針刺對(duì)帕金森抑郁模型大鼠的影響*

宋蕙杉，白妍，王順

1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040；2.黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江哈爾濱150036

帕金森?。≒arkinson′s disease，PD）是一種復(fù)雜的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其病理學(xué)特征是黑質(zhì)內(nèi)大量多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性缺失變性［1-2］。30%～40%的PD患者伴有以抑郁為主的非運(yùn)動(dòng)癥狀，同時(shí)抑郁可以影響運(yùn)動(dòng)癥狀，導(dǎo)致PD的病程加速［3］。PD伴發(fā)抑郁癥狀（Parkinson′s disease with depression，PDD），不僅影響患者生活質(zhì)量，也給治療增加了難度［4-5］。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brainderived neurotrophic factor，BDNF）是對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用的神經(jīng)因子，在皮層、海馬區(qū)高度表達(dá)，能夠防止神經(jīng)元受損凋亡，參與神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)分化，對(duì)神經(jīng)元維持正常生理功能發(fā)揮重要作用。研究顯示［6-8］，BDNF參與PDD的發(fā)病與病理進(jìn)程，BDNF的表達(dá)下調(diào)能夠加速多巴胺能神經(jīng)元損傷及腦組織結(jié)構(gòu)改變，這是導(dǎo)致帕金森伴抑郁樣行為的基礎(chǔ)。目前對(duì)于針刺治療PDD作用機(jī)制的研究較少，本文從BDNF表達(dá)方面探討針刺對(duì)PDD的作用機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物健康清潔級(jí)SD大鼠75只，雄性，8周齡，體質(zhì)量200～250 g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（遼）2018-0001，在黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房飼養(yǎng)，室內(nèi)光暗交替時(shí)間為14 h／10 h，溫度控制為22～25℃，相對(duì)濕度為50%～60%。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程按照中華人民共和國(guó)科技部頒布的《關(guān)于善待動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》進(jìn)行操作。

1.2 藥物與試劑阿撲嗎啡（apomorphine，APO）（美國(guó)西格瑪公司，批號(hào)：SLBB0077V）；6-羥基多巴胺（美國(guó)西格瑪公司，批號(hào)：MKBH3054）；水合氯醛（天津市科密歐化學(xué)試劑中心，批號(hào)：20170305）；鹽酸氟西汀膠囊（法國(guó)Patheon France，批號(hào)：J20170022），多巴絲肼片（上海羅氏制藥有限公司，批號(hào)：SH1001）。BNDF抗體（北京博奧森公司，貨號(hào)：bsm-33042M）；山羊抗兔IgG二抗（北京中杉金橋生物技術(shù)公司，貨號(hào)：ZB-2301）；DAB顯色劑（北京博奧森公司，批號(hào)：6935688）；大鼠BDNF ELISA試劑盒（ZIKER子科生物公司，批號(hào)：ZK-R3397）。

