高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中3種β-受體激動(dòng)劑的殘留

劉 婧

1.蘇州世標(biāo)檢測(cè)技術(shù)有限公司 江蘇蘇州 215168 2.蘇州海關(guān)綜合技術(shù)中心 江蘇蘇州 215168

β-Agonists是一種苯乙胺類藥物，更是一種生長促進(jìn)劑，常用于治療支氣管哮喘，Clenbuterol是最開始被添加于飼料中的β-受體激動(dòng)劑，漸漸的Ractopamine、Salbutamol也被添加[1～3]，用該飼料喂養(yǎng)動(dòng)物時(shí)，可以提高瘦肉產(chǎn)率，但是這類肉制品攝入人體后會(huì)造成嚴(yán)重影響，危害生命健康[4,5]。因此，為了消費(fèi)者的安全，規(guī)定β-受體激動(dòng)劑不得使用。

本文改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)方法和質(zhì)譜條件，更為快速高效的檢測(cè)β-Agonists殘留量。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器和耗材

電子天平ML204/02，梅特勒公司；

恒溫水浴鍋，上海博訊公司；

超純水儀Milli-Q，美國公司;

渦旋儀，IKA公司；

離心機(jī)，湖南湘儀集團(tuán)；

氮吹儀N-EVAP,美國Organomation公司;

液質(zhì)聯(lián)用儀6470，美國安捷倫公司。

色譜柱：Waters C18柱，100mm×2.1mm，5μm。

固相萃取柱：60mg/3mL Waters Oasis HLB、60mg/3mL Waters Oasis MCX、60mg/3mL AgelaPCX。

1.1.2 試劑

沃凱：乙酸銨、正己烷(色譜純)。

國藥：高氯酸、鹽酸(優(yōu)級(jí)純)。

阿拉丁：甲酸(色譜純)。

Fisher chemical：甲醇、乙酸乙酯(色譜純)。

Sigma alorich：氨水(色譜純)、β-葡萄糖醛甙霉。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)信息見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)信息

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解定容配成1 000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并于-20℃保存。臨用時(shí)稀釋成0.1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取上述同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解定容配成1 000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并于-20℃保存。臨用時(shí)稀釋成0.1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

酶解：稱取試樣5.0g→加入0.8mL乙酸銨溶液(2.0mol/L)→7.2mL超純水→40μL β-葡萄糖醛甙霉→渦旋混勻→置于37℃恒溫水浴鍋中酶解16h。

提?。喝〕雒附鈽悠泛蟆鋮s至室溫→加入0.1mg/L內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備混合溶液100μL 0.1mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備混合溶液25μL→再加入5mL高氯酸溶液(1mol/L)→渦旋混勻→9 500r/min離心10min→取上清液經(jīng)裝有脫脂棉的漏斗過濾，濾液備用。

凈化：將上述濾液采用固相萃取柱過濾洗脫，過程見表2；洗脫液氮吹干，用2mL水溶解殘?jiān)?，過膜，用于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

表2 固相萃取凈化方法

1.4 高效液相色譜及質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件

流動(dòng)相：0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈。

進(jìn)樣量：20.0μL。

柱溫：25℃。

梯度洗脫程序見表3。

表3 梯度洗脫表

1.4.2 質(zhì)譜條件

電離源：ESI電噴霧方式。

掃描方式：MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

電噴霧電壓：3 500V。

鞘氣溫度：300℃。

鞘氣流速：30L/min。

干燥氣流速：10L/min。

干燥氣溫度：350℃。

監(jiān)測(cè)離子：被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)譜分析參數(shù)見表4。

表4 被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)譜分析參數(shù)

2 結(jié)果分析討論

2.1 前處理及檢測(cè)條件的選擇

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)現(xiàn)有的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用了幾種不同流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。流動(dòng)相分別選用了0.1%甲酸水+0.1%甲酸乙腈、0.1甲酸水+乙腈，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)0.1%甲酸水+0.1%甲酸乙腈峰形較好。

2.1.2 固相萃取柱的選擇

采用相同的步驟，分別使用3種固相萃取柱，發(fā)現(xiàn)MCX分離效果最好，濃度響應(yīng)值較高，PCX次之，HLB不適用。

2.1.3 淋洗液的選擇

采用MCX柱，進(jìn)行不同的凈化過程見表5。方法4試劑少、簡單、分離效果較好且樣品損失較少，峰響應(yīng)值較高。加標(biāo)0.5g/kg的樣品提取色譜圖見圖1，各組分的MRM圖見圖2。

表5 MCX柱的不同凈化方法

圖1 加標(biāo)0.5g/kg的樣品提取色譜圖

圖2 樣品各組分的MRM圖

2.2 方法的線性范圍

將3種β-受體激動(dòng)劑，按檢出限用水稀釋成相應(yīng)的濃度見表6；以化合物峰面積定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，3種化合物的線性回歸方程見表7。

表6 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制表

表7 3種化合物的線性回歸方程

2.3 方法回收率和精密度

向陰性樣品中添加檢出限的1倍、2倍、10倍3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，分別測(cè)定3次，計(jì)算各個(gè)化合物的回收率和RSD，結(jié)果見表8。

表8 回收率和精密度的試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了動(dòng)物源性食品中3種β-受體激動(dòng)劑的殘留量的LC-MS分析方法，該方法前處理簡單，重復(fù)性好，回收率高，滿足檢測(cè)要求。