‘哈伯’南天竹組織培養(yǎng)和快速繁殖

張俊林 樊靖 胡玉春 楊浩 胡紹慶 沈柏春

摘要：為建立‘哈伯’南天竹組織培養(yǎng)和種苗繁育技術(shù)體系，以半木質(zhì)化帶芽莖段為外植體材料開(kāi)展植株再生研究。通過(guò)觀察對(duì)比試驗(yàn)法、L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)完全隨機(jī)法、極差分析、顯著性檢驗(yàn)、LSD多重比較，探討了‘哈伯’南天竹組培的最適培養(yǎng)基配方。試驗(yàn)結(jié)果表明：最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS + 6-BA2.0 mg/L + IBA0.1 mg/L +蔗糖30 g/L，誘導(dǎo)萌動(dòng)率71.77%，成活率85.51%；最佳增殖培養(yǎng)基為WPM +6-BA1.5 mg/L+ IBA 0.01 mg/L +蔗糖30 g/L，增殖系數(shù)6.3；最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+ IBA 0.5 mg/L + NAA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L +AC 0.2 g/L，生根率97.63%；試管苗移入泥炭土：珍珠巖=3：2（V/V）混合基質(zhì)中，移栽成活率96.67%。該試驗(yàn)建立了高效穩(wěn)定的組培快繁技術(shù)體系，得到的組培苗后代能夠穩(wěn)定的保持母本優(yōu)良性狀，為工廠化育苗提供了技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞：‘哈伯’南天竹；組織培養(yǎng)；種苗繁育；再生；增殖

中圖分類號(hào)：S688.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A論文編號(hào)：cjas20200300087

Nandina domestica‘Harbour Dwarf’： Tissue Culture and Rapid Propagation

Zhang Junlin1， Fan Jing1， Hu Yuchun1， Yang Hao1， Hu Shaoqing2， Shen Bochun1

（1Hangzhou Landscaping Incorporated， Hangzhou 31000， Zhejiang， China；

2Building Engineering College， Zhejiang Sci-Tech University， Hangzhou 310018， Zhejiang， China）

Abstract： The aim of this study is to establish a system of tissue culture and seedling production for Nandina domestica‘Harbour Dwarf’. The stem segments of semi-lignified band buds were used as explants to conduct regeneration study. The comparative experiments， completely randomized orthogonal experiment design of L9（34）， range analysis， significance test and LSD multiply comparative analysis were used to discuss the optimal culture medium. The results showed that the highest frequency of shoot induction （71.77%） and survival rate（85.51%） were achieved on MS + 6-BA 2.0 mg/L + IBA 0.1 mg/L + sucrose 30 g/L. The highest proliferation coefficient （6.3） was obtained on WPM +6-BA 1.5 mg/L + IBA 0.01 mg/L + sucrose 30 g/L. Microshoots exhibited best rooting response on 1/2 MS+ IBA 0.5 mg/L + NAA 1.0 mg/L + sucrose 20 g/L + AC 0.2 g/L by producing the highest frequency of root formation （97.63% ）. Rooted plantlets were transferred to artificial mixture medium （peat： perlite=3：2.V/V） under the green house condition with the survival rate up to 96.67%. An efficient propagation system of Nandina domestica‘Harbour Dwarf’was established， and the plantlets could steadily inherit the character of parents. The present system provides technical support for large scale plant production.

Keywords： Nandina domestica‘Harbour Dwarf’； Tissue Culture； Seedling Production； Regeneration； Proliferation

