• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    p300/p53/Smad3通路參與人心房成纖維細胞衰老相關(guān)心房纖維化*

    2021-02-05 01:02:24賴穎瑜高小燕周慧珊王釗煜彭德威鄧春玉
    中國病理生理雜志 2021年1期
    關(guān)鍵詞:姜黃纖維細胞代數(shù)

    賴穎瑜 , 高小燕 , 周慧珊 , 李 昕 , 王釗煜 ,彭德威 , 饒 芳 △, 鄧春玉 ,3△

    (1南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,廣東廣州510515;2廣東省心血管病研究所心內(nèi)科,廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究部,廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院,廣東廣州510080;3華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510006)

    衰老是隨著壽命增長所發(fā)生的一個不可避免的過程,而心房纖顫(簡稱房顫,atrial fibrillation,AF)是臨床上最常見的心律失常之一,也是一種“老年病”,其發(fā)病率隨年齡增長而增加,但目前治療效果仍不理想,其發(fā)病機制需要深入研究。心房結(jié)構(gòu)重塑是AF 的主要發(fā)病機制之一,心房纖維化是其主要特征。研究表明衰老與心房纖維化密切相關(guān),與年齡較大者(>70歲)相比,年齡較小者(<50歲)右心耳纖維化明顯減少,年齡是影響纖維化發(fā)生的主要因素之一[1]。在快速起搏誘發(fā)AF 的動物模型中發(fā)現(xiàn),與成年組相比,老年犬左心房纖維化更嚴重[2],但衰老相關(guān)心房纖維化的具體分子機制尚未完全闡明。

    轉(zhuǎn)錄輔激活因子p300 是一種細胞內(nèi)普遍存在的核磷酸蛋白,具有內(nèi)在的乙酰轉(zhuǎn)移酶活性,在細胞增殖,凋亡和胚胎發(fā)育中都發(fā)揮關(guān)鍵作用[3]。研究發(fā)現(xiàn),p300參與纖維化,如在特發(fā)性肺纖維化患者的肺成纖維細胞中,p300 明顯上調(diào),而抑制p300 能減輕纖維化[4-5];p300 還影響細胞衰老,研究顯示在微血管內(nèi)皮細胞中,高糖誘導(dǎo)的沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,Sirt1)下調(diào),p300 表達上調(diào),導(dǎo)致細胞快速衰老[6]。我們的前期研究結(jié)果也顯示,p300 隨著體外培養(yǎng)的小鼠心臟成纖維細胞衰老而升高,伴隨有纖維化指標的增加[7]。因此,p300可能參與心臟衰老相關(guān)纖維化的病理過程。

    Smads 是纖維化通路的重要信號分子[8],衰老通路中的重要因子p53 也與纖維化相關(guān)[9-10]。研究發(fā)現(xiàn),在人腎小管上皮細胞株HK-2 和角化細胞株Ha-CaT中,轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β 1,TGF-β1)通過調(diào)控p53 活性進而促進 p53 與Smads相互作用,隨后結(jié)合到纖溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)啟動子上,導(dǎo)致纖維化[11]。而 p300 可通過乙?;{(diào)控 p53[12]。這些研究提示,p300 可通過調(diào)控p53,促進p53-Smad3相互作用進而參與衰老相關(guān)纖維化。

    因此,本研究采用人心房成纖維細胞(human atrial fibroblasts,HAFs)作為研究對象,通過傳代建立細胞衰老模型,比較不同代數(shù)的細胞中p300、p53、Smad3 和其他衰老及纖維化相關(guān)因子的變化,并通過干預(yù)p300 的表達,觀察其對p53 和Smad3 等衰老和纖維化指標的影響,探索p300 在衰老相關(guān)纖維化中的作用及其可能機制,以期發(fā)現(xiàn)治療衰老相關(guān)心房纖維化的新靶點。

    材 料 和 方 法

    1 患者組織標本

    本研究收集患者于心臟體外循環(huán)手術(shù)中或經(jīng)胸腔鏡AF 外科消融手術(shù)中需切除的心耳組織,分離培養(yǎng)原代心房成纖維細胞并進行傳代培養(yǎng)。所有患者均簽署知情同意書,并獲廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)倫理委員會批準,批準號為No.GDREC2016128H。有肺炎或者其他感染性疾病的患者不入選。