1.3 儀器Motic Med6.0病理圖像分析系統(tǒng)；3000型顯微攝影成像系統(tǒng)（美國(guó)moticam公司）；腦立體定位儀（美國(guó)Stoelting公司）；微量進(jìn)樣器（哈爾濱凱興醫(yī)用器械廠）；移液器（Eppendorf公司）；電熱恒溫箱（上海一恒公司）；醫(yī)用微波爐（廣東格蘭仕集團(tuán)）；全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-TEK公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)BECKMAN公司）；電泳儀（上海天能科技公司）；RM2135型組織切片機(jī)（德國(guó)萊卡公司）；722型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光學(xué)儀器廠）；0.25 mm×25 mm針灸針（安迪牌，貴州安迪藥械有限公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與造模75只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、對(duì)照組、針刺組，每組15只。采用單側(cè)紋狀體雙靶點(diǎn)注射法進(jìn)行PD模型制備［9］。將大鼠麻醉后，將大鼠固定于腦立體定位儀，按照大鼠腦定位圖譜向大鼠紋狀體緩慢注射6-羥基多巴胺，于術(shù)后6周，對(duì)大鼠進(jìn)行APO背部皮下注射，5 min后記錄大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，恒定轉(zhuǎn)向左側(cè)且平均轉(zhuǎn)速≥6 r·min-1為陽(yáng)性，作為合格PD的模型。繼續(xù)采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和性應(yīng)激法制備PD伴發(fā)抑郁模型［10］，每天隨機(jī)安排1種應(yīng)激且同種應(yīng)激不連續(xù)出現(xiàn)，以免大鼠產(chǎn)生疲勞反應(yīng)，應(yīng)激包括：50℃高溫環(huán)境5 min；夾尾1 min；4℃冰水游泳5 min；電壓50 mV電擊10 s；束縛4 h；晝夜顛倒12 h；接觸陌生物體（如塑料杯、木勺等）；噪音（60 Hz）12 h，潮濕墊料；斷水24 h。連續(xù)21 d后進(jìn)行行為學(xué)觀察。造模結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組有11只大鼠造模成功，針刺組有12只大鼠造模成功，對(duì)照組有12只大鼠造模成功。假手術(shù)組：與模型組相同的注射方法及部位，注入同樣劑量的含0.2%維生素C的生理鹽水。正常組：正常飼養(yǎng)，不造模。針刺組：參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》，選取“百會(huì)透太陽(yáng)”“中脘”，常規(guī)消毒，其中“百會(huì)透太陽(yáng)”是使用無(wú)菌毫針刺入“百會(huì)”，向單側(cè)“太陽(yáng)”方向沿皮斜刺2～3 mm，兩側(cè)“太陽(yáng)”交替使用；“中脘”采用直刺，穿透大鼠皮膚約3～5 mm，進(jìn)針后平補(bǔ)平瀉，以每分鐘60次頻率進(jìn)行捻轉(zhuǎn)，每間隔5 min捻轉(zhuǎn)30 s，留針20 min。對(duì)照組：按氟西?。? mg·kg-1）＋多巴絲肼片（6 mg·kg-1）的劑量給大鼠灌胃。每日上午9時(shí)給藥，每周稱體質(zhì)量調(diào)整藥量。正常組、模型組及假手術(shù)組每日相同時(shí)間與針刺組同樣的方法抓取、固定，并予2 mL生理鹽水灌胃。以上各組操作均每日1次，連續(xù)28 d。

2.2 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

2.2.1 體質(zhì)量增長(zhǎng)率變化分別測(cè)量各組大鼠體質(zhì)量，計(jì)算大鼠體質(zhì)量變化率。

體質(zhì)量變化率＝（給藥后體質(zhì)量-初始體質(zhì)量）／初始體質(zhì)量×100%

2.2.2 APO誘導(dǎo)的行為學(xué)變化于造模后6周，對(duì)大鼠進(jìn)行APO背部皮下注射，5 min后大鼠開(kāi)始出現(xiàn)以左后肢為支點(diǎn)向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，身體側(cè)屈成環(huán)，記錄大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)。

2.2.3 蔗糖溶液偏好實(shí)驗(yàn)將飼養(yǎng)籠兩側(cè)放置容量為500 mL的飲水瓶，兩個(gè)飲水瓶在實(shí)驗(yàn)前24 h都裝滿1%蔗糖溶液。大鼠適應(yīng)蔗糖溶液24 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，兩個(gè)飲水瓶分別裝滿1%蔗糖溶液和自來(lái)水，進(jìn)行稱重后隨機(jī)放入飼養(yǎng)籠兩側(cè)。1 h后稱量瓶中自來(lái)水和蔗糖溶液剩余量，每個(gè)瓶子的質(zhì)量差為大鼠的攝入量。蔗糖溶液偏好率為消耗的蔗糖溶液相對(duì)于總液體消耗的百分比［11］。

蔗糖溶液偏好率＝［蔗糖溶液攝入量／（蔗糖溶液攝入量＋自來(lái)水?dāng)z入量）］×100%

攝入量＝初始量-剩余量

2.2.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)曠場(chǎng)反應(yīng)箱為80 cm×80 cm×40 cm的木質(zhì)敞箱，底面均勻劃分為16個(gè)小正方形，保持測(cè)試環(huán)境安靜、黑暗，把每只大鼠輕輕放置于網(wǎng)格的中央位置，允許其在箱內(nèi)自由探索活動(dòng)，觀察并記錄大鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)情況，包括水平爬行格數(shù)、垂直站立次數(shù)。水平爬行格數(shù)是計(jì)算大鼠身體的一半以上從一個(gè)正方形移動(dòng)到另一個(gè)正方形的格數(shù)，垂直站立次數(shù)為大鼠站立姿勢(shì)的次數(shù)［12］。

2.2.5 ELISA法檢測(cè)血清中BDNF的水平腹主動(dòng)脈采血5 mL，將血液標(biāo)本置于4℃冰箱靜置2～3 h，離心半徑8 cm，3000 r·min-1，離心15 min，取上清液存于-20℃冰箱，采用ELISA法進(jìn)行血清BDNF水平的測(cè)定。將樣品進(jìn)行稀釋，樣品加于酶標(biāo)板孔，混勻，封板后置37℃溫育30 min，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 min后棄去，重復(fù)5次；每孔加入酶標(biāo)試劑，溫育30 min，洗滌，顯色，加終止液終止反應(yīng)后進(jìn)行測(cè)定。