0引言

南天竹（Nandina domestica）為小檗科南天竹屬常綠灌木[1]，是一種具有觀賞、生態(tài)、藥用等多種價(jià)值的樹(shù)種[2]，其葉、果、株型皆具極高的觀賞價(jià)值，廣泛用于園林綠化中[3-4]。南天竹原產(chǎn)中國(guó)華北、華中、華東及華南部分地區(qū)，日本亦有分布[5]，經(jīng)過(guò)自然演化及栽培馴化已形成多個(gè)栽培變種，常見(jiàn)的栽培變種有紅果南天竹、玉果南天竹、五彩南天竹和藍(lán)果南天竹、狹葉南天竹、栗木南天竹和圓葉南天竹[6]，莖干筆直，高約2 m，少分枝或無(wú)分枝?！咸熘瘢∟andina domestica‘Harbour Dwarf’）原產(chǎn)地為美國(guó)北卡羅萊納州[7]，生長(zhǎng)緩慢，株高40～80 cm，枝葉濃密，株形緊湊，基部萌蘗性強(qiáng)；葉片對(duì)生，2～3回羽狀復(fù)葉，偶有4回，小葉紡錘形，長(zhǎng)4～8 cm，寬1～2 cm，先端鈍尖，基部楔形，全緣，薄革質(zhì)，屬矮生類型南天竹新品種。

近年來(lái)，人們相繼對(duì)南天竹屬的不同品種展開(kāi)了資源利用與開(kāi)發(fā)[8- 9]、新優(yōu)品種資源收集[10]、引種馴化[11-13]、播種育苗[14]、扦插繁育[15-17]、組培快繁等工作的研究，特別是‘火焰’南天竹（Nandina domestica‘fire power’）的相關(guān)研究報(bào)道較多。周南镚等[18]以‘火焰’南天竹莖段為外植體材料進(jìn)行了組織培養(yǎng)和植株再生技術(shù)的研究；杜永芹等[19-20]在‘火焰’南天竹組織培養(yǎng)中通過(guò)篩選植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合及使用濃度進(jìn)行了研究了，取得了突破，提高了增殖系數(shù)；賈思振等[21-22]以‘火焰’南天竹組培苗葉片為外植體材料，建立了葉片不定芽再生技術(shù)體系且成功建立了遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系。

雖然有較多關(guān)于矮生型南天竹品種‘火焰’的組織培養(yǎng)技術(shù)研究報(bào)道，但鮮見(jiàn)‘哈伯’南天竹的組織培養(yǎng)報(bào)道。本研究以‘哈伯’南天竹半木質(zhì)化莖段為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)技術(shù)研究，建立組培快繁技術(shù)體系，以期為工廠化育苗提供技術(shù)支持。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

本研究試驗(yàn)于2016年3月—2017年12月在杭州市園林綠化股份有限公司組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室（臨安）內(nèi)進(jìn)行。

1.2試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為‘哈伯’南天竹（Nandina domestica‘Harbour Dwarf’）半木質(zhì)化莖段，取自杭州市園林綠化股份有限公司苗木種質(zhì)資源圃（臨安）。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1外植體處理剪下當(dāng)年生無(wú)病蟲(chóng)害的半木質(zhì)化枝條作為外植體材料，帶回實(shí)驗(yàn)室。將枝條剪成長(zhǎng)度2～ 5 cm的小段，保留葉柄長(zhǎng)度0.5～1.0 cm，備用。將剪好的莖段用軟毛刷蘸取1%（V/V）的洗潔精溶液仔細(xì)刷除枝條污垢后，自來(lái)水沖洗60 min備用。將備用試材在超凈工作臺(tái)上用75%（V/V）酒精溶液浸泡45 s，無(wú)菌水沖洗3次，然后用1‰（m/V）升汞（HgCl2）溶液（添加幾滴吐溫-80）滅菌10 min，期間不斷震動(dòng)；最后用無(wú)菌水沖洗6次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中用無(wú)菌濾紙吸干莖段表面水分。然后用無(wú)菌手術(shù)刀將莖段兩端各切去0.5～ 0.7 cm，兩側(cè)葉柄各切去0.2 cm，把處理好的材料切成1.0 cm左右的莖段，莖段形態(tài)學(xué)下端接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

1.3.2誘導(dǎo)培養(yǎng)將處理好的莖段迅速接入含有0.1 mg/L吲哚丁酸（IBA）且添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）（0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 mg/L）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS[23]作為基本培養(yǎng)基，卡拉膠7 g/L，蔗糖30 g/L，pH 5.6～5.8。每處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次；不添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基作為對(duì)照（CK）。培養(yǎng)條件（文中無(wú)特殊說(shuō)明均同此）：培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度60μmol/（m2·s）。以萌生嫩莖長(zhǎng)度大于1 cm計(jì)為成活（有效萌芽），小于1 cm計(jì)為萌動(dòng)，培養(yǎng)60天后，統(tǒng)計(jì)分析不同處理對(duì)‘哈伯’南天竹外植體萌動(dòng)率和成活率的影響。