    2 試劑

    特級澳洲胎牛血清和0.25% 胰蛋白酶-EDTA(Gibco);成纖維細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(fibroblast basal medium,F(xiàn)BM)(Lonza);p300 小發(fā)卡(small-hairpin,sh)RNA 質(zhì)粒和 p300 過表達質(zhì)粒 pCMV p300 CHA(吉凱基因);Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen);姜黃素(Cayman);蛋白 Marker(Fermentas);4×蛋白上樣緩沖液(BIO-RAD);RIPA 裂解液(強)(Beyotime);抗p300 抗體(Millipore);抗I 型膠原蛋白α1 鏈(collagen type I α1 chain,Col1A1)抗體和抗Ⅲ型膠原蛋白α1 鏈(collagen type Ⅲ α1 chain,Col3A1)抗體(Abcam);抗基質(zhì)金屬蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9),p21 和 p16 抗體(Santa Cruz);抗p53,Smad3,p-Smad3,GAPDH,PAI-1 和 TGF-β 抗體及衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associated βgalactosidase,SA-β-Gal)染色試劑盒(Cell Signaling Technology);其他生化試劑均為進口分裝或國產(chǎn)分析純。

    3 方法

    3.1 細胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 人心耳組織經(jīng)PBS 漂洗后去除多余脂肪組織和內(nèi)外膜,加入幾滴FBM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清),細剪成約1 mm ×1 mm ×1 mm 小塊,用吸管將組織塊均勻涂布于25 cm2培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面上,靜置約15 min,輕翻培養(yǎng)瓶從側(cè)面加入4 mL FBM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清),培養(yǎng)面朝上于37 ℃,5%CO?的培養(yǎng)箱中靜置2 h,組織塊貼牢后,翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)面朝下放置使培養(yǎng)基浸過所有組織塊,繼續(xù)培養(yǎng)。每隔5 d換液,待細胞游離、生長至基本融合成片達瓶底80%后,進行消化傳代。傳代至P3 和P7 的細胞接種于6 孔細胞培養(yǎng)板中,待細胞密度達70%~80%,使用Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑盒按說明操作進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。質(zhì)粒稀釋液:125 μL Op-ti-MEM 培養(yǎng)基稀釋 2.5 μg 質(zhì)粒和 5 μL P3000 試劑,輕輕混勻;脂質(zhì)體稀釋液:125 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基稀釋 6 μL Lipofectamine 3000 試劑,高速震蕩 3 s 混勻。然后將這兩份分別含有質(zhì)粒和脂質(zhì)體的溶液混合,輕輕混勻,室溫孵育15 min,均勻滴加到細胞新鮮更換的1 mL FBM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)中,輕輕搖勻,于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2~3 d。

    3.2 SA-β-Gal 染色 β-半乳糖苷酶是衰老細胞的標志物。將細胞接種于6 孔細胞培養(yǎng)板中,待密度達到50%~70%,按試劑盒操作說明進行SA-β-Gal 染色。棄培養(yǎng)基后用PBS 漂洗1 次。加入固定液室溫固定15 min,去除固定液后PBS 漂洗2次。按照說明配制染色液,調(diào)節(jié)pH 值為6,每孔加1 mL 染色液,密封,于37 ℃,無CO2的干燥恒溫箱孵育過夜。在顯微鏡下觀察,核周藍染的即為衰老細胞。

    3.3 Western blot實驗 細胞棄去培養(yǎng)基,PBS洗3次后加入適量含蛋白酶抑制劑的RIPA 裂解液(強),冰上裂解5 min,用刮刀刮細胞,用移液槍收集細胞混合物至 EP 管中,冰上繼續(xù)裂解 20 min。4 ℃,12 000 r/min 離心15 min,取上清分裝至EP 管,儲存于-80 ℃。BCA法測定蛋白濃度。加入4×蛋白上樣緩沖液稀釋30 μg 蛋白,55 ℃煮 10 min。行 8%~10% SDS-PAGE分離蛋白樣品,轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。蛋白面向上用5%脫脂牛奶于室溫封閉1 h。TBST 洗3 次,每次5 min。加入稀釋好的Ⅰ抗4 ℃孵育過夜,TBST 洗3次,每次5 min。加入稀釋好的Ⅱ抗室溫孵育1 h,TBST 洗3 次,每次5 min。蛋白面朝上均勻滴加ECL孵育30 s,平鋪在托盤上送入機器自動曝光。

    3.4 細胞免疫熒光染色 待細胞密度達到70%~80%時,用預(yù)溫PBS 洗2 次。4%多聚甲醛固定15 min,PBS 浸洗 3 次,每次 10 min。0.2% TritonX-100通透20 min,4%BSA 封閉30 min,去除封閉液直接滴加稀釋好的Ⅰ抗放入濕盒,4 ℃孵育過夜。PBS 浸洗3 次,每次10 min。滴加稀釋好的熒光Ⅱ抗,濕盒中避光室溫孵育45 min。PBS 浸洗3 次,每次10 min。避光滴加封片劑(含DAPI)后在熒光顯微鏡下觀察。

