miR-101在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

許海艷，張瑜娟，閔衛(wèi)平

(南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室，南昌 330006)

微小RNA(microRNA,miRNA)是一類高度保守的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，可與靶mRNA不同程度結(jié)合，調(diào)控mRNA的翻譯或降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。其失調(diào)與人類多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后情況密切相關(guān)[1]。其中，hsa-miR-101長度為21個核苷酸(nt)，由分別位于人類1號和9號染色體上75 個nt的pre-mir-101-1和79nt的pre-mir-101-2加工生成，它們在不同的物種之間均表現(xiàn)為高度保守的表達(dá)[2]。有研究[3]表明，miR-101在肺癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、肝癌和骨肉瘤等惡性腫瘤中表達(dá)顯著下調(diào)，提示其在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本文對近5年國內(nèi)外關(guān)于miR-101在惡性腫瘤中的研究進(jìn)行綜述，以期為惡性腫瘤的診斷和潛在治療靶點(diǎn)提供參考。

1 miRNA的生物學(xué)特性

miRNA是廣泛存在于動植物及人類細(xì)胞中的一類高度保守的小分子RNA，通過結(jié)合靶mRNA的3′端非翻譯區(qū)(3′UTR)，抑制靶mRNA的翻譯或降解，調(diào)控特定靶基因的表達(dá)。最初觀察到的miRNA是在線蟲中的lin-4和let-7，線蟲的發(fā)育由這些基因所調(diào)控，隨后發(fā)現(xiàn)miRNA存在于包括從線蟲到果蠅以及人的多種組織中[4]。miRNA的生成步驟包括：首先在核內(nèi)RNA聚合酶Ⅱ作用下轉(zhuǎn)錄為300～1000 個nt的pri-miRNA,進(jìn)而由Drosha-DGCR8加工轉(zhuǎn)變?yōu)?0～90個nt具有其特征性莖環(huán)結(jié)構(gòu)的pre-miRNA，出核時再經(jīng)Dicer酶剪切，形成長度為19～25 個nt的成熟miRNA[5]。目前，發(fā)現(xiàn)人類的miRNA有700多種，直接參與哺乳動物至少50%蛋白編碼基因的表達(dá)。miRNA不僅參與器官形成、個體發(fā)育和物質(zhì)代謝等生理過程，還與病毒感染和各種腫瘤的發(fā)生發(fā)展等病理過程密切相關(guān)[6]。

2 miRNA與腫瘤的關(guān)系

miRNA種類繁多，功能復(fù)雜，可通過各種信號途徑參與多種腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲、轉(zhuǎn)移以及凋亡，而且與化療、放療、靶向治療等的抗腫瘤療效密切相關(guān)。此外，部分腫瘤相關(guān)miRNA負(fù)載量的高低可作為患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素，可預(yù)測腫瘤的復(fù)發(fā)及治療效果。從已證實(shí)了功能的miRNA來看，它們實(shí)際上可作為致癌基因或抑癌基因發(fā)揮作用。如miR-373在腎細(xì)胞癌[7]、食管鱗狀細(xì)胞癌[8]、肺癌[9]、口腔鱗狀細(xì)胞癌[10]中，通過不同作用機(jī)制促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生。其他的miRNA如 miR-96、miR-32、miR-570、miR-23、miR-106等，在腫瘤細(xì)胞增殖、生物信號通路傳導(dǎo)及細(xì)胞凋亡中有著重要作用。此外，有些 miRNA如miR-101、miR-31、miR-34、miR-93、miR-141、miR-181、miR-218、miR-429等，它們可抑制原癌基因過度激活、促進(jìn)抑癌基因表達(dá)，從而起到抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用[11]。

