滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位的抗氧化和降脂活性研究

李欣坪 王蒙蒙 王子晨 方瓊蓮 林玉萍

摘 要 目的：研究滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位的抗氧化活性和降脂活性。方法：取滇黃芩莖葉用95%乙醇回流提取，得乙醇提取物;取上述提取物，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑得到不同溶劑萃取部位。以維生素C（Vc）為陽(yáng)性對(duì)照，采用羥基自由基、超氧陰離子自由基、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法檢測(cè)滇黃芩莖葉乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的體外抗氧化活性并計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）。以脂肪乳建立脂肪變性L02肝細(xì)胞模型，以非諾貝特（20 μg/mL）為陽(yáng)性對(duì)照，考察高、低質(zhì)量濃度（100、50 μg/mL）滇黃芩莖葉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物對(duì)細(xì)胞中TC、TG含量的影響。結(jié)果：對(duì)羥基自由基的清除能力強(qiáng)弱排序?yàn)榈狳S芩莖葉正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>Vc>乙醇提取物>石油醚萃取物，IC50分別為0.15、0.17、0.35、0.75、1.17 mg/mL;對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力強(qiáng)弱排序?yàn)閂c>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物，IC50分別為0.034、0.55、0.75、3.32、3.73 mg/mL;對(duì)DPPH自由基的清除能力強(qiáng)弱排序?yàn)閂c>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物，IC50分別為0.003 2、0.028、0.033、0.048、0.057 mg/mL。滇黃芩莖葉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)脂肪變性L02肝細(xì)胞中TC、TG含量均有顯著的降低作用（P<0.01），其降脂能力強(qiáng)弱排序?yàn)檎〈驾腿∥铮ǖ蜐舛龋址侵Z貝特>乙酸乙酯萃取物（高濃度）>乙醇提取物（高濃度）>正丁醇萃取物（高濃度）>乙酸乙酯萃取物（低濃度）>乙醇提取物（低濃度）。結(jié)論：滇黃芩莖葉乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物均有一定的抗氧化活性和降脂活性（除石油醚萃取物外），其中正丁醇和乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性和降脂活性較高。

關(guān)鍵詞 滇黃芩莖葉;乙醇提取物;抗氧化活性;降脂活性

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the antioxidant activity and lipid-lowering effect of ethanol extract and its different solvent extracts from the stems and leaves of Scutellaria amoena. METHODS： The stem and leaves of S. amoena was extracted with 95% ethanol to obtain ethanol extract， and then extracted with petroleum，ethyl acetate and n-butanol to obtain corresponding different solvent extracts. Using vitamin C （Vc） as positive control， the antioxidant activities of ethanol extract， petroleum ether extract， ethyl acetate extract and n-butanol extract from the stems and leaves of S. amoena were determined by hydroxyl radical， superoxide anion radical and DPPH radical scavenging method， and the IC50 was calculated. Steatosis L02 hepatocyte model was established with fat emulsion. Using fenofibrate （20 μg/mL） as positive control， the effects of high and low concentration （100 and 50 μg/mL） ethanol extract， ethyl acetate extract and n-butanol extract from the stems and leaves of S. amoena on the contents of TC and TG in cells were investigated. RESULTS： The order of scavenging ability to hydroxyl radicals was n-butanol extract>ethyl acetate extract>Vc>ethanol extract>petroleum ether extract; IC50 of them were 0.15， 0.17， 0.35， 0.75， 1.17 mg/mL， respectively. The order of scavenging ability to superoxide anion radical was Vc>n-butanol extract>ethyl acetate extract>ethanol extract>petroleum ether extract; IC50 of them were 0.034， 0.55， 0.75， 3.32， 3.73 mg/mL， respectively. The order of DPPH scavenging ability to DPPH radical was Vc>n-butanol extract>ethyl acetate extract>ethanol extract>petroleum ether extract; IC50 of them were 0.003 2， 0.028， 0.033， 0.048， 0.057 mg/mL， respectively. The ethanol extract， ethyl acetate extract and n-butanol extract from the stems and leaves of S. amoena could significantly decrease the contents of TC and TG in steatosis L02 hepatocytes （P<0.01）. The order of lipid-lowering ability was n-butanol extract（low dose）≈fenofibrate>ethyl acetate extract（high dose）>ethanol extract（high dose）>n-butanol extract（high dose）>ethyl acetate extract（low dose）>ethanol extract（low dose）. CONCLUSIONS： The ethanol extract， petroleum ether extract， ethyl acetate extract and n-butanol extract from the stems and leaves of S. amoena show good antioxidant activity and lipid-lowering effect （except for petroleum ether extract）. Ethyl acetate extract and n-butanol extract possess the strongest antioxidant activity and lipid-lowering effect.