    4 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用統(tǒng)計軟件SPSS 20.0 分析處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤(mean±SEM)表示。兩組間比較用t檢驗。多組間比較用單因素方差分析,各組均數(shù)的兩兩比較采用 LSD-t或 SNK-q檢驗,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 不同代數(shù)人心房成纖維細胞SA-β-Gal 染色結(jié)果以及p300、p53 和Smad3 等衰老和纖維化相關(guān)蛋白水平的變化

    體外培養(yǎng)的HAFs 連續(xù)傳代至P11 代,行Western blot 檢測不同代數(shù)(P3、P7 和P11)細胞的 p300、p53和Smad3等衰老和纖維化相關(guān)因子的蛋白水平,結(jié)果如圖1A、1B所示,隨著細胞代數(shù)增加,p300和衰老相關(guān)因子p53表達水平逐漸升高,以P11代細胞最高(P<0.05;P<0.01)。與P3 代細胞相比,P7 代細胞的p21 和p16 表達水平都明顯升高(P<0.01),且p16在P11 代達最高水平(P<0.01)。Smad3 是公認的促纖維化因子,隨著細胞傳代,總Smad3 有下降趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義,p-Smad3 的蛋白水平在P7 和P11代細胞中均明顯增高(P<0.05),其他纖維化指標MMP-2/9 和PAI-1 表達均隨著代數(shù)逐漸增加,以P11代細胞最高(P<0.01),但Col1A1和Col3A1的表達在各組間無明顯差異,TGF-β 在P11 代細胞中表達較P3 和P7 有所下降,但無統(tǒng)計學(xué)差異。另外,分別取P3、P7和P11代細胞進行SA-β-Gal染色,觀察細胞衰老情況,結(jié)果如圖1C 所示,隨著傳代代數(shù)增加,核周藍染的衰老細胞逐漸增加(P<0.01)。由此可見,隨著 HAFs 衰老,p300 和 p53 表達增加,Smad3 被激活,一些纖維化相關(guān)因子表達增加。

    2 姜黃素處理高代數(shù)人心房成纖維細胞對衰老和纖維化相關(guān)蛋白水平的影響

    為了進一步探索p300 在HAFs 衰老以及衰老相關(guān)的纖維化中的作用,我們給予不同濃度(6、9 和12 μmol/L)的 p300 抑制劑姜黃素處理高代數(shù)(P7)HAFs,使用 Western blot 檢測細胞中 p300、p53 和Smad3 以及其他衰老和纖維化相關(guān)蛋白水平的變化。結(jié)果如圖2 所示,不同濃度姜黃素處理后,P7 代細胞的p300 水平呈現(xiàn)濃度依賴性下降(P<0.05),以12 μmol/L 濃度處理組達最低水平(P<0.01);衰老相關(guān)指標p53、p21 及p16 表達水平也呈逐漸下降趨勢,Smad3 及p-Smad3 的蛋白水平明顯下降,以高濃度處理組下降最為明顯(P<0.05);其他纖維化指標Col1A1、MMP-2、TGF-β 和PAI-1 在高濃度姜黃素(12 μmol/L)處理后,亦明顯下降(P<0.05;P<0.01);而Col3A1 和MMP-9 的蛋白水平也有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性。因此,p300 抑制劑姜黃素處理抑制高代數(shù)HAFs的p300,可明顯降低衰老和部分纖維化因子的蛋白水平,提示p300 在HAFs 衰老和纖維化中發(fā)揮著重要作用。

    3 敲減p300 的表達對高代數(shù)人心房成纖維細胞衰老和纖維化相關(guān)蛋白水平的影響

    為了確定p300 在HAFs 衰老相關(guān)的纖維化中發(fā)揮的關(guān)鍵作用,我們對高代數(shù)(P7)細胞進行p300 shRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲減p300的表達,觀察衰老和纖維化相關(guān)因子的變化,結(jié)果如圖3 所示。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后p300 的表達水平下降(P<0.05),伴隨p53、Smad3 及p-Smad3 的蛋白水平顯著降低(P<0.01),同時其他纖維化相關(guān)指標如Col1A1、Col3A1 和MMP-2 的蛋白水平也降低(P<0.05;P<0.05),MMP-9、TGF-β 和PAI-1 水平也有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性。由此說明,敲減HAFs 的p300表達可以抑制衰老及纖維化相關(guān)因子的分泌。