3 miRNA在腫瘤中的調(diào)控機(jī)制

miRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)非常復(fù)雜，一個miRNA可以與一個或多個mRNA結(jié)合，有些miRNA有多個與同一家族中不同mRNA結(jié)合的位點(diǎn)。目前，對miRNA調(diào)控腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究主要集中在如下兩方面: 一是miRNA直接調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，或通過改變DNA甲基化或組蛋白修飾水平等途徑參與構(gòu)成表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)的形成，從而發(fā)揮癌基因、抑癌基因的作用；二是miRNA通過調(diào)控細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)降解、新生血管形成、細(xì)胞骨架蛋白重構(gòu)、細(xì)胞表面分子表達(dá)、腫瘤微環(huán)境改變等多個環(huán)節(jié)，參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程[6]。

STAT3是一種致癌基因，而p-STAT3是激活STAT3信號通路的重要指標(biāo)。符策君[12]在研究中發(fā)現(xiàn)，miR-21的過表達(dá)可以直接上調(diào)STAT3信號通路中的p-STAT3、Bcl-2、Bcl-xl來促進(jìn)腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖及遷移作用。BU等[13]將miR-1297轉(zhuǎn)染至A549和NCI-H460中，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞的生存能力有了很大提高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-1297 的作用靶點(diǎn)存在于 PTEN/Akt/Skp2 信號通路之中，通過下調(diào)腫瘤抑制基因PTEN，上調(diào)Skp2，誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。表觀遺傳指的是在核酸序列水平上不涉及基因組變化的遺傳改變。表觀遺傳學(xué)機(jī)制包括組蛋白修飾、DNA和非編碼RNA的甲基化等，可調(diào)節(jié)染色質(zhì)重塑和基因表達(dá)，參與人類疾病。目前認(rèn)為miRNA的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)受表觀遺傳學(xué)機(jī)制，特別是受DNA甲基化的嚴(yán)密調(diào)控[14]。如miR-124家族成員通過靶向CDK6，引起Rb基因的磷酸化減少，并抑制細(xì)胞的增殖活性，其在結(jié)直腸癌、急性淋巴細(xì)胞性白血病和宮頸癌等腫瘤中低表達(dá)，導(dǎo)致基因發(fā)生高甲基化修飾[15]。

腫瘤轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多基因及其產(chǎn)物參與的復(fù)雜過程，包括細(xì)胞黏附力 降低、ECM降解、遷移能力增強(qiáng)、血管生成、凋亡抑制和免疫逃逸等多個環(huán)節(jié)。miRNA在腫瘤轉(zhuǎn)移過程各個關(guān)鍵步驟中都扮演著重要的角色[16]。LI等[17]研究表明外泌體miR-21-5p通過靶向SMAD7激活TGF-β/Smad途徑來誘導(dǎo)胃癌的PMC的間皮向間充質(zhì)轉(zhuǎn)變MMT并促進(jìn)癌癥腹膜的擴(kuò)散。miR-30a可作用于鋅指轉(zhuǎn)錄抑制因子，促進(jìn)間葉標(biāo)志物N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)上升，誘導(dǎo)乳腺癌EMT發(fā)生[18]。miR-134可通過靶向VEGF/VEGFR1信號通路抑制骨肉瘤的血管生成[19]。

4 miR-101與惡性腫瘤

4.1 miR-101與肺癌

肺癌是男性中致死率最高的癌癥，也是導(dǎo)致女性死亡的第2大常見癌癥(僅次于乳腺癌),主要有2種類型：小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，其中NSCLC占肺癌的85%，主要包括肺腺癌與肺鱗癌[20]。肺癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，缺乏有效的對因治療方法，因此尋找靈敏度更高的分子標(biāo)志物是目前待解決的問題之一[21]。