KEYWORDS? ?Stem and leaves of Scutellaria amoena; Ethanol extract; Antioxidant activity; Lipid-lowering activity

中圖分類號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）02-0220-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.02.16

滇黃芩Scutellaria amoena C. H. Wright是云南地區(qū)多種民族藥的藥用資源，又名小黃芩、西南黃芩、土黃芩等，為唇形科黃芩屬植物，主要分布在我國(guó)云南、四川、貴州等地[1-2]?！兜崮媳静荨贰吨袊?guó)彝藥學(xué)》《云南民族藥大辭典》等書記載，滇黃芩性寒、味苦，歸肝、膽、胃、肺、大腸經(jīng)，具有清肺胃熱、燥濕氣、消炎、解毒、安胎、止血等功效[3-4]。滇黃芩莖葉作為具有降脂作用的黃芩茶使用歷史悠久，其主要含有黃酮類化合物[5]。近年來(lái)，隨著對(duì)中藥黃芩研究的不斷深入，黃芩同屬植物的藥用價(jià)值日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，有關(guān)滇黃芩莖葉的藥用價(jià)值已成為研究熱點(diǎn)之一[6-7]。

現(xiàn)代藥理研究報(bào)道顯示，滇黃芩根部總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可抗心律失常并可阻滯心肌細(xì)胞鈉通道[8-10];滇黃芩莖葉還具有降脂作用，可降低高脂血癥模型大鼠的血脂水平[11]。但其醇提物及不同溶劑萃取部位抗氧化活性和降脂活性的比較研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究通過(guò)檢測(cè)滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的清除能力來(lái)評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性;采用脂肪變性人L02肝細(xì)胞模型，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）含量的變化來(lái)評(píng)價(jià)其降脂活性，篩選其抗氧化和降脂活性的有效部位，為滇黃芩莖葉的進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

本文所用實(shí)驗(yàn)儀器有：UV2450型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）、SHZ-D型循環(huán)水真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）、RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械股份有限公司醫(yī)療器械五廠）、BT2202S型電子天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司]、Infinite M200 Pro型酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）、MCO-20AIC型CO2培養(yǎng)箱（日本Sanyo公司）、SK3300LH型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

滇黃芩全株采自云南省新平縣，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)普春霞副教授鑒定為唇形科植物滇黃芩S. amoena C. H. Wright，取其莖葉進(jìn)行研究。

20%脂肪乳注射液[批號(hào)201807，規(guī)格250 mL ∶ 50 g（大豆油） ∶ 3 g（卵磷脂）]購(gòu)自四川科倫藥業(yè)股份有限公司，青霉素-鏈霉素雙抗溶液、0.25%胰蛋白酶、RPMI- 1640培養(yǎng)液、磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）、胎牛血清（批號(hào)0010419、0040819、0020319、2012004、1906287）均購(gòu)自以色列BI公司，非諾貝特膠囊（批號(hào)28212，規(guī)格200 mg/粒）購(gòu)自美國(guó)A bbott Laboratories Limited公司，TC、TG檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20200618、20200615）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，DPPH購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，維生素C（Vc，批號(hào)20140102，純度≥99.7%）和七水硫酸鐵（FeSO4·7H2O）均購(gòu)自廣東光華科技股份有限公司，Trition X-100試劑（批號(hào)FZ6688A189）購(gòu)自廣州賽國(guó)生物科技有限公司，三羥甲基氨基甲烷（Tris）、磷酸二氫鈉、30%H2O2溶液、鄰苯三酚、鄰二氮菲、磷酸氫二鈉（均為分析純）均購(gòu)自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，無(wú)水乙醇、鹽酸、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇（均為分析純）均購(gòu)自云南楊林工業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為超純水。