萌動(dòng)率=（萌動(dòng)數(shù)/未污染數(shù)）×100%…………（1）

成活率=（成活數(shù)/萌動(dòng)數(shù)）×100%……………（2）

1.3.3增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)培養(yǎng)的長(zhǎng)度小于0.5 cm的嫩莖直接轉(zhuǎn)接，大于0.5 cm的嫩莖（梢）切割成0.5～1.0 cm左右的莖段轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基配方中。設(shè)置基本培養(yǎng)基[WPM[24]、1/2 MS（大量元素減半）、MS]、6-BA（0.5、1.0和1.5 mg/L）、IBA（0.01、0.05和0.1 mg/L）和蔗糖（20、30和40 g/L）4因素3水平，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。每處理接種30瓶，每瓶接種5個(gè)嫩莖或莖段，重復(fù)3次。培養(yǎng)60天后，統(tǒng)計(jì)增殖倍數(shù)，并記錄增殖情況。1.3.4生根培養(yǎng)選擇生長(zhǎng)健壯，高度大于1.5 cm的試管苗嫩莖進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度（24±2）℃，光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度60μmol/（m2·s）。采用以下8種培養(yǎng)基進(jìn)行生根誘導(dǎo)：（1）1/2 MS；（2）1/2 MS+ 0.3 mg/L NAA；（3）1/2 MS+0.3 mg/L IBA；（4）1/2 MS+0.3 mg/L IBA + 0.3 mg/L NAA；（5）1/2 MS + 0.5 mg/L IBA + 0.3 mg/L NAA；（6）1/2 MS+0.3 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA；（7）1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA；（8）1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 mg/L NAA；以上各培養(yǎng)基均添加2%蔗糖、7 g/L卡拉膠和0.2 g/L活性炭（AC）。每處理接種30瓶，每瓶接種10個(gè)嫩莖，重復(fù)3次。生根培養(yǎng)60天后，觀察生根情況并統(tǒng)計(jì)生根率，有效生根為嫩莖生根條數(shù)3條以上，根長(zhǎng)2 cm以上。

生根率=（有效生根株數(shù)/生根總株數(shù)）×100%（3） 1.3.5煉苗移栽誘導(dǎo)生根苗根長(zhǎng)2 cm左右時(shí)即可進(jìn)行煉苗移栽。移栽前，溫室煉苗10天。用鑷子將小苗從培養(yǎng)瓶中取出，用清水洗凈根系，移栽到泥炭土：珍珠巖=3：2（V/V）混合基質(zhì)的育苗床上，移栽完成后澆透定根水。移栽初期用塑料薄膜小拱棚保濕保溫，濕度80%以上，溫度保持在15～30℃之間，光照太強(qiáng)時(shí)適當(dāng)遮陰。移栽小苗新根出現(xiàn)后每隔10天噴施1‰磷酸二氫鉀溶液；塑料小拱棚兩頭開(kāi)口慢慢放風(fēng)，進(jìn)行環(huán)境適應(yīng)性鍛煉，待小植株恢復(fù)健壯生長(zhǎng)后就可移去塑料薄膜。移栽30天后統(tǒng)計(jì)成活率。

移栽成活率=（存活苗數(shù)/移栽苗數(shù)）×100%…（4）

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2007和DPS 3.01專業(yè)版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及處理。

2結(jié)果與分析

2.1外植體誘導(dǎo)

將滅菌外植體莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種后15天，外植體莖段葉柄開(kāi)始松動(dòng)脫落；除空白（ck）處理外，25天后莖段開(kāi)始萌動(dòng)；45天后腋芽伸長(zhǎng)形成新梢。有些外植體莖段雖然萌動(dòng)，卻不能抽生新稍，最終干枯死亡。

