15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑高效液相色譜分析

胥亞云，吳建蘭，曹新梅，陳玲玲

(聯(lián)合國南通農(nóng)藥劑型開發(fā)中心，江蘇南通 226006)

嘧菌酯(azoxystrobin)屬高效、廣譜、低毒的甲氧基丙烯酸酯類農(nóng)藥，能夠抑制真菌分生孢子的產(chǎn)生，減少植物被侵染，對14-脫甲基化酶抑制劑、苯甲酰胺類、二羧酰胺類和苯并咪唑類產(chǎn)生抗性的菌株有效[1]，具有保護、治療、鏟除作用，被廣泛應用于瓜果、蔬菜、谷物、水稻等多種作物病害的防治。噻呋酰胺(thifluzamide)是噻唑酰胺類琥珀酸酯脫氫酶抑制劑，具有很強的內(nèi)吸傳導性和持效期長，對多種致病真菌有活性，尤其對擔子菌綱真菌引起的病害如紋枯病有特效[2]。15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑是聯(lián)合國南通農(nóng)藥劑型開發(fā)中心實驗室自制樣品，主要用于預防花生白絹病。目前嘧菌酯和噻呋酰胺的主要分析方法有液相色譜法[3-5]和氣相色譜法[6]，但二者復配制劑的分析方法尚未見文獻報道。本文采用液相色譜法同時測定試樣中嘧菌酯和噻呋酰胺的含量，方法簡單、高效，適用于該農(nóng)藥制劑質量控制。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

安捷倫1200高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器(DAD)；Eclipse XDB Cl8不銹鋼色譜柱 (4.6 mm×150 mm，5 μm)；微孔濾膜(混合纖維樹脂，孔徑約0.45 μm)(上海興亞凈化材料廠)；電子天平(BSA224S)(賽多利斯科學儀器有限公司)；超聲波振蕩器(JP-030S)(深圳市潔盟清洗設備有限公司)。

新蒸二次蒸餾水；甲醇、乙腈均為色譜級(國藥集團化學試劑有限公司)；嘧菌酯標樣(質量分數(shù)98.8%)、噻呋酰胺標樣(質量分數(shù)98.6%)(上海市農(nóng)藥研究所)；15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑(實驗室自制，嘧菌酯和噻呋酰胺比例為1∶2)。

1.2 色譜條件

梯度洗脫程序：0～10 min，甲醇/水=68/32(體積比)；11～14 min，甲醇/水=92/8(體積比)；15～18 min，甲醇/水=68/32(體積比)；流速：1.0 mL/min。柱溫：室溫；檢測波長：225 nm；進樣體積：5 μL。在上述色譜條件下嘧菌酯和噻呋酰胺的保留時間分別約為3.7 min和7.0 min。

1.3 測定步驟

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取嘧菌酯標樣0.25 g和噻呋酰胺標樣0.5 g (均精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為標準儲備溶液。準確移取上述溶液5 mL于另一50 mL容量瓶中，以甲醇定容，搖勻，過濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取0.5 g(精確至0.000 2 g) 試樣，置于50 mL容量瓶中，用甲醇超聲提取10 min，冷卻后用甲醇定容，搖勻，過濾，備用。

1.3.3 測定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針峰面積的變化率，直至相鄰2針峰面積變化≤1.0%后，方可進行樣品分析。進樣順序為：標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液。典型色譜圖如圖1所示。

1.3.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標準溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)的峰面積分別平均，試樣中嘧菌酯(或噻呋酰胺)的質量分數(shù)W(%)按下式進行計算：

式中：A1為標樣溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中嘧菌酯(或噻呋酰胺)峰面積的平均值；m1為嘧菌酯(或噻呋酰胺)標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；p為嘧菌酯(或噻呋酰胺)標樣的質量百分含量，%。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

應用二極管陣列檢測器，在190～400 nm對1.3.1標準溶液進行光譜掃描，得到嘧菌酯和噻呋酰胺的紫外吸收光譜圖(圖2)，結果顯示，二者的最大吸收波長均在205 nm左右。為了避免洗脫液溶劑及樣品雜質峰的干擾，選擇225 nm作為檢測波長。

圖2 嘧菌酯與噻呋酰胺光譜圖

2.2 流動相的選擇

在等度洗脫條件下，分別用甲醇-水和乙腈-水體系作為流動相進行篩選試驗，發(fā)現(xiàn)當流動相有機相比例高時，樣品中雜質峰很難與目標峰分離；有機相比例低時，樣品中雜質峰又很難被洗脫，因此采用梯度洗脫程序?？紤]到乙腈-水體系的成本較高，首先選擇甲醇-水體系，進行梯度洗脫程序的優(yōu)化。經(jīng)反復測試發(fā)現(xiàn)，選擇在1.2節(jié)所示梯度洗脫程序下，兩種有效成分均能較好分離，且峰形對稱，基線平穩(wěn)，雜質峰也能很快被洗脫，保留時間適當。因此，選擇甲醇-水體系，采用初始流動相為甲醇/水=68/32(體積比)梯度洗脫程序進行分離檢測。

2.3 方法的線性相關性測定

用移液管移取1.3.1節(jié)中的標準儲備液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL于5個50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋，定容至刻度，搖勻，制成系列標準溶液。在上述色譜條件下測定其響應值。分別以濃度(x)和峰面積(y)為橫坐標和縱坐標，繪制標準曲線，得到兩種物質的線性方程及相關系數(shù)(表1)。結果表明，嘧菌酯在0.1～1.0 mg/L、噻呋酰胺在0.2～2.0 mg/L，方法的線性關系良好。

表1 線性方程及線性相關系數(shù)

2.4 方法精密度試驗

在選定的色譜條件下，對同一15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑樣品進行5次平行測定，計算標準偏差和變異系數(shù)，結果見表2。嘧菌酯的標準偏差和變異系數(shù)分別為0.021和0.41%；噻呋酰胺的標準偏差和變異系數(shù)分別為0.031和0.30%。

2.5 方法準確度試驗

采用加標回收法，在已知含量的同一15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑5個平行樣品中，分別加入1.3.1節(jié)中的標準儲備溶液1、2、3、4、5 mL，按照上述色譜操作方法進行分析，計算加標回收率，結果見表3。嘧菌酯的回收率為97.55%～100.54%，平均回收率為99.25%；噻呋酰胺的回收率為98.05%～100.34%，平均回收率為99.04%。

表2 方法精密度試驗

表3 準確度試驗

2.6 結論

本文采用液相色譜儀建立了同時測定15%嘧酯·噻呋酰胺種子處理微囊懸浮-懸浮劑中2種有效成分含量的分析方法。該方法能使兩種有效成分有效分離，線性關系良好，精密度和準確度較高，具有操作簡單、快捷、準確等優(yōu)點，可用于該復配制劑產(chǎn)品的質量控制。