篩選重要生物標志物用于卵巢癌早期診斷和預(yù)后評估

劉 真，及霄楊，王 秀，吳晶晶，王秀麗

(1.滄州市中心醫(yī)院檢驗科，河北 滄州 061001；2.寧晉縣中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 寧晉 055550；3.唐山市婦幼保健院婦科，河北 唐山 063000)

卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤，由于卵巢位于腹腔深部，早期臨床常缺乏特異性癥狀與體征，診斷相當困難[1]。據(jù)統(tǒng)計[2]，70%的卵巢癌患者一經(jīng)診斷即為晚期，其治療后復(fù)發(fā)率高。糖類抗原125(CA125)是目前公認的卵巢癌最有價值的標志物，可用于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后卵巢癌高危患者篩查[3]。卵巢癌的個體化治療是改善卵巢癌預(yù)后的重要途徑，而準確的預(yù)后預(yù)測是個體化治療的前提[4]。除了血清標志物如CA125、人附睪蛋白4(HE4)等對卵巢癌預(yù)后有重要意義外，腫瘤標志物在卵巢癌組織中的預(yù)后價值也受到了廣泛關(guān)注[5]。為此，本研究通過比較卵巢癌與卵巢良性病變患者以及卵巢癌不同臨床分期、預(yù)后的生物學(xué)標志物與外周血細胞水平，篩選出用于卵巢癌早期診斷與預(yù)后評估的重要生物標志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年4月滄州市中心醫(yī)院收治的卵巢癌患者140例為觀察組，年齡34～65歲，均經(jīng)臨床、組織病理、免疫組織化學(xué)、影像學(xué)等檢查確診；其中國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)臨床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期21例、Ⅲ期45例、Ⅳ期59例，預(yù)后病情完全緩解21例、部分緩解37例、病情穩(wěn)定48例、疾病進展34例。納入標準：1)基本情況可，預(yù)期生存期超過6個月；2)原發(fā)腫瘤尚未發(fā)生轉(zhuǎn)移；3)泌尿生殖系統(tǒng)無嚴重疾病史或手術(shù)史者。排除標準：1)嚴重內(nèi)科基礎(chǔ)疾患如冠心病、心力衰竭等；2)肝腎功能不全者；3)合并其他器官惡性腫瘤者。

選擇同期在本院因卵巢良性病變行手術(shù)切除患者140例為對照組，年齡34～63歲。

2組患者的年齡、空腹血糖、體重指數(shù)(BMI)、受教育年限等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，觀察組Karnofsky功能狀態(tài)評分(KPS評分)顯著高于對照組(P<0.01)，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 檢測方法

采用含有促凝劑的真空采血管，抽取受檢者空腹血3～4 mL，離心分離血清，采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)，ArchitectI2000全自動發(fā)光免疫分析與專用配套試劑(美國雅培公司)檢測癌胚抗原(CEA)；應(yīng)用上?？仆锟萍加邢薰咎峁┑腍D-2001A生物芯片檢測儀檢測CA125、糖類抗原724(CA724)；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測HE4、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)。入組患者均禁食12 h后采靜脈血，血常規(guī)檢測外周血WBC計數(shù)、CD8+計數(shù)、CD4+計數(shù)，并計算CD4+/CD8+比值。

1.3 觀察指標

比較2組各生物標志物(包括HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA等)含量與外周血細胞計數(shù)情況(包括WBC、CD8+、CD4+計數(shù)和CD4+/CD8+比值)；比較觀察組不同F(xiàn)IGO臨床分期患者各生物標志物含量與外周血細胞計數(shù)；比較觀察組不同預(yù)后患者各生物標志物含量與外周血細胞計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組生物標志物含量比較

觀察組HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指標含量均顯著高于對照組(P<0.01)，見表2。

表2 2組生物標志物含量比較

2.2 2組外周血細胞計數(shù)比較

觀察組WBC、CD8+計數(shù)顯著高于對照組(P<0.01)，CD4+計數(shù)和CD4+/CD8+比值顯著低于對照組(P<0.01)，見表3。

表3 2組外周血細胞計數(shù)的比較

2.3 卵巢癌患者不同F(xiàn)IGO臨床分期生物標志物含量比較

卵巢癌不同F(xiàn)IGO臨床分期患者各生物標志物含量比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且隨著臨床分期級別的升高，HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA含量均呈增加趨勢，見表4。

表4 卵巢癌不同F(xiàn)IGO臨床分期生物標志物含量的比較

2.4 卵巢癌患者不同F(xiàn)IGO臨床分期外周血細胞計數(shù)比較

卵巢癌不同F(xiàn)IGO臨床分期患者外周血細胞計數(shù)各指標比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且隨著臨床分期級別的升高，WBC、CD8+計數(shù)呈增加趨勢，CD4+計數(shù)、CD4+/CD8+比值呈降低趨勢，見表5。

表5 卵巢癌不同F(xiàn)IGO臨床分期外周血細胞計數(shù)比較

2.5 卵巢癌患者不同預(yù)后生物標志物含量比較

卵巢癌不同預(yù)后患者各生物標志物含量比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且預(yù)后越差，HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA含量越高。見表6。