環(huán)狀RNA(circRNAs)是一類新的非編碼RNA，具有獨(dú)特的特性以及多種生理和病理功能，在各種類型的癌癥和化學(xué)敏感性中起著至關(guān)重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在NSCLC的組織、血清和細(xì)胞中Circ-PIP5K1A和ABCC1過表達(dá)，而miR-101下調(diào)。敲除circ-PIP5K1A抑制了NSCLC細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲，并促進(jìn)了細(xì)胞凋亡和順鉑敏感性，而miR-101敲低逆轉(zhuǎn)了沉默circ-PIP5K1A產(chǎn)生的抑制NSCLC進(jìn)展和促進(jìn)順鉑敏感性的作用。此外，ABCC1是miR-101的下游靶標(biāo)，miR-101的過表達(dá)通過靶向ABCC1抑制了NSCLC細(xì)胞的進(jìn)程并增加了順鉑敏感性。所以，circ-PIP5K1A通過miR-101正調(diào)控ABCC1表達(dá)，體外抑制circ-PIP5K1A可通過調(diào)節(jié)miR-101/ABCC1抑制NSCLC進(jìn)展并提高順鉑敏感性，為NSCLC的治療提供了新途徑[22]。郭雪茹等[23]探究miR-101通過靶向成纖維細(xì)胞生長因子2(FGF2)抑制NSCLC細(xì)胞遷移和侵襲的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)miR-101在NSCLC細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)，而過表達(dá)miR-101可抑制其靶基因FGF2的表達(dá)，抑制NSCLC細(xì)胞的EMT及ERK信號通路，進(jìn)而減弱NSCLC細(xì)胞的侵襲遷移能力。李慧敏等[24]發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中與癌旁正常組織相比miR-101的表達(dá)量顯著降低，而miR-101通過結(jié)合CREB1的3′UTR抑制CREB1的表達(dá)，使肺癌組織中CREB1 mRNA表達(dá)量顯著升高。該結(jié)果表明miR-101通過抑制CREB1表達(dá)抑制肺癌的發(fā)展，可能成為肺癌診斷及治療的新靶標(biāo)。

4.2 miR-101與肝癌

肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率都較高，其中最常見的類型是肝細(xì)胞癌(HCC)。HBV與HCV的感染、黃曲霉素B1的攝入、肝硬化、污染的水源、家族遺傳、化學(xué)致癌物質(zhì)都是誘發(fā)此癌癥的危險因素，這些危險因素的作用通過最終沉默抑癌基因的表達(dá)和激活致癌基因的表達(dá)來影響肝癌的發(fā)生發(fā)展[25]。

miR-101-3p可通過與PYGB的3′UTR結(jié)合而在轉(zhuǎn)錄后抑制PYGB的表達(dá)，而PYGB的過表達(dá)抑制miR-101-3p對HCC細(xì)胞增殖，遷移和侵襲的調(diào)節(jié)作用。該結(jié)果表明，miR-101-3p/PYGB軸在肝癌中具有重要作用，而PYGB可以作為改善HCC患者預(yù)后的新型預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)[26]。XIAO等[27]合成了新型的靶向HCC的阿霉素(DOX)遞送系統(tǒng)，稱為HCSP4-Lipo-DOX-miR101，可以引起抗DOX的HCC細(xì)胞死亡和生長抑制，其中HCSP4是一種12-aa肽，能與HCC細(xì)胞和組織結(jié)合，具有特異性和敏感性，基于miR-101對MDR相關(guān)基因的靶向作用，使HCSP4-Lipo-DOX-miR101可以作為有希望的新型靶向遞送系統(tǒng)，以提高耐藥肝細(xì)胞癌的治療效率。肝癌干細(xì)胞(LCSC)是促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的細(xì)胞決定因素。進(jìn)一步的研究表明，ANXA2是miR-101的新型靶標(biāo)，ANXA2在加速細(xì)胞周期和增強(qiáng)LCSC的遷移和侵襲能力方面起著至關(guān)重要的作用。升高的ANXA2增強(qiáng)了細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)的激活，該激酶調(diào)節(jié)SOX2和細(xì)胞周期相關(guān)的激酶，而且ERK磷酸化抑制了早期生長反應(yīng)1(EGR1)的表達(dá)，后者又抑制了miR-101的轉(zhuǎn)錄。另外，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，miR-101的過表達(dá)對LCSCs異種移植腫瘤的生長以及ANXA2敲低產(chǎn)生了有效的抑制作用。該研究結(jié)果表明，LCSC中存在一種新型的調(diào)控環(huán)miR-101/ANXA2/EGR1，可能成為肝癌的潛在治療靶標(biāo)[28]。