2.2.6 腦組織HE染色大鼠以10%水合氯醛麻醉后，經(jīng)左心室依次灌注生理鹽水和4%多聚甲醛的溶液，至大鼠全身變硬后，斷頭取腦放入4%多聚甲醛液中，置于4℃冰箱內(nèi)固定24 h后，進(jìn)行脫水，石蠟包埋，制備組織切片。將切片放入烤箱溶蠟0.5 h后再放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液中各10 min，放入100%、95%、80%、70%梯度乙醇，流水沖洗10 min 2次；蘇木素染色5 min，流水沖洗10 min；鹽酸酒精分化1次，流水沖洗15 min；伊紅染色2 min，流水沖洗10 min；95%乙醇、100%乙醇Ⅲ各10 min；二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液各10 min；中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。

2.2.7 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腦組織BDNF的表達(dá)切片常規(guī)脫蠟，于過(guò)氧化氫液中孵育10 min，PBS沖洗3次，每次2 min。將切片泡入枸椽酸鹽緩沖液中，放置在微波爐中烘烤2次，每次5 min，自然冷卻至室溫。滴加一抗，于4℃冰箱內(nèi)24 h，PBS沖洗3次，每次2 min；滴加二抗，于37℃恒溫箱中孵育30 min，PBS沖洗3次，每次2 min；DAB顯色10 min后充分沖洗干凈，蘇木素復(fù)染1 min；常規(guī)脫水封片后，于顯微鏡下觀察。采用Motic Med 6.0病理圖像分析系統(tǒng)，在100倍視野下，隨機(jī)觀察每組圖像并進(jìn)行計(jì)數(shù)。進(jìn)入圖像分析系統(tǒng)，選擇免疫組織化學(xué)法分析模塊，通過(guò)灰度調(diào)節(jié)來(lái)區(qū)分視野內(nèi)陽(yáng)性信號(hào)面積，進(jìn)行分析后計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)，取其平均值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，采用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率變化與正常組比較，假手術(shù)組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率變化不明顯（P＞0.05），模型組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率顯著減慢（P＜0.01）；與模型組大鼠相比，針刺組、對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率均顯著加快（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量增加百分率比較 （±s）

表1 各組大鼠體質(zhì)量增加百分率比較 （±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃＃P＜0.01

／%正常組組別n體質(zhì)量增長(zhǎng)率15 98.92±10.13假手術(shù)組15 92.15±9.65模型組11 43.76±8.12**對(duì)照組12 83.50±7.65＃＃針刺組12 79.81±8.35＃＃

3.2 各組大鼠APO誘導(dǎo)的行為學(xué)變化造模后，有35只PDD模型大鼠出現(xiàn)恒定轉(zhuǎn)向左側(cè)且平均轉(zhuǎn)速≥6 r·min-1，正常組和假手術(shù)組以相同方式注射APO后未出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為；與模型組比較，對(duì)照組和針刺組大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯減少（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠APO誘導(dǎo)行為學(xué)比較 （±s）

表2 各組大鼠APO誘導(dǎo)行為學(xué)比較 （±s）

注：與模型組比較，＃P＜0.05

-1組別n旋轉(zhuǎn)圈數(shù)／r·min 15 0假手術(shù)組15 0模型組11 10.76±3.12對(duì)照組12 6.02±2.35＃針刺組12 6.31±3.43正常組＃

3.3 各組大鼠蔗糖溶液偏好率與正常組相比，模型組大鼠蔗糖溶液偏好率明顯降低（P＜0.05），假手術(shù)組大鼠蔗糖深液偏好率無(wú)明顯變化；與模型組相比，對(duì)照組和針刺組大鼠蔗糖溶液偏好率均明顯增加（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠蔗糖溶液偏好率比較（±s）

表3 各組大鼠蔗糖溶液偏好率比較（±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05

／%正常組組別n蔗糖溶液偏好率15 70.25±3.18假手術(shù)組15 69.30±8.65模型組11 49.76±7.12**對(duì)照組12 59.50±5.65＃針刺組12 60.31±6.35＃

3.4 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)與正常組相比，假手術(shù)組的水平距離、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)均無(wú)明顯差異，模型組大鼠水平距離、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)均顯著減少（P＜0.01）；與模型組相比，對(duì)照組和針刺組大鼠的水平距離有顯著增加（P＜0.01），對(duì)照組和針刺組的垂直得分明顯增加（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)比較（±s）