    Figure 1.The results of SA-β-Gal staining and the protein expression levels of p300,senescence and fibrosis associated proteins in human atrial fibroblasts of different passages.A:the protein levels of p300,Smad3/p-Smad3,p53/p21 and p16;B:the protein expression of Col1A1/3A1,MMP-2/9,TGF-β and PAI-1;C:the images of SA-β-Gal staining(×100)and SA-β-Gal positive rate of HAFs at passage 3,passage 7 and passage 11,respectively.Mean±SEM. n=6.*P<0.05,**P<0.01 vs P3 group.圖1 不同代數(shù)人心房成纖維細胞SA-β-Gal染色結(jié)果及p300、衰老和纖維化相關(guān)蛋白的表達水平

    Figure 2.Effect of curcumin on the expression of p300,senescence and fibrosis associated proteins in human atrial fibroblasts of passage 7.A:the protein levels of p300,Smad3/p-Smad3,p53/p21 and p16 before and after treated with curcumin of different concentrations(6,9 and 12 μmol/L);B:the protein expression of Col1A1/3A1,MMP-2/9,TGF-β and PAI-1 before and after treated with curcumin.Mean±SEM. n=4.*P<0.05,**P<0.01 vs DMSO group.圖2 姜黃素處理對人心房成纖維細胞p300及衰老和纖維化相關(guān)蛋白表達的影響

    4 人心房成纖維細胞過表達p300 對衰老和纖維化相關(guān)蛋白水平的影響

    對低代數(shù)(P3)HAFs進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達p300,觀察衰老和纖維化相關(guān)指標的變化,結(jié)果如圖4 所示,轉(zhuǎn)染后p300 的表達顯著增加(P<0.05),p53 和Smad3 的水平也明顯升高(P<0.05),纖維化指標MMP-2的水平也隨p300而增加(P<0.05),而Col1A1無明顯變化。此部分研究結(jié)果顯示,低代數(shù)的HAFs過表達p300,可促進衰老和纖維化相關(guān)因子的分泌。

    討 論

    以上研究結(jié)果表明,隨著HAFs 衰老,p300 及其他衰老和纖維化相關(guān)因子水平升高;姜黃素處理或p300 shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲減p300的表達可降低p53和Smad3 的表達,抑制細胞衰老和纖維化相關(guān)因子分泌;而過表達p300 則可促進細胞衰老和纖維化相關(guān)因子分泌,說明p300 在HAFs 衰老相關(guān)纖維化中起重要作用,可能通過調(diào)控p53/Smad3通路參與其相關(guān)病理機制。

    心臟纖維化的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程,相關(guān)病理因素包括,遺傳因素,代謝障礙,肥胖和高血壓等。近年來研究表明,除卻病理因素,衰老亦會導(dǎo)致心肌細胞外基質(zhì)的改變,如心臟成纖維細胞的增殖和膠原蛋白含量增加,交聯(lián)增強,導(dǎo)致心臟順應(yīng)性下降[13]。AF 的主要病理機制包括心房肌細胞的電重塑和結(jié)構(gòu)重塑,心房纖維化是結(jié)構(gòu)重塑的主要表現(xiàn)。而進行性心房纖維化亦與心臟衰老相關(guān)[14],與年幼大鼠相比,老年大鼠的左房纖維化增加,且具有更高的 AF 誘發(fā)性[15]。因此,AF 的發(fā)生率隨年齡的增長而增加,與增齡相關(guān)的心房纖維化有關(guān),心房組織呈現(xiàn)年齡依賴的間質(zhì)纖維化,心肌細胞間的電通訊受阻,異位或折返活動的可能性增加,使老年人容易發(fā)生AF[15]。目前雖然衰老相關(guān)的心房纖維化研究已獲關(guān)注,但其相關(guān)機制尚未得到很好闡明。因此,本研究以HAFs 為研究對象通過傳代建立復(fù)制性細胞衰老模型,探究其相關(guān)機制。