4.3 miR-101與胃癌

胃癌起源于胃黏膜上皮，是我國最常見的惡性腫瘤之一，遺傳、環(huán)境、不同個體情況等因素在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，其癌變是一個多發(fā)展進(jìn)程，涉及到各類基因之間的改變，改變形式也多種多樣。目前，識別潛在靶點(diǎn)是胃癌治療的關(guān)鍵[29]。

有研究[30]表明，胃癌組織中miR-24的表達(dá)上調(diào)，而miR-101的表達(dá)下調(diào)，miR-24和miR-101可能促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移。幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染作為環(huán)境因素之一，其與胃癌發(fā)生、發(fā)展聯(lián)系密切[31]。袁錫裕等[32]檢測了72例胃癌患者(觀察組)和70例慢性淺表性胃炎患者(對照組)的Hp感染情況及血清中miR-101、miR204的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)觀察組血清 miR-101、miR-204表達(dá)水平均明顯低于對照組，2組Hp感染為陽性的患者血清 miR-101、miR-204表達(dá)水平均明顯低于Hp感染為陰性的患者，且計(jì)算出血清miR-101診斷胃癌的敏感度和特異度分別為71.35%和84.61%。該研究結(jié)果表明，血清中miR-101、miR-204 的表達(dá)水平在Hp感染為陽性以及病情程度較為嚴(yán)重的胃癌患者中明顯降低，其可作為胃癌診斷的新型標(biāo)志物。編碼E-鈣黏著蛋白的CDH1基因是一種腫瘤抑制基因，在腸型胃癌(IGC)中經(jīng)常發(fā)生變化。有研究者[33]發(fā)現(xiàn)，與正常對照相比，33位IGC患者中CDH1表達(dá)明顯下調(diào)，此外，miR-101、miR-26b和miR-200c明顯下調(diào)，且EZH2是miR-101和miR-26b的靶標(biāo)，在IGC中顯示出明顯的上調(diào)。觀察到EZH2過表達(dá)與CDH1，miR-101和miR-26b水平之間存在顯著的負(fù)相關(guān)。

4.4 miR-101與結(jié)直腸癌

大腸癌(CRC)是全球第四大致死性惡性腫瘤，也是全球第二大與癌癥相關(guān)的死亡率致死原因，其發(fā)病與生活方式、遺傳、大腸腺瘤等因素關(guān)系密切。高通量測序的發(fā)展使得能夠鑒定出多種用于診斷和治療各種類型癌癥的潛在生物標(biāo)志物，盡管已證明miR-101是結(jié)直腸癌的潛在生物標(biāo)志物，但其詳細(xì)機(jī)制仍未明確，值得進(jìn)一步研究[34]。

有研究[35]發(fā)現(xiàn)，miR-101在CRC組織和細(xì)胞中明顯下調(diào)，且miR-101可通過直接結(jié)合到Ras相關(guān)蛋白Rap1b的3’UTR使Rap1b表達(dá)的下調(diào)來抑制CRC的進(jìn)展，這可能是miR-101通過與Rap1b形成負(fù)反饋回路而參與CRC的抑制。另有研究[36]在觀察39個人類CRC組織和CRC細(xì)胞系(HT29和SW620)中發(fā)現(xiàn)，zeste同源物2(EZH2)的增強(qiáng)子(組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶)是miR-101的直接靶標(biāo)，且EZH2的過表達(dá)可促進(jìn)CRC細(xì)胞系遷移，這表明miR-101在CRC中起著抑癌作用，可能是CRC治療的潛在治療靶點(diǎn)。circVAPA被鑒定為潛在的功能性circRNA，可以促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖，遷移，侵襲并抑制細(xì)胞凋亡。有研究[37]采用熒光素酶報告基因測定證實(shí)了circVAPA和miR-101之間存在直接的相互作用，該研究表明，miR-101的上調(diào)可以逆轉(zhuǎn)circVAPA過表達(dá)的促腫瘤作用，抑制CRC進(jìn)展。

