聚集于細(xì)胞中[10-11]。Ki67是細(xì)胞增殖的標(biāo)志物，在細(xì)胞周期的G1、S、G2和M期表達(dá)，但在G0期不表達(dá)，Ki67增殖指數(shù)與腫瘤分化、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，它被廣泛用于檢測(cè)各種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖和惡性程度。Ki67是一種細(xì)胞增殖活性相關(guān)抗體，其陽(yáng)性表達(dá)程度可反映細(xì)胞增殖活躍度。丁莉利等[12]研究結(jié)果顯示，P16、Ki67在高度CIN中陽(yáng)性表達(dá)率高于低度CIN，與本研究結(jié)果相似，提示P16、Ki67表達(dá)與CIN分級(jí)密切相關(guān)。P16在宮頸鱗狀上皮非腫瘤性病變中的陽(yáng)性率很低，但在CIN中的陽(yáng)性率較高，尤其是在高級(jí)別CIN中，陽(yáng)性率極高，作為輔助診斷標(biāo)志物，P16可以有效區(qū)分CIN病變。Ki67在宮頸癌的不同CIN中逐漸增加，并且在預(yù)測(cè)低水平CIN是否可以發(fā)展為高水平CIN方面具有很強(qiáng)的預(yù)測(cè)價(jià)值。部分宮頸病變的病理學(xué)診斷及鑒別非常困難，絕經(jīng)后女性的鱗狀上皮萎縮及CIN病變，尤其是高度的CIN病變；宮頸腺體的鱗化及化生性增生與CIN病變；嚴(yán)重的宮頸炎可能刺激上皮反應(yīng)性增生或掩蓋高度的CIN，應(yīng)當(dāng)引起臨床重視。

綜上所述，CIN患者P16、Ki67在CINⅠ級(jí)、Ⅱ級(jí)病變中均有不同程度表達(dá)，且P16、Ki67陽(yáng)性表達(dá)與CIN分級(jí)呈正相關(guān)，可作為CIN臨床病理分級(jí)參考依據(jù)。但由于納入樣本量有限及并未探討P16、Ki67對(duì)于CIN患者預(yù)后的影響等因素，導(dǎo)致本研究結(jié)果可能不夠全面，因此后續(xù)研究中應(yīng)納入充足樣本量并將P16、Ki67對(duì)于CIN患者預(yù)后的影響納入研究范圍，以獲取更準(zhǔn)確、全面的研究結(jié)論，為臨床治療方案制定及預(yù)后判斷提供更全面準(zhǔn)確的依據(jù)。