    轉(zhuǎn)錄輔激活因子p300 是體內(nèi)重要的表觀遺傳調(diào)控分子,具有內(nèi)的在乙酰轉(zhuǎn)移酶活性,可通過乙?;M蛋白和非組蛋白參與調(diào)控多種基因的表達[3,16]。研究表明,p300 可調(diào)控膠原蛋白表達,促進纖維化,如在糖尿病大鼠心肌肥厚模型中,p300 通過調(diào)控 Smad2 乙?;?,增加 TGF-β 活性,促進膠原合成,導(dǎo)致心肌纖維化和肥厚[17];p300 HAT 特異性抑制劑—L002 在體內(nèi)和體外均能有效抑制纖維化反應(yīng),如減弱體外培養(yǎng)的人心臟成纖維細胞分化,增殖,遷移及膠原合成能力,逆轉(zhuǎn)高血壓誘導(dǎo)的小鼠心肌纖維化和肥大[18-19]。雖然,直接關(guān)注p300 在細胞衰老中作用的研究不多,但在人原代包皮成纖維細胞中發(fā)現(xiàn),p300 對原癌基因Ras誘導(dǎo)的細胞早衰至關(guān)重要,抑制p300 活性可阻止p53 活化,有助于腫瘤轉(zhuǎn)移中的衰老逃逸[20]。而在人臍帶來源的間充質(zhì)基質(zhì)細胞中,敲減p300的表達或抑制其乙酰轉(zhuǎn)移酶活性將誘導(dǎo)細胞早衰并降低增殖潛能,提示p300 通過激活p53/p21 信號途徑,在誘導(dǎo)細胞衰老過程中起重要作用[21]。本研究發(fā)現(xiàn),p300 的表達水平隨著HAFs 傳代代數(shù)的增加而升高,同時伴隨其他衰老和纖維化相關(guān)因子增加。姜黃素處理或p300 shRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染敲減p300的表達可抑制衰老信號通路和纖維化因子分泌,而過表達p300 則相反。由此證實p300 在HAFs 衰老相關(guān)纖維化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

    本研究還對p300 參與衰老相關(guān)纖維化的分子機制進行初步探索。p53 是一種序列特異性DNA 結(jié)合蛋白,是調(diào)控細胞增殖,凋亡和衰老的重要轉(zhuǎn)錄激活子[22]。乙?;钦{(diào)控p53 功能的關(guān)鍵共價修飾,乙酰轉(zhuǎn)移酶p300 介導(dǎo)的p53 乙?;粌H可增加其蛋白穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性,還可以增強其反應(yīng)性基因,如細胞周期依賴性激酶抑制劑p21等的啟動子激活促進細胞周期停滯或衰老[23],這可能是p300 參與細胞衰老的重要途徑。有研究發(fā)現(xiàn),高糖刺激可通過Sirt1/p300/p53/p21 途徑誘導(dǎo)持續(xù)的內(nèi)皮細胞衰老[24]。同時,p53與Smad3都是纖維化反應(yīng)的效應(yīng)因子[25],在 TGF-β1 刺激腎纖維化中 p53 與 Smad3 有明顯協(xié)同作用,p53 通過與受體激活的Smads 結(jié)合而充當(dāng)TGF-β1 誘導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑中的輔助因子和TGF-β1 纖維化反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)因子[26],促進腎纖維化疾病進展。本研究中也發(fā)現(xiàn),p300 隨著細胞傳代而增加,且在過表達p300 時,p53 和Smad3 的活性隨之增加,并伴隨纖維化因子增加;降低p300水平后,p53 和Smad3 的水平也下降,同時纖維化因子分泌減少。因此,p300可能通過調(diào)控p53和Smad3參與衰老相關(guān)纖維化。

    Figure 3.The protein levels of senescence and fibrosis associated proteins in human atrial fibroblasts of passage 7 after p300 shRNA transfection.The protein levels of p300,p53,Smad3/p-Smad3,Col1A1/3A1,MMP-2/9,TGF-β and PAI-1 in passage 7 HAFs after transfected with p300 shRNA plasmid were determined by Western blot.Mean±SEM. n=4.*P<0.05,**P<0.01 vs control group.圖3 高代數(shù)(P7)人心房成纖維細胞敲減p300的表達對衰老和纖維化相關(guān)蛋白表達的影響

    Figure 4.The protein levels of senescence and fibrosis associated proteins in human atrial fibroblasts of passage 3 after p300 over-expression.The protein levels of p300,p53,Smad3,Col1A1 and MMP-2 in passage 3 HAFs after transfected with p300 over-expression plasmid were determined by Western blot.Mean±SEM.n=4.*P<0.05 vs vector control group.圖4 低代數(shù)(P3)人心房成纖維細胞過表達p300對衰老和纖維化相關(guān)因子表達的影響