表4 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)比較（±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃＃P＜0.01，＃P＜0.05

組別n水平運(yùn)動(dòng)／格垂直運(yùn)動(dòng)／次15 62.06±5.43 18.53±4.72假手術(shù)組15 60.73±7.23 16.67±4.05模型組11 31.90±4.92**5.45±1.51**對(duì)照組12 58.50±4.29＃＃10.42±2.75＃針刺組12 56.33±4.71＃＃9.33±2.23正常組＃

3.5 各組大鼠血清BDNF水平與正常組相比，模型組血清BDNF水平明顯降低（P＜0.05），假手術(shù)組無(wú)明顯變化；與模型組相比，針刺組和對(duì)照組BDNF水平明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠血清中BDNF水平的比較（±s）

表5 各組大鼠血清中BDNF水平的比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別n血清BDNF水平（ρ／ng·L-1）5正常組143.53±29.42假手術(shù)組5 138.42±25.05模型組5 93.34±15.33*對(duì)照組5 128.12±18.24＃針刺組5 130.92±20.45＃

3.6 各組大鼠腦組織HE染色正常組和假手術(shù)組大鼠腦組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)及大小正常，核仁明顯，結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，排列紊亂，形態(tài)不完整，染色較淺，部分結(jié)構(gòu)溶解消失；針刺組和對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)完整，排列較整齊，結(jié)構(gòu)較清晰。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠腦組織HE染色的比較（×100）

3.7 各組大鼠腦組織BDNF表達(dá)正常組大鼠的BDNF陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較強(qiáng)，其細(xì)胞數(shù)量多，排列相對(duì)緊密，胞漿染色較深。與正常組相比，假手術(shù)組無(wú)明顯差別，模型組的陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)明顯減少（P＜0.05），排列相對(duì)稀疏，胞漿著色明顯變淺；與模型組相比，對(duì)照組和針刺組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均有明顯增加（P＜0.05）。見(jiàn)圖2，表6。

圖2 各組大鼠腦組織BNDF陽(yáng)性神經(jīng)元的比較（×100）

表6 各組大鼠腦組織區(qū)BDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較（±s）

表6 各組大鼠腦組織區(qū)BDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別n BDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／個(gè)35.60±2.50假手術(shù)組5 34.90±1.14模型組5 14.60±3.20*對(duì)照組5 32.20±0.83＃針刺組5 31.40±1.14正常組5＃

4 討論

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的高度表達(dá)的蛋白質(zhì)，在神經(jīng)細(xì)胞再生、分化和可塑性中起著重要的作用［13-14］。BNDF通過(guò)與肌球蛋白相關(guān)激酶B（TrkB）受體結(jié)合導(dǎo)致TrkB的磷酸化，從而激活神經(jīng)細(xì)胞的下游細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，維持多巴胺能神經(jīng)元的完整性，避免細(xì)胞受損和凋亡［15-17］。臨床研究顯示，BDNF在前額皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)高度表達(dá)，成為帕金森病、阿爾茨海默病、抑郁癥和情感障礙等神經(jīng)和精神疾病病理生理的關(guān)鍵因素［18］。BDNF能調(diào)節(jié)多巴胺能通路，發(fā)揮對(duì)多巴胺神經(jīng)元抗凋亡、抗氧化的作用，促進(jìn)多巴胺的釋放，改善帕金森病導(dǎo)致的認(rèn)知功能、自主神經(jīng)功能障礙，對(duì)抑郁等伴隨的非運(yùn)動(dòng)癥狀有良好的調(diào)節(jié)作用［19-22］。研究表明，PDD患者的血清BDNF水平顯著減少，通過(guò)治療后血清BDNF水平明顯提升［13］。此外，提高血清及腦組織BDNF的水平，可以調(diào)節(jié)多巴胺能神經(jīng)元的凋亡和神經(jīng)興奮性，從而改善帕金森的伴隨癥狀［23-25］。