4.5 miR-101與胰腺癌

胰腺癌是一種惡性程度很高的消化道惡性腫瘤，是最具侵略性的惡性腫瘤之一，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。大多數(shù)胰腺癌診斷明確時已屬中晚期，5年生存率不到5%。最近對胰腺癌中miRNA表達(dá)譜的研究表明超過100種miRNA 異常表達(dá)[38]。

有研究[39-40]表明，厚樸酚在各種類型的癌癥中均抑制癌細(xì)胞的侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，這表明厚樸酚可能是對抗包括胰腺癌在內(nèi)的各種惡性腫瘤的有前途的活性化合物。WANG等[41]為了探索miR-101參與厚樸酚誘導(dǎo)的抗癌作用的機(jī)制，利用熒光素酶報告基因檢測證明了Mcl-1是miR-101的靶基因，miR-101可下調(diào)Mcl-1的表達(dá)。進(jìn)一步研究表明，厚樸酚抗癌作用是通過miR-101-Mcl-1軸實(shí)現(xiàn)的，且厚樸酚濃度依賴性抑制胰腺癌細(xì)胞的活力，可提高caspase-3活性和細(xì)胞凋亡率，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯在G0/G1期，有效抑制胰腺癌中的細(xì)胞侵襲。胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)被列為世界上第七大與癌癥相關(guān)的死亡的主要原因，而吉西他濱敏感性在PDAC治療中至關(guān)重要。ZHANG等[42]研究發(fā)現(xiàn)，SNHG14在胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，而miR-101在PDAC組織中顯著下調(diào)，SNHG14與miR-101呈負(fù)相關(guān)。SNHG14基因敲低和miR-101模擬都導(dǎo)致吉西他濱耐藥性(PDAC細(xì)胞活力的減弱和細(xì)胞凋亡率的提高)，以及自噬相關(guān)蛋白(如RAB5A和ATG4D)的減少。這些研究結(jié)果表明，SNHG14可以通過在吉西他濱治療中潛在地誘導(dǎo)細(xì)胞自噬來促進(jìn)PDAC細(xì)胞進(jìn)程，而miR-101可以通過抑制PDAC細(xì)胞的自噬來逆轉(zhuǎn)吉西他濱耐藥。SNHG14/miR-101/自噬軸顯示了其在PDAC細(xì)胞對吉西他濱耐藥中的潛在作用。

4.6 miR-101與婦科惡性腫瘤

卵巢癌(OvCa)是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性疾病之一。有研究[43]證明，miR-101抑制SKOV-3卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。有研究者[44]構(gòu)建出間充質(zhì)卵巢癌的lncRNA(長非編碼RNA)介導(dǎo)的競爭性內(nèi)源性RNA(ceRNA)網(wǎng)絡(luò)-PTAR，發(fā)現(xiàn)PTAR表達(dá)與間充質(zhì)OvCa樣品中ZEB1的表達(dá)水平呈正相關(guān)。同時，沉默miR-101促進(jìn)了細(xì)胞遷移，而miR-101的過表達(dá)通過ZEB1的調(diào)節(jié)抑制了OvCa細(xì)胞系中的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和細(xì)胞遷移。進(jìn)一步分析表明，通過調(diào)節(jié)miR-101，PTAR表達(dá)的增強(qiáng)促進(jìn)了EMT和轉(zhuǎn)移。綜上所述，該研究結(jié)果突顯了PTAR-miR-101-ZEB1軸在OvCa中的作用，這為預(yù)防OvCa轉(zhuǎn)移提供了新的策略。