    此外,本研究具有以下局限性:雖然我們發(fā)現(xiàn)敲減p300的表達可明顯降低纖維化相關(guān)因子,如Col 1A1/3A1 和 MMP-2 的 表 達 ,同 時 p53 和 Smad3/p-Smad3 的水平亦明顯降低,而p300 過表達后p53 和Smad3 水平明顯升高,纖維化指標MMP-2 的表達亦明顯增加,但對Col 1A1 的表達無明顯影響。其原因可能是因為本研究中的HAFs來源于人體心房組織,均為接受心臟手術(shù)的患者,其心房可能均有一定程度的病理改變,在這個基礎(chǔ)上分離的心房成纖維細胞可能已有一定程度的纖維化,導(dǎo)致其膠原的表達已經(jīng)比較高,故過表達p300 不能使膠原合成進一步增加。

    綜上所述,本研究初步證實p300 可能通過激活p53/Smad3 通路參與人心房成纖維細胞衰老相關(guān)心房纖維化,最終導(dǎo)致AF的發(fā)生和發(fā)展。

    猜你喜歡
    姜黃纖維細胞代數(shù)
    Tiger17促進口腔黏膜成纖維細胞的增殖和遷移
    滇南小耳豬膽道成纖維細胞的培養(yǎng)鑒定
    兩個有趣的無窮長代數(shù)不等式鏈
    Hopf代數(shù)的二重Ore擴張
    什么是代數(shù)幾何
    科學(xué)(2020年1期)2020-08-24 08:08:06
    Curcumin in The Treatment of in Animals Myocardial ischemia reperfusion: A Systematic review and Meta-analysis
    姜黃提取物二氧化硅固體分散體的制備與表征
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:43
    姜黃素對人胃癌AGS細胞自噬流的作用
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:37
    胃癌組織中成纖維細胞生長因子19和成纖維細胞生長因子受體4的表達及臨床意義
    一個非平凡的Calabi-Yau DG代數(shù)
    卡戴珊不雅视频在线播放| 女人被狂操c到高潮| 一级毛片 在线播放| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 欧美激情国产日韩精品一区| 成人美女网站在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99久国产av精品国产电影| 又大又黄又爽视频免费| .国产精品久久| 看黄色毛片网站| 国产亚洲一区二区精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 只有这里有精品99| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费看a级黄色片| 22中文网久久字幕| 午夜福利高清视频| 久久热精品热| 免费观看av网站的网址| 免费观看av网站的网址| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| av网站免费在线观看视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 精品少妇黑人巨大在线播放| 伊人久久国产一区二区| av黄色大香蕉| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产一级毛片在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 51国产日韩欧美| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲国产成人一精品久久久| 免费黄网站久久成人精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲欧美日韩东京热| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 免费看日本二区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美一级a爱片免费观看看| 男女无遮挡免费网站观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男插女下体视频免费在线播放| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产 一区精品| 亚洲天堂av无毛| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲欧美精品专区久久| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品熟女少妇av免费看| 寂寞人妻少妇视频99o| 高清午夜精品一区二区三区| h日本视频在线播放| 99精国产麻豆久久婷婷| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲国产最新在线播放| 日韩一区二区三区影片| 麻豆成人午夜福利视频| 国产美女午夜福利| 干丝袜人妻中文字幕| 国产久久久一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av天堂中文字幕网| 欧美日韩综合久久久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产黄频视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 九草在线视频观看| 九草在线视频观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 黄色欧美视频在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 伦精品一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品不卡视频一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产 一区精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 最新中文字幕久久久久| 国产精品人妻久久久影院| av国产精品久久久久影院| 22中文网久久字幕| 国产真实伦视频高清在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品三级大全| 各种免费的搞黄视频| 免费电影在线观看免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产黄片视频在线免费观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲av免费高清在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产乱来视频区| 国产久久久一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 少妇高潮的动态图| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久99精品国语久久久| 国产精品av视频在线免费观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 91久久精品国产一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 六月丁香七月| 国产亚洲av嫩草精品影院| 51国产日韩欧美| 嘟嘟电影网在线观看| 国产成人a区在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 尾随美女入室| 波多野结衣巨乳人妻| 一个人看的www免费观看视频| 免费观看在线日韩| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| 国产视频首页在线观看| videossex国产| 亚洲精品第二区| 亚洲不卡免费看| 免费人成在线观看视频色| 九草在线视频观看| 国产高潮美女av| 免费观看a级毛片全部| 五月玫瑰六月丁香| 校园人妻丝袜中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本免费在线观看一区| 中文资源天堂在线| 久久久久久久久久成人| 国产日韩欧美在线精品| 色5月婷婷丁香| 天堂中文最新版在线下载 | 精品久久久久久久久av| 美女内射精品一级片tv| 一级黄片播放器| 直男gayav资源| 99久久精品一区二区三区| 少妇高潮的动态图| 大话2 男鬼变身卡| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲精品色激情综合| 深爱激情五月婷婷| 午夜福利视频1000在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久a久久爽久久v久久| 午夜视频国产福利| 国产高清三级在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 亚洲真实伦在线观看| 中国三级夫妇交换| 亚洲av.av天堂| 有码 亚洲区| 