帕金森抑郁屬中醫(yī)“顫證”合并“郁證”范疇。“顫證”由肝腎陰虛，筋脈失養(yǎng)所致，病位在腦，腦為神明所聚，是意識(shí)思維的基礎(chǔ)［26］?；颊呔貌〔挥?，氣機(jī)不暢，肝氣郁結(jié)，而引發(fā)“郁證”［27］。針刺選取“百會(huì)透太陽(yáng)”“中脘”，具有醒腦開(kāi)竅，調(diào)神暢情之效?！肚Ы鹨健酚涊d：“頭者，人神所注……皆上歸頭?！卑贂?huì)屬于督脈，聯(lián)系腦絡(luò)，與腦關(guān)系密切，可治療各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。百會(huì)透太陽(yáng)區(qū)域連接正營(yíng)、懸厘，橫貫督脈、膀胱經(jīng)、膽經(jīng)三經(jīng)，穿越頂、額、顳三葉區(qū)，一穴透多穴、多經(jīng)、多區(qū)，具開(kāi)竅熄風(fēng)、調(diào)暢氣機(jī)之功效，對(duì)帕金森病導(dǎo)致的抑郁癥狀具有良好的調(diào)節(jié)作用［28］。研究發(fā)現(xiàn)，針刺百會(huì)能夠提高抑郁大鼠腦內(nèi)的內(nèi)啡肽含量，通過(guò)參與體內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)來(lái)調(diào)節(jié)大鼠的抑郁樣行為［29-30］。中脘屬于任脈，為胃之募穴，主治消化系統(tǒng)疾病，針刺中脘可以促進(jìn)胃腸道的消化吸收，使脾胃運(yùn)化功能恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，中脘穴可以對(duì)大腦皮層網(wǎng)絡(luò)起到調(diào)控作用，刺激內(nèi)啡肽的釋放［31］，其機(jī)制可能是針刺中脘穴作用于胃腸道，通過(guò)腦腸軸進(jìn)行信息傳遞達(dá)到作用目的，對(duì)帕金森抑郁的治療具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)中PDD模型是在PD模型成功的基礎(chǔ)上采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和性應(yīng)激法制備。PD模型的制備目前主要有6-羥基多巴胺雙靶點(diǎn)注射法、MPTP注射法以及轉(zhuǎn)基因技術(shù)等，其中6-羥基多巴胺很容易被大腦認(rèn)為是神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)入神經(jīng)元，從而破壞神經(jīng)細(xì)胞，使PD模型大鼠的病理表現(xiàn)、發(fā)病進(jìn)程以及行為學(xué)表現(xiàn)與人類相似，且操作相對(duì)簡(jiǎn)單，易成功?？刹捎肁PO誘導(dǎo)行為學(xué)來(lái)評(píng)估模型成功率，因此，本實(shí)驗(yàn)選用6-羥基多巴胺雙靶點(diǎn)注射法制備PD模型［32］。采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和性應(yīng)激法制備伴發(fā)抑郁模型，大鼠出現(xiàn)精神萎靡，體質(zhì)量增長(zhǎng)明顯減緩，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中的水平爬行距離和垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)較正常組明顯減少，蔗糖溶液偏好率明顯低于正常組，提示大鼠出現(xiàn)探究行為減弱，快感缺失等行為，且造模后的大鼠BDNF表達(dá)顯著降低，這與臨床中帕金森伴發(fā)抑郁的行為及病理表現(xiàn)一致。假手術(shù)組與正常組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)及BDNF表達(dá)無(wú)明顯差異，說(shuō)明手術(shù)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)影響，模型組的改變是由于6-羥基多巴胺破壞多巴胺能神經(jīng)元所致。

多巴絲肼片能夠?qū)苟喟桶纺苌窠?jīng)元凋亡、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，可有效改善PD患者的運(yùn)動(dòng)及非運(yùn)動(dòng)癥狀，且多巴絲肼片作為左旋多巴與芐絲肼的合成制劑，可減輕單一用藥的不良反應(yīng)。氟西汀屬于選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，可阻斷5-羥色胺受體通路，恢復(fù)多巴胺水平，是抗抑郁治療的一線用藥，且具有成分安全，不良反應(yīng)小，起效快，方便給藥以及很少干擾其他藥物作用的優(yōu)勢(shì)。因此，選取美多芭和氟西汀作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組相比，針刺干預(yù)后大鼠的體質(zhì)量變化率、APO誘導(dǎo)的大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)、水平運(yùn)動(dòng)距離、垂直站立次數(shù)及蔗糖溶液偏好率均有明顯改善，免疫組化法及ELISA法檢測(cè)顯示腦組織及血清中BDNF表達(dá)明顯升高，表明針刺能夠改善PDD大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，同時(shí)提高其腦組織及血清中BDNF表達(dá)。進(jìn)一步證實(shí)，針刺可能是通過(guò)提高BDNF表達(dá)水平，調(diào)節(jié)多巴胺能神經(jīng)元的興奮性，從而改善帕金森伴發(fā)抑郁的癥狀，為針刺治療PDD的機(jī)制研究提供了新依據(jù)，同時(shí)為臨床治療PDD提供了新的思路和方法。