子宮內(nèi)膜癌是女性中最常見的癌癥之一，占女性生殖系統(tǒng)所有惡性腫瘤的20%～30%。它主要發(fā)生在55～65歲左右的女性中，最近有年輕人感染的趨勢[45]。異常的血管生成與包括子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究[46]通過檢查了子宮內(nèi)膜癌患者中miR-101的表達(dá)水平和參與血管生成的因子，發(fā)現(xiàn)miR-101水平顯著降低，環(huán)氧合酶2(COX-2)顯著升高，且miR-101抑制劑對腫瘤生長的影響被COX-2抑制劑所抑制，確定了miR-101可通過環(huán)氧合酶2(COX-2)調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生，表明調(diào)節(jié)miR-101和COX-2的水平或其活性可能是子宮內(nèi)膜癌的潛在治療策略。

宮頸癌是原發(fā)于子宮頸組織的惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中發(fā)病率位居第三位，死亡率位居第四位，嚴(yán)重威脅著女性的健康和生命[47]。有研究[48]發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，宮頸癌組織中miR-101表達(dá)明顯降低，且JAK2表達(dá)升高。miR-101模擬物的轉(zhuǎn)染可顯著降低Caski細(xì)胞中JAK2和p-JAK2的表達(dá)，減少細(xì)胞增殖并增加細(xì)胞凋亡。這表明miR-101和JAK2之間存在針對性的調(diào)節(jié)關(guān)系，miR-101表達(dá)的降低和JAK2表達(dá)的升高在宮頸癌中起一定作用，而miR-101表達(dá)的升高則通過抑制JAK2的表達(dá)來抑制細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

4.7 miR-101與骨肉瘤

骨肉瘤(OS)是起源于間葉組織，以能產(chǎn)生骨樣組織的梭形基質(zhì)細(xì)胞為特征的骨骼系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤，約70%發(fā)病于膝關(guān)節(jié)周圍的股骨下端和脛骨上端，是兒童和青少年最常見的原發(fā)惡性骨腫瘤[49]。骨肉瘤惡性程度高、破壞性強(qiáng)，早期便可發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移，其發(fā)病機(jī)制與遺傳學(xué)密切相關(guān)，對放療具有抵抗性，故而尋找特異性分子標(biāo)志物與研發(fā)新的靶向藥物對其診療意義重大[50]。

LIN等[51]在檢測miR-101在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)時發(fā)現(xiàn)，miR-101在骨肉瘤標(biāo)本和人骨肉瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯降低，miR-101的過表達(dá)顯著抑制了骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。該研究還應(yīng)用螢光素酶報告基因分析法鑒定證實(shí)E盒結(jié)合鋅指蛋白2(ZEB2)是miR-101的直接靶標(biāo)，ZEB2的過表達(dá)可以挽救miR-101誘導(dǎo)的骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-101在骨肉瘤中被下調(diào)，并具有通過直接靶向ZEB2抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的能力，miR-101/ZEB2軸可能是未來骨肉瘤治療的有前途的治療策略。細(xì)胞外囊泡(EV)作為細(xì)胞間通信的新型介體，能夠穩(wěn)定轉(zhuǎn)移治療性miRNA，在癌癥治療的miRNA傳遞系統(tǒng)具有廣闊的前景。另外，由于含miRNA的EV可分泌到循環(huán)中，因此血漿EV中包含的miRNA可能代表疾病的理想生物標(biāo)記物。ZHANG等[52]通過慢病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)源自脂肪組織的間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞(AD-MSC)來獲得富含miR-101的EV，探討通過EV傳遞miR-101對轉(zhuǎn)移性骨肉瘤的體內(nèi)治療的潛力以及血漿中EV包裹的miR-101的潛在價值。該結(jié)果顯示，miR-101是通過調(diào)節(jié)BCL6的表達(dá)來抑制骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，骨肉瘤患者的血漿EV-miR-101水平低于健康對照者，而有轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者的血漿EV-miR-101水平甚至低于無轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者。AD-MSC衍生的富含miR-101的EV成為了轉(zhuǎn)移性骨肉瘤的潛在創(chuàng)新療法，也是骨肉瘤轉(zhuǎn)移的有希望的循環(huán)生物標(biāo)志物。lncRNA在骨肉瘤進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。據(jù)報道[53]，LncRNA DSCAM-AS1在多種癌癥中起著腫瘤啟動子的作用。但是，DSCAM-AS1在OS中的潛在機(jī)制仍然鮮為人知。有研究者[54]發(fā)現(xiàn)，DSCAM-AS1在OS組織和細(xì)胞中的表達(dá)明顯上調(diào)，miR-101表達(dá)與DSCAM-AS1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。此外，DSCAM-AS1沉默抑制OS細(xì)胞的生存能力和侵襲，而DSCAM-AS1過表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞生存能力和侵襲。DSCAM-AS1通過直接相互作用抑制了miR-101的表達(dá)，促進(jìn)了OS進(jìn)程。另外，與高miR-101表達(dá)的患者相比，低miR-101表達(dá)的患者的總生存期更短。這些研究表明，通過miR-101，DSCAM-AS1可以加速OS細(xì)胞的進(jìn)程，這可能為OS的治療提供新的視野。