在线观看免费高清a一片| 麻豆乱淫一区二区| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲精品亚洲一区二区| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 91久久精品国产一区二区三区| 国产在视频线精品| 国产91av在线免费观看| 赤兔流量卡办理| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲av成人精品一二三区| 综合色av麻豆| av女优亚洲男人天堂| 老女人水多毛片| 成人综合一区亚洲| 亚洲最大成人中文| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日韩大片免费观看网站| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 丰满乱子伦码专区| 97热精品久久久久久| 一级黄片播放器| 国产在视频线精品| 久久久成人免费电影| 男女边吃奶边做爰视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产视频内射| 日韩成人伦理影院| 日韩一本色道免费dvd| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久性生活片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 特级一级黄色大片| 国产爱豆传媒在线观看| 日韩伦理黄色片| 国产综合精华液| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产欧美亚洲国产| 美女主播在线视频| 欧美性感艳星| 成人无遮挡网站| 久久久久久久国产电影| 另类亚洲欧美激情| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久久网色| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久久久国产电影| 麻豆成人av视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 五月玫瑰六月丁香| 成人无遮挡网站| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩在线高清观看一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 亚洲综合色惰| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲人成网站在线播| 九草在线视频观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 高清日韩中文字幕在线| 免费观看无遮挡的男女| 极品教师在线视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费av不卡在线播放| 熟女电影av网| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 性色avwww在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av在线亚洲专区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久97久久精品| 国产视频内射| 看黄色毛片网站| 日韩av不卡免费在线播放| 色吧在线观看| 一区二区三区免费毛片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产成人91sexporn| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲自偷自拍三级| 亚洲va在线va天堂va国产| 乱码一卡2卡4卡精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99久久精品热视频| 国产精品久久久久久av不卡| 高清毛片免费看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久精品94久久精品| 一本一本综合久久| 青春草视频在线免费观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 日本黄色片子视频| 国产在线男女| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一级二级三级毛片免费看| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜视频国产福利| 男人舔奶头视频| 国产精品精品国产色婷婷| 韩国高清视频一区二区三区| 免费av观看视频| 在线观看av片永久免费下载| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲最大成人手机在线| 国产色爽女视频免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久久久久久久大av| 插阴视频在线观看视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产日韩一区二区| 久久99热这里只频精品6学生| 国产淫片久久久久久久久| 国产探花在线观看一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 大码成人一级视频| 国内精品宾馆在线| 久热这里只有精品99| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 免费大片18禁| 久久精品国产亚洲网站| 十八禁网站网址无遮挡 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 视频区图区小说| 能在线免费看毛片的网站| 真实男女啪啪啪动态图| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品爽爽va在线观看网站| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲最大成人中文| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 丝袜美腿在线中文| 又爽又黄a免费视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久久色成人| 97超碰精品成人国产| 久久国产乱子免费精品| 插阴视频在线观看视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲欧美精品自产自拍| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久人人爽人人片av| 十八禁网站网址无遮挡 | 久久精品久久久久久久性| 中国美白少妇内射xxxbb| 哪个播放器可以免费观看大片| 777米奇影视久久| 国产精品熟女久久久久浪| 涩涩av久久男人的天堂| 白带黄色成豆腐渣| 免费av毛片视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 成人美女网站在线观看视频| 男的添女的下面高潮视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 可以在线观看毛片的网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 高清在线视频一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲成人久久爱视频| 欧美日本视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 六月丁香七月| 成人综合一区亚洲| 只有这里有精品99| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产高清三级在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产爽快片一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 日韩av免费高清视频| 性色av一级| 成年版毛片免费区| 26uuu在线亚洲综合色| av国产久精品久网站免费入址| 国产欧美日韩精品一区二区| av播播在线观看一区| 亚洲高清免费不卡视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品久久久久久久久亚洲| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩成人伦理影院| 男女下面进入的视频免费午夜| 97热精品久久久久久| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产极品天堂在线| 国产成人免费无遮挡视频| 