不同處理對(duì)外植體的萌動(dòng)和成活有一定的影響，如表1所示。無(wú)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理7（ck），無(wú)萌動(dòng)和無(wú)成活；低濃度（0.5 mg/L）和高濃度（3.0 mg/L）的6-BA對(duì)外植體萌動(dòng)不具有促進(jìn)作用，萌動(dòng)率較低；6-BA濃度為1.0～2.5 mg/L時(shí)，萌動(dòng)率隨6-BA濃度增加先升高然后降低，當(dāng)6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，萌動(dòng)率最高為71.77%；成活率總體呈現(xiàn)出與萌動(dòng)率相似的變化現(xiàn)象，高濃度的6-BA抑制外植體抽生嫩莖，且影響嫩莖的質(zhì)量，出現(xiàn)嚴(yán)重的玻璃化。綜上分析，適合‘哈伯’南天竹誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS +2.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L IBA+蔗糖30 g/L（圖1A）。

2.2增殖培養(yǎng)基篩選

L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果表明（表2），隨著培養(yǎng)基中6-BA濃度的增高，‘哈伯’南天竹試管苗的增殖倍數(shù)增加，由于基本培養(yǎng)基的不同表現(xiàn)出不同的長(zhǎng)勢(shì)。處理3，即WPM+1.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L IBA+蔗糖40 g/L是最好的處理，增殖倍數(shù)最大為5.11，與其他處理具有極顯著性差異，生長(zhǎng)勢(shì)表現(xiàn)良好。從極差分析結(jié)果可以看出，6-BA是影響‘哈伯’南天竹試管苗增殖倍數(shù)的主要因子（R=1.87），基本培養(yǎng)基對(duì)試管苗的增殖倍數(shù)影響也較大（R=0.88），IBA濃度的影響不大（R= 0.27），蔗糖用量的影響最?。≧=0.12）。以不定芽增殖倍數(shù)為參考指標(biāo)，綜合考慮，優(yōu)選出‘哈伯’南天竹試管苗的最佳增殖培養(yǎng)基配方為WPM+1.5 mg/L 6-BA+ 0.01 mg/L IBA +蔗糖30 g/L（圖1B），在此優(yōu)選增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，增殖率可達(dá)6.3以上。

2.3生根培養(yǎng)基篩選

選擇健康、莖段長(zhǎng)度1.5 cm及以上的嫩莖接種于不同處理的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其生根誘導(dǎo)效果表現(xiàn)不同的差異（表3）。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)‘哈伯’南天竹組培苗生根誘導(dǎo)具有促進(jìn)作用，不添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理1不生根，生根率隨IBA和NAA濃度增加而提高。組培苗誘導(dǎo)生根根系品質(zhì)受IBA、NAA濃度及比例影響；處理2和處理3生根率差異不顯著，根系品質(zhì)有較大差別，NAA誘導(dǎo)出的根系細(xì)長(zhǎng)且柔軟，IBA誘導(dǎo)出的根系短粗且脆；處理4和處理5及處理6和處理7均有類似現(xiàn)象，且隨IBA濃度的增加，生根嫩莖愈傷變大；處理8生根率為97.63%，與其他處理有極顯著差異，根細(xì)品質(zhì)好。綜合生根效果及根系品質(zhì)優(yōu)選，‘哈伯’南天竹最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 mg/L NAA（圖1C）。

2.4煉苗移栽

選擇根系較好的健壯植株移栽到泥炭土：珍珠巖= 3：2（V/V）混合基質(zhì)的育苗床上，經(jīng)過(guò)30天的移栽管理，移栽成活率96.67%，幼苗根系及植株生長(zhǎng)良好（圖1D）。