1.3 細(xì)胞

正常人L02肝細(xì)胞株由中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所提供。

2 方法

2.1 滇黃芩莖葉乙醇提取物和不同溶劑萃取部位萃取物的制備

稱取干燥的滇黃芩莖葉400 g，加入95%乙醇3 200 mL，加熱回流提取3次，提取時(shí)間分別為2、1、1 h，減壓過(guò)濾，合并提取液，減壓蒸餾回收乙醇，干燥，得到滇黃芩莖葉乙醇提取物30.72 g（得率7.68%）。取上述乙醇提取物25 g，用水重懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，分別得到石油醚萃取物4.03 g（得率16.12%）、乙酸乙酯萃取物9.16 g（得率36.64%）、正丁醇萃取物3.42 g（得率13.68%）。

2.2 抗氧化試驗(yàn)

2.2.1 樣品溶液的配制 分別稱取滇黃芩莖葉乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和Vc各0.05 g，加水20 mL，超聲（功率200 W，頻率53 kHz）處理5 min，濾過(guò)，濾液用水定容于50 mL量瓶中，配制成質(zhì)量濃度均為1.0 g/mL（以提取物或Vc質(zhì)量計(jì)，下同）的母液，備用。臨用時(shí)用水稀釋至所需濃度，濃度按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。

2.2.2 對(duì)羥基自由基的清除能力的檢測(cè) 參考文獻(xiàn)[12]方法，在10 mL具塞試管中，分別加入質(zhì)量濃度分別為0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg/mL（乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和Vc）或0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL（乙醇提取物、石油醚萃取物）的樣品溶液和0.75 mmol/L FeSO4·7H2O溶液各1 mL，再加入0.75 mmol/L鄰二氮菲溶液和0.01%H2O2溶液各1 mL，于37 ℃保溫1 h，取出，使用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在536 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（An′）;另以水替代H2O2溶液同法檢測(cè)吸光度（An），以水替代樣品溶液同法檢測(cè)吸光度（A0′），以水替代樣品溶液和H2O2溶液同法檢測(cè)吸光度（A0）。以Vc作為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，取平均值，計(jì)算羥基自由基清除率：羥基自由基清除率（%）=[1-（An-An′）/（A0-A0′）]×100%。以清除率（y，%）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）。

2.2.3 對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力的檢測(cè) 參考文獻(xiàn)[13]方法，在10 mL具塞試管中，分別加入質(zhì)量濃度分別為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07 mg/mL（Vc）或0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL（乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物）或1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL（乙醇提取物、石油醚萃取物）的樣品溶液1 mL、0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液（pH 8.2）4.5 mL，在25 ℃下恒溫水浴20 min，再加入3 mol/L的鄰苯三酚溶液0.5 mL，迅速混勻后于37 ℃下保溫5 min，立即加入濃鹽酸（8 mol/L）2滴終止反應(yīng)，使用紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)在425 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（A1）;另以水替代鄰苯三酚溶液同法檢測(cè)吸光度（A2），以水替代樣品溶液同法檢測(cè)吸光度（A0）。以Vc作為對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，取平均值，計(jì)算超氧陰離子自由基清除率：超氧陰離子自由基清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%。按“2.2.2”項(xiàng)下方法計(jì)算IC50。

2.2.4 對(duì)DPPH自由基的清除能力的檢測(cè) 參考文獻(xiàn)[14]方法，在10 mL具塞試管中，分別加入質(zhì)量濃度分別為0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006 mg/mL（Vc）或0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07 mg/mL（乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物）的樣品溶液和0.125 mmol/L DPPH溶液各2 mL，混勻，于37 ℃水浴中反應(yīng)30 min，使用紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)在517 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（A1）;以無(wú)水乙醇替代DPPH溶液同法檢測(cè)吸光度（A2），以無(wú)水乙醇替代樣品溶液同法檢測(cè)吸光度（A0）。以Vc作為對(duì)照，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，取平均值，計(jì)算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%。按“2.2.2”項(xiàng)下方法計(jì)算IC50。