免费少妇av软件| freevideosex欧美| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产色婷婷99| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产精品成人久久小说| av在线亚洲专区| av免费在线看不卡| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品国产av在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产探花在线观看一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 赤兔流量卡办理| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久久久网色| 色5月婷婷丁香| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av免费在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 色综合色国产| 少妇的逼好多水| 久久久久性生活片| 国产毛片a区久久久久| 精品午夜福利在线看| 久久精品国产亚洲网站| 欧美最新免费一区二区三区| 777米奇影视久久| 日本黄色片子视频| 伦理电影大哥的女人| 久久久久久国产a免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美日韩精品成人综合77777| 高清欧美精品videossex| 人妻 亚洲 视频| 日韩精品有码人妻一区| 国产高清国产精品国产三级 | 精品人妻一区二区三区麻豆| freevideosex欧美| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩精品有码人妻一区| 国产乱来视频区| 最近中文字幕2019免费版| 久久影院123| 亚洲精品一区蜜桃| 国产成人精品久久久久久| 久久97久久精品| 午夜免费观看性视频| 精品久久久久久电影网| 乱系列少妇在线播放| 国产欧美亚洲国产| 国产黄a三级三级三级人| 久久99热6这里只有精品| 国产成人精品久久久久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 天堂网av新在线| av国产免费在线观看| 国产淫片久久久久久久久| av福利片在线观看| 舔av片在线| 亚洲av不卡在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品久久国产蜜桃| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 国产 一区 欧美 日韩| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产色片| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产男女内射视频| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人无遮挡网站| 欧美+日韩+精品| 国产男女内射视频| 亚洲不卡免费看| 一区二区三区精品91| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产欧美亚洲国产| 综合色av麻豆| 亚洲人成网站高清观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产乱来视频区| 欧美精品一区二区大全| 97热精品久久久久久| 内射极品少妇av片p| 日韩av免费高清视频| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩av不卡免费在线播放| 国产色爽女视频免费观看| 91精品国产九色| 亚洲av二区三区四区| 青春草亚洲视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久精品国产自在天天线| 久久精品夜色国产| 日本黄大片高清| av卡一久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲va在线va天堂va国产| 一个人看视频在线观看www免费| 99久久中文字幕三级久久日本| 中文字幕亚洲精品专区| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲四区av| 搞女人的毛片| 国国产精品蜜臀av免费| 日本一本二区三区精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 各种免费的搞黄视频| 成年免费大片在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 97热精品久久久久久| 大香蕉久久网| 夫妻午夜视频| 男女那种视频在线观看| 成人国产麻豆网| 欧美3d第一页| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲国产精品999| 男女国产视频网站| 国产成人a区在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 中文字幕亚洲精品专区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美区成人在线视频| 91久久精品国产一区二区成人| 国产成人一区二区在线| 欧美另类一区| 成人一区二区视频在线观看| 777米奇影视久久| 涩涩av久久男人的天堂| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产视频内射| 亚洲av欧美aⅴ国产| 婷婷色综合www| 国产老妇女一区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产成人一区二区在线| 久久ye,这里只有精品| 日韩一区二区视频免费看| xxx大片免费视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 麻豆乱淫一区二区| 男女边摸边吃奶| 老司机影院成人| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 亚洲av二区三区四区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 男女那种视频在线观看| av免费在线看不卡| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 哪个播放器可以免费观看大片| 男人狂女人下面高潮的视频| 免费看a级黄色片| 色视频www国产| 国产精品偷伦视频观看了| 国产乱来视频区| 2022亚洲国产成人精品| 少妇 在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 精品久久久精品久久久| 国产熟女欧美一区二区| 丰满少妇做爰视频| 九九在线视频观看精品| 日本一二三区视频观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 18禁在线播放成人免费| 国产精品人妻久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 91狼人影院| 真实男女啪啪啪动态图| 国产黄频视频在线观看| 女人被狂操c到高潮| 日本与韩国留学比较| 色视频www国产| 街头女战士在线观看网站| 美女高潮的动态| 日本午夜av视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲自偷自拍三级| 亚洲在线观看片| 色哟哟·www| 18+在线观看网站| 国产精品女同一区二区软件| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 免费大片黄手机在线观看| 嫩草影院入口| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 男插女下体视频免费在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 99久久精品国产国产毛片| 国产成人精品久久久久久| 亚洲四区av| av网站免费在线观看视频| 亚洲精品第二区| 国产精品成人在线| 91精品国产九色| 少妇丰满av| 日本欧美国产在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品久久久久久精品电影小说 | a级毛色黄片| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久久久久久久大av| 99热这里只有是精品50| 国产av不卡久久| 日韩电影二区| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲性久久影院| 色播亚洲综合网| 免费av不卡在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 国产免费一级a男人的天堂| 少妇熟女欧美另类| 欧美日韩视频精品一区| 国产久久久一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 国产色婷婷99| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲在久久综合| 美女内射精品一级片tv| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产 精品1|