超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定噻嗪酮在茭白中的殘留

郭明程，聶東興，湯 濤，李賢賓

(1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京100125；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，浙江杭州 310021)

噻嗪酮為噻二嗪類昆蟲蛻皮抑制劑，通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)的合成，干擾昆蟲的正常新陳代謝，致使昆蟲不能正常蛻皮和變態(tài)而死亡，主要用于防治水稻、柑橘、茶樹等作物的稻飛虱、介殼蟲、茶小綠葉蟬等[1-2]。目前已報(bào)道的噻嗪酮在茭白中殘留檢測(cè)方法很少[3]。本研究開發(fā)了利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定噻嗪酮在茭白中殘留的分析方法。該方法快速、簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，適用于大量茭白樣品中的噻嗪酮?dú)埩魴z測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

UPLC-XEVO TQ/MS型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Waters公司)；AB135-S型電子天平(精確至0.000 1 g，梅特勒-托利多公司)；SPS402F型電子天平(精確至 0.01 g，奧豪斯公司)；VTX-3000L型渦旋儀(杭州雷琪試驗(yàn)器材公司)；TYZD-IIA型振蕩器(天儀電子儀器有限公司)；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；V-700型真空泵(瑞士Buchi公司)。

噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品(純度98.5%，上海安譜科技有限公司)；乙腈、甲醇(色譜純，德國(guó)Merck)；甲酸(色譜純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)；無水硫酸鈉、氯化鈉、丙酮、石油醚(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；弗羅里硅土(650 ℃烘4 h，加5%水脫活，天津博納艾吉爾科技有限公司)；試驗(yàn)用水都為用Milli-Q超純水器純化處理得到的超純水。

1.2 樣品前處理

1.2.1 提取

準(zhǔn)確稱量5 g(精確至0.01 g)已均質(zhì)粉粹的茭白植株或茭白樣品，轉(zhuǎn)入250 mL錐形瓶中，移入10 mL水，茭白植株樣品加入 70 mL乙腈(茭白樣品加入50 mL乙腈)，振蕩30 min，抽濾后濾液轉(zhuǎn)入100 mL具塞量筒，加入氯化鈉至10 cm，搖勻2 min，靜置10 min，取上清液5 mL至250 mL平底燒瓶中，減壓濃縮至近干，待凈化。

1.2.2 凈化

層析柱(長(zhǎng)30 cm，內(nèi)徑1.0 cm)內(nèi)依次添加5 g弗羅里硅土(茭白植株另加0.10 g活性炭)、2 cm無水硫酸鈉。用10 mL石油醚預(yù)淋柱子，棄去淋洗液。將以上提取物用10 mL石油醚溶解洗滌2次，轉(zhuǎn)入層析柱中，棄去淋出液，用丙酮∶石油醚(30∶70，體積比) 30 mL洗脫，收集洗脫液，在40 ℃下減壓濃縮至干，甲醇定容5 mL，過0.22 μm濾膜，待檢測(cè)。

1.3 儀器檢測(cè)條件

1.3.1 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸水；色譜柱：Waters Acquity UPLCTM BEH C18色譜柱(1.7 μm，2.1 mm×50 mm)；流速為0.20 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：1.0 μL；保留時(shí)間：約3.26 min；采用梯度洗脫，洗脫條件見表1。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

1.3.2 質(zhì)譜儀器條件

離子源：正離子(ESI+)；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；脫溶劑氣流量：800 L/h；一級(jí)錐孔電壓：40 V；脫溶劑溫度：400