4.8 miR-101與其他癌癥

乳腺癌是一種發(fā)生于乳腺組織中的惡性腫瘤，是女性最常見的惡性腫瘤之一。乳腺癌的病因目前尚不清楚，可能的因素有雌激素水平、生活方式與環(huán)境因素等[34]。有研究者[55]探討了miR-101通過Nrf2信號通路對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)miR-101模擬組Nrf2的mRNA和Nrf2的蛋白表達(dá)水平和明顯低于對照組，而在miR-101抑制劑組中升高，表明miR-101可以顯著降低Nrf2的核蛋白表達(dá)水平，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。

膀胱癌是我國目前發(fā)病率最高的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。CHEN[56]檢測了122例膀胱癌患者和110名健康志愿者的血清miR-101水平，通過計(jì)算分析得到，與健康對照組相比，膀胱癌患者中miR-101的表達(dá)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上被下調(diào)，且miR-101表達(dá)與膀胱癌的TNM分期、病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。有研究證實(shí)EZH2是miRNA-101的靶向目標(biāo)，而Lnc00518通過與miRNA-101競爭性結(jié)合來上調(diào)EZH2，從而促進(jìn)膀胱癌的增殖，侵襲和遷移潛能[57]。因此，miR-101有希望可以作為診斷膀胱癌的生物標(biāo)志物。

淋巴瘤是一種異質(zhì)性腫瘤性疾病，主要是淋巴細(xì)胞突變造成，累及機(jī)體的各部位，包括骨髓、脾、扁桃體及淋巴結(jié)等[58]。有學(xué)者[59]通過RT-Q-PCR和SP免疫組織化學(xué)方法檢測淋巴瘤患者組織中miR-101和EZH2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-101表達(dá)低，EZH2蛋白高表達(dá)，且miR-101低表達(dá)患者的總生存率顯著低于高miR-101表達(dá)的患者，EZH2高表達(dá)患者的總生存率顯著低于EZH2低表達(dá)患者，該結(jié)果提示miR-101可以通過靶向EZH2抑制淋巴瘤的細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

5 總結(jié)與展望

miRNA調(diào)控特定靶基因的表達(dá)，在細(xì)胞的增殖、凋亡和分化中發(fā)揮著重要作用，其失調(diào)與人類多種癌癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。上述多項(xiàng)研究試驗(yàn)表明，miR-101可作為一種抑癌基因參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、診斷治療、藥物耐藥、復(fù)發(fā)監(jiān)測及預(yù)后評估等。因此預(yù)測miR-101可以成為一種新的腫瘤標(biāo)志物，可用于腫瘤的早期診斷、腫瘤分期分級與預(yù)后判斷等，也可以成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)，具有較高的臨床應(yīng)用價值。然而，miR-101在不同的腫瘤中表達(dá)程度和調(diào)控作用不盡相同，因此進(jìn)一步研究其在不同腫瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制對miR-101成為惡性腫瘤治療的新靶點(diǎn)具有重要意義。