表6 卵巢癌不同預(yù)后生物標志物含量的比較

2.6 卵巢癌患者不同預(yù)后外周血細胞計數(shù)比較

卵巢癌不同預(yù)后患者外周血細胞計數(shù)各指標比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且預(yù)后越差，WBC、CD8+計數(shù)越高，CD4+計數(shù)、CD4+/CD8+比值越低。見表7。

表7 卵巢癌不同預(yù)后外周血細胞計數(shù)比較

3 討論

卵巢癌是導(dǎo)致女性死亡的常見惡性腫瘤之一。其特點包括發(fā)病率高、死亡率高、早期診斷困難、5年生存率低、易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。據(jù)統(tǒng)計[6]，卵巢癌患者FIGO臨床分期Ⅰ期5年生存率約為90%，Ⅳ期生存率約為13%。目前，對于卵巢癌的臨床治療還沒有特別有效的方法。卵巢癌的早期診斷是決定患者生存的最重要因素。

有研究[7]顯示，CA125水平與卵巢癌的大小和分期、預(yù)后密切相關(guān)，預(yù)后越差，血清CA125水平越高，表明CA125可用于術(shù)后疾病監(jiān)測，以確定患者是否有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的跡象。CA724對漿液性囊腺癌的敏感性低于CA125，但對黏液性囊腺癌有較高的診斷價值。術(shù)后CA724水平是否有助于判斷預(yù)后尚不清楚[8]。HE4是人類附睪上皮細胞中的一種因子，被認為是一種與精子成熟相關(guān)的特異性附睪蛋白。有研究[9-11]表明HE4在不同組織中有不同的表達。在正常女性中，HE4在唾液腺、近端氣管上皮和生殖道中低表達，但在正常卵巢組織中不表達。IL-6與多種病理狀態(tài)有關(guān)。作為細胞因子之一，它能直接影響體內(nèi)血管生成過程和內(nèi)皮細胞的遷移與增殖，能有效提高卵巢癌細胞的存活率及腫瘤組織和腹水中的免疫細胞的浸潤過程從而提高患者對化療的抵抗力。IL-6水平的升高在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用[12-16]。IL-17可以通過多種細胞因子的協(xié)同作用來增強炎癥反應(yīng)。IL-17可通過血管內(nèi)皮生長因子誘導(dǎo)血管生成，上調(diào)成纖維細胞的分泌，從而促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和生長[17-20]。CEA作為一種廣譜腫瘤標志物，常被用于肺癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤的臨床診斷。在許多腫瘤患者的血清中高表達[21]。本研究結(jié)果顯示，觀察組HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指標含量顯著高于對照組，Ⅳ期患者HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指標含量顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者，疾病進展患者HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指標含量顯著高于完全緩解、部分緩解、病情穩(wěn)定患者，表明HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指標含量對卵巢癌的臨床治療具有重要指導(dǎo)意義。

免疫功能是指機體對疾病的抵抗力，機體的免疫功能是在淋巴細胞、單核細胞和其他有關(guān)細胞及其產(chǎn)物的相互作用下完成的，也是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分[22]。健康人體的免疫功能包括對外界傳染源的免疫保護功能，機體清除受損細胞的能力和維持內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，能夠及時發(fā)現(xiàn)和清除細胞[23]。人體免疫主要包括細胞免疫和體液免疫，以細胞免疫為主。有研究[24-27]表明，T淋巴細胞在免疫耐受和腫瘤免疫逃逸中均起重要作用，主要表現(xiàn)為CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平下降，CD8+水平升高。因此，通過測定T淋巴細胞水平可反映腫瘤微環(huán)境的免疫情況。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者WBC、CD8+計數(shù)顯著高于對照組，CD4+計數(shù)和CD4+/CD8+比值顯著低于對照組；Ⅳ期患者WBC、CD8+計數(shù)顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者，CD4+計數(shù)和CD4+/CD8+比值顯著低于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者；疾病進展患者WBC、CD8+計數(shù)顯著高于完全緩解、部分緩解、病情穩(wěn)定患者，CD4+計數(shù)和CD4+/CD8+比值顯著低于完全緩解、部分緩解、病情穩(wěn)定患者。結(jié)果表明，關(guān)注卵巢癌患者外周血中CD4+/CD8+比值對其治療重要意義。

綜上所述，生物標志物HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA以及外周血中CD4+/CD8+比值可用于卵巢癌早期診斷和預(yù)后評估。本研究創(chuàng)新之處在于，基于對象患病情況、臨床分期、預(yù)后，深入比較各組對象的外周血細胞計數(shù)、生化指標含量。但是該研究亦有一定局限性，首先，單中心研究納入病例數(shù)相對較少，缺乏大規(guī)模流行調(diào)查數(shù)據(jù)支持；其次，本研究僅對各項指標進行了單因素比較分析，尚未結(jié)合回歸模型對多個因素聯(lián)合應(yīng)用結(jié)果進行評估，后續(xù)研究將在該結(jié)果基礎(chǔ)上進行進一步的研究。