2.3 降脂試驗(yàn)

2.3.1 供試品藥液的配制 分別精密稱滇黃芩莖葉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物（根據(jù)抗氧化活性結(jié)果選擇樣品，其中石油醚萃取物抗氧化活性欠佳，故不進(jìn)行降脂試驗(yàn)）各2.0 g，用二甲基亞砜（DMSO）溶解配制成質(zhì)量濃度均為1 mg/mL的母液，再用RPMI- 1640培養(yǎng)液將其稀釋成100、50 μg/mL的供試品藥液。同法將非諾貝特（陽(yáng)性對(duì)照）配制成質(zhì)量濃度為20 μg/mL的供試品藥液。濃度按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。

2.3.2 培養(yǎng)液和造模液的配制 （1）含0.2%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液：將胎牛血清1 mL和青霉素-鏈霉素雙抗溶液5.6 mL加入至RPMI-1640培養(yǎng)液500 mL中，即得含0.2%胎牛血清和1%雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)液。（2）含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液：將胎牛血清55 mL和青霉素-鏈霉素雙抗溶液5.6 mL加入至RPMI-1640培養(yǎng)液500 mL中，即得含10%胎牛血清和1%雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)液。（3）10%醫(yī)用脂肪乳造模液：將醫(yī)用脂肪乳10 mL加入至含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液90 mL中，即得。

2.3.3 脂肪變性L02肝細(xì)胞模型的建立 參考文獻(xiàn)方法[15]，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的L02肝細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化，按5×105個(gè)/孔接種于6孔板中，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱及飽和濕度條件（培養(yǎng)條件下同）下培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至80%融合時(shí)，用含0.2%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液進(jìn)行饑餓處理24 h，使細(xì)胞周期同步化，隨后每孔加入10%醫(yī)用脂肪乳造模液2 mL，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，以建立脂肪變性L02肝細(xì)胞模型。

2.3.4 分組、給藥與處理 將細(xì)胞周期同步化后的細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組、非諾貝特組和提取物/萃取物高、低濃度組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。除正常對(duì)照組細(xì)胞在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h外，其余各組細(xì)胞均按“2.3.3”項(xiàng)下方法建模。建模后，正常對(duì)照組和模型組細(xì)胞分別加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液2 mL，非諾貝特組和提取物/萃取物高、低濃度組細(xì)胞分別加入“2.3.1”項(xiàng)下供試品藥液2 mL。培養(yǎng)24 h后，用PBS清洗細(xì)胞2～3次，收集細(xì)胞并置于1.5 mL離心管中，以2 000 r/min離心3 min，棄上清液，沉淀加入2%Triton X-100試劑30 μL，反復(fù)凍融3次，待細(xì)胞充分裂解后，于4 ℃下以5 000 r/min離心10 min，取上清液，按生化法以酶標(biāo)儀測(cè)定TC和TG的含量，具體操作按試劑盒說(shuō)明書操作。

2.4 數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)圖和回歸分析采用GraphPad Prism 5.0軟件處理，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 18.0軟件完成。結(jié)果均以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)羥基自由基清除能力的影響

滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)羥基自由基均有不同程度的清除能力，其清除率有隨質(zhì)量濃度增加而升高的趨勢(shì)。其中，滇黃芩莖葉乙醇提取物和石油醚萃取物對(duì)羥基自由基的清除能力均弱于Vc，而其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)羥基自由基的清除能力均強(qiáng)于Vc。各提取物/萃取物清除能力強(qiáng)弱（即IC50由小到大）排序?yàn)椋赫〈驾腿∥?乙酸乙酯萃取物>Vc>乙醇提取物>石油醚萃取物?；貧w分析結(jié)果顯示，滇黃芩莖葉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的質(zhì)量濃度與清除率的相關(guān)系數(shù)（R 2）均大于0.9，表明其對(duì)羥基自由基的清除能力與質(zhì)量濃度之間具有良好的線性關(guān)系。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)羥基自由基清除能力的影響見(jiàn)圖1，回歸分析結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)超氧陰離子自由基清除能力的影響

滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)超氧陰離子自由基均有不同程度的清除能力，其清除率有隨質(zhì)量濃度增加而升高的趨勢(shì)，但當(dāng)乙醇提取物和石油醚萃取物的質(zhì)量濃度≥4 mg/mL時(shí)，其清除率上升減慢。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力強(qiáng)弱（即IC50由小到大）排序?yàn)椋篤c>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物。回歸分析結(jié)果顯示，滇黃芩莖葉乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的質(zhì)量濃度與清除率的R 2均大于0.9，表明其對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力與質(zhì)量濃度之間具有良好的線性關(guān)系。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)超氧陰離子自由基清除能力的影響見(jiàn)圖2，回歸分析結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)DPPH自由基均有不同程度的清除能力，其清除率有隨質(zhì)量濃度增加而升高的趨勢(shì)。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)DPPH自由基的清除能力強(qiáng)弱（即IC50由小到大）排序?yàn)椋篤c>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>乙醇提取物>石油醚萃取物?；貧w分析結(jié)果顯示，滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位的質(zhì)量濃度與清除率的R 2均大于0.9，表明其對(duì)DPPH自由基的清除能力與質(zhì)量濃度之間具有良好的線性關(guān)系。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)DPPH自由基清除能力的影響見(jiàn)圖3，回歸分析結(jié)果見(jiàn)表3。

3.4 滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)脂肪變性L02肝細(xì)胞中TC、TG水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞中TC、TG含量均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組細(xì)胞中TC、TG含量均顯著降低（P<0.01），說(shuō)明滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位均能顯著降低脂肪變性L02細(xì)胞中的TC、TG水平，降脂活性強(qiáng)弱（即TC、TG變化程度）排序?yàn)椋赫〈驾腿∥铮ǖ蜐舛龋址侵Z貝特>乙酸乙酯萃取物（高濃度）>乙醇提取物（高濃度）>正丁醇萃取物（高濃度）>乙酸乙酯萃取物（低濃度）>乙醇提取物（低濃度）。滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)脂肪變性L02肝細(xì)胞中TG、TC含量的影響見(jiàn)表4。

4 討論

自由基是機(jī)體正常代謝的產(chǎn)物，其含量輕微增加可提升機(jī)體抗氧化的能力;但當(dāng)自由基含量過(guò)高時(shí)，其會(huì)攻擊細(xì)胞膜造成機(jī)體的損傷[16]。近年來(lái)醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，諸多疾病，例如惡性腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、脂代謝異常等都與人體內(nèi)異常積聚的自由基有關(guān)[17-18]。中藥含有的黃酮類、酚類、皂苷、多糖等化學(xué)成分具有良好的抗氧化活性，尋找天然抗氧化劑來(lái)清除人體內(nèi)的自由基從而預(yù)防相關(guān)疾病的發(fā)生已成為研究熱點(diǎn)之一[19-21]。

本研究采用羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基清除法對(duì)滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位的抗氧化能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，滇黃芩莖葉乙醇提取物及其不同溶劑萃取部位對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基均表現(xiàn)出不同程度的清除作用，并呈一定的量效關(guān)系趨勢(shì)。其中，正丁醇和乙酸乙酯萃取物的抗氧化作用較強(qiáng)（IC50均相對(duì)較?。?，提示滇黃芩莖葉抗氧化活性成分可能主要集中在正丁醇和乙酸乙酯部位。本文同時(shí)以脂肪變性L02細(xì)胞中TC、TG含量的變化來(lái)評(píng)價(jià)具有顯著抗氧化活性的乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的降脂活性，并選擇了常用于治療高TG血癥、血脂異常、糖尿病等代謝性疾病的非諾貝特為陽(yáng)性藥物[22]。研究表明，滇黃芩莖葉乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物均能顯著降低脂肪變性L02細(xì)胞中TC、TG含量，具有明顯的降脂活性。

綜上所述，滇黃芩莖葉乙酸乙酯和正丁醇部位的抗氧化和降脂活性較強(qiáng)，可作為探究滇黃芩莖葉抗氧化和降脂活性部位繼續(xù)研究。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第65卷：第2分冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社，2016：192.