3討論

3.1組培繁育的必要性

Meyer[7]報(bào)道指出‘Harbour Dwarf’南天竹于1956年發(fā)現(xiàn)，是一個(gè)以苗圃主人（Harbour C. L.）姓氏命名的南天竹栽培品種。其作為矮生類型新品種于2013年引種至浙江杭州，經(jīng)過(guò)6年連續(xù)的區(qū)域適應(yīng)性栽培試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，具有耐陰、耐寒、耐瘠薄、耐高溫，病蟲(chóng)害極少；秋季氣溫轉(zhuǎn)涼，葉色轉(zhuǎn)紅（圖1E），尤其是冬季，葉色變?yōu)轷r紅（圖1F）的特性。該品種能適應(yīng)我國(guó)絕大部分地區(qū)的氣候條件，秋冬變色效果尤以長(zhǎng)江以北區(qū)域?yàn)樽罴眩呛线m的園林景觀地被及色塊植物品種，亦可盆栽作為家庭園藝植物產(chǎn)品，具有廣闊的商業(yè)開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

南天竹常規(guī)繁育主要采用扦插、種子播種及分株繁殖，由于‘哈伯’南天竹植株低矮、年生長(zhǎng)量不大、莖節(jié)短的特性，無(wú)法獲得充足的扦插穗條用于扦插；偶有開(kāi)花結(jié)實(shí)，果實(shí)自然脫落率極高，暫未收集到成熟果實(shí)。筆者所在的團(tuán)隊(duì)通過(guò)扦插繁育試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，‘哈伯’南天竹扦插比較容易生根，成活率較高，但受限于插條的數(shù)量，未能在短期內(nèi)獲得大量種苗。植物組織培養(yǎng)技術(shù)恰好能打破因插條數(shù)量不足而造成的擴(kuò)繁困難的窘境，一旦建立起完善的組培快繁技術(shù)體系，可快速繁殖種苗。

3.2外植體材料預(yù)處理

合適的外植體材料是取得組織培養(yǎng)成功的前提條件。取材時(shí)節(jié)、取材部位以及取材母樹(shù)的生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)組培成功與否具有直接的影響。在本研究中發(fā)現(xiàn)，大田盆栽母本外植體材料消毒非常困難，多次試驗(yàn)未能獲得外植消毒成功，主要污染為真菌污染，從葉鞘內(nèi)長(zhǎng)出菌絲，其原因可能是母本材料自身特性造成的，自然條件下植株節(jié)間極短，呈現(xiàn)出葉鞘抱莖互生狀，消毒劑不能徹底殺滅葉鞘內(nèi)部的真菌，以及大田環(huán)境不干凈的原因，從而導(dǎo)致消毒失敗。2017年2月，筆者將大田盆栽轉(zhuǎn)移至溫室并進(jìn)行平茬處理，半個(gè)月后植株莖基部陸續(xù)萌發(fā)新芽，為保證外植體取材的需求，保留2～3個(gè)新生嫩莖，其余萌芽全部抹除；為了加快生長(zhǎng)速度以及增大莖段節(jié)間長(zhǎng)度，間隔10天，噴施0.2 mg/L 6-BA和0.5 mg/L赤霉素混合液2次。4月中上旬新生枝條長(zhǎng)度10～30cm，莖段直徑0.2cm左右，節(jié)間長(zhǎng)度0.5～4cm。剪取此半木質(zhì)化莖段作為外植體材料，進(jìn)行和大田材料一樣的消毒處理，取得了消毒成功并建立了組培體系。所以，對(duì)于節(jié)間極短的繁育材料，可通過(guò)一定的技術(shù)處理使其快速生長(zhǎng)，增加節(jié)間長(zhǎng)度，從而降低外植體消毒難度。

3.3外植體誘導(dǎo)

影響植物細(xì)胞、組織和器官形態(tài)發(fā)生有諸多因素，其中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度是主要因素[25]，外植體的誘導(dǎo)萌芽主要受植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的影響。試驗(yàn)中以MS為基本培養(yǎng)基，添加2.0 mg/L6-BA和0.1 mg/L IBA，促進(jìn)了腋芽的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率可達(dá)71.77%，且能激發(fā)外植體莖段2個(gè)腋芽同時(shí)萌發(fā)（圖1A），提高了外植體誘導(dǎo)率。在‘哈伯’南天竹莖段腋芽誘導(dǎo)試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)6-BA誘導(dǎo)作用顯著，既能促進(jìn)腋芽萌發(fā)，也適合萌芽嫩莖的生長(zhǎng)，低濃度時(shí)萌發(fā)率較低，但過(guò)高濃度則抑制腋芽的萌發(fā)，同時(shí)有玻璃化現(xiàn)象出現(xiàn)，這與馬麗娜等[26]的報(bào)道相一致。生長(zhǎng)素有助于緩解高濃度分裂素造成的玻璃化，這可能是誘導(dǎo)萌芽階段吸收了外源生長(zhǎng)素，改變了分裂素/生長(zhǎng)素比例的緣故，關(guān)于分裂素/生長(zhǎng)素比例對(duì)外植體誘導(dǎo)的影響還需進(jìn)一步研究。

3.4增殖培養(yǎng)

不定芽的誘導(dǎo)和增殖是植物組織培養(yǎng)再生體系建立成功與否的關(guān)鍵，而解決幼芽的增殖數(shù)量和速率是再生體系中重要的一步[27]。試管苗的增殖率受到生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及配比的影響，提高分裂素用量，會(huì)增加叢生芽數(shù)量，同時(shí)試管苗高度會(huì)降低，過(guò)高濃度使用時(shí)，從芽分化困難，甚至造成玻璃化，使用合適濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑既可保證增殖系數(shù)又能分化出一定高度的嫩莖用于生根培養(yǎng)，省去壯苗培養(yǎng)環(huán)節(jié)，節(jié)省時(shí)間成本提高工作效率。本研究結(jié)果顯示，WPM +1.5 mg/L 6-BA+ 0.01 mg/L IBA是‘哈伯’南天竹較為適宜的增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)6.3。確?？沙掷m(xù)性生產(chǎn)以及降低潛在的種苗后代變異的風(fēng)險(xiǎn)，工廠化生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)降低6-BA的使用濃度到1.0 mg/L，瓶苗增殖系數(shù)控制在3～4為宜。

3.5生根誘導(dǎo)

以往研究表明大多數(shù)木本植物組培快繁存在誘導(dǎo)生根困難的問(wèn)題[28，29]，這可能與培養(yǎng)基成分、激素種類、比例不同以及基因型有關(guān)[30]，通常采取調(diào)整生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及比例做進(jìn)一步優(yōu)化，提高誘導(dǎo)生根率，都明理[31]指出外植體誘導(dǎo)及增殖階段的培養(yǎng)條件影響試管苗本身激素水平和生長(zhǎng)狀態(tài)，進(jìn)而影響誘導(dǎo)生根；也有研究表明[32]，誘導(dǎo)生根率隨著繼代次數(shù)的增加而提高，本研究結(jié)果與其研究結(jié)論相類似。‘哈伯’南天竹在連續(xù)繼代6次以后，生根誘導(dǎo)率明顯提高，由以前（繼代次數(shù)3～5次）的不足10%提高到50%左右；當(dāng)繼代次數(shù)達(dá)到10次后，生根誘導(dǎo)率可達(dá)95%以上且呈現(xiàn)穩(wěn)定狀態(tài)。推測(cè)可能的原因是隨著繼代次數(shù)的增多，增殖苗自身激素達(dá)到了利于生根的平衡狀態(tài)，關(guān)于試管苗內(nèi)源激素隨繼代次數(shù)動(dòng)態(tài)變化如何影響誘導(dǎo)生根率需要進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

本研究中以‘哈伯’南天竹半木質(zhì)化莖段為外植體材料建立了組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模工廠化生產(chǎn)繁育。最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS + 6-BA 2.0 mg/L + IBA 0.1 mg/L +蔗糖30 g/L；最佳增殖培養(yǎng)基為WPM +6-BA 1.5 mg/L + IBA 0.01 mg/L +蔗糖30 g/L；最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+ IBA 0.5 mg/L + NAA 1.0 mg/L +蔗糖20 g/L + AC 0.2 g/L。截止發(fā)表論文之時(shí)，通過(guò)此組培快繁體系繁育種苗200余萬(wàn)株，盆栽和地栽種苗生長(zhǎng)良好，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)不良以及變異種苗。

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