[ 2 ] 楊本雷，于惠祥.中國(guó)彝族藥學(xué)[M].昆明：云南民族出版社，2004：78.

[ 3 ] 蘭茂.滇南本草[M].昆明：云南人民出版社，1976：466.

[ 4 ] 鄭進(jìn)，張超，錢子剛.云南民族醫(yī)藥大辭典[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2019：673.

[ 5 ] 付勝男，虎春艷，劉海鷗，等.滇黃芩地上部分化學(xué)成分的分離鑒定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（10）：55-59.

[ 6 ] 龐溢媛，周玉枝，宋佳，等.基于1H-NMR血清和肝臟代謝組學(xué)的黃芩葉抗衰老作用研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（1）：74-82.

[ 7 ] 馮雪，周玉枝，柴建新，等.基于1H-NMR代謝組學(xué)的黃芩茶與黃芩葉水提物延長(zhǎng)果蠅壽命研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（6）：1214-1221.

[ 8 ] 劉海鷗，虎春艷，趙聲蘭，等.滇黃芩總黃酮酶解超聲提取及抗氧化活性研究[J].中國(guó)釀造，2016，35（1）：110-114.

[ 9 ] 何曉山，周寧娜，林青，等.滇黃芩總黃酮抗心律失常作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（4）：508-510.

[10] 何曉山，彭林，林青，等.滇黃芩總黃酮對(duì)豚鼠心肌細(xì)胞電壓依賴性鈉通道電流的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（6）：192-195.

[11] 何春年，彭勇，肖偉，等.黃芩茶的應(yīng)用歷史與研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（11）：3-7、19.

[12] 楊皓彬，楊娜，柏雪，等.白茶中茶多酚提取工藝及抗氧化活性的研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2014，14（12）：24-31.

[13] 王君，陳新，張兆英，等.二色補(bǔ)血草生物活性成分提取及抗氧化功能研究[J].植物生理學(xué)報(bào)，2019，55（12）：1785-1796.

[14] 陳石梅，黃比翼，黃鎖義.草果醇提物不同極性部位的體外抗氧化活性研究[J].中國(guó)藥房，2020，31（8）：953-956.

[15] 羅燕，和興萍，李雪，等.幾種細(xì)胞脂肪變性模型的建立與比較分析[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2017，35（8）：2074-2077.

[16] 樊岫珊.羥基自由基誘導(dǎo)DNA損傷機(jī)理研究進(jìn)展[J].生物學(xué)雜志，2017，34（1）：80-84.

[17] 張蕊，仝媛媛，陳龍，等.天然來(lái)源的抗氧化劑的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].山東化工，2020，49（22）：48-52.

[18] 馬丹丹，汪雯翰，薛蓓，等.樺褐孔菌降糖活性成分及治療糖尿病機(jī)制研究進(jìn)展[J].南京師大學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2019，42（4）：111-117.

[19] 劉玉婷，李井雷.多糖體外抗氧化活性研究進(jìn)展[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2019，40（6）：214-219.

[20] 李婧雯，包怡紅.不同溶劑的蒲公英根提取物的抗氧化活性及降糖能力比較分析[J].現(xiàn)代食品科技，2020，36（5）：64-72.

[21] SAGAR NA，PAREEK S，GONZALEZ-AGUILAR GA.Quantification of flavonoids，total phenols and antioxidant properties of onion skin：a comparative study of fifteen Indian cultivars[J]. J Food Sci Tech，2020，57（7）：2423- 2432.

[22] 張丹，周波，鄧溢，等.非諾貝特對(duì)非酒精性脂肪性肝病小鼠模型腸道菌群多樣性的影響[J].臨床肝膽病雜志，2020，36（4）：829-834.

（收稿日期：2020-09-13 修回日期：2020-12-13）

（編輯：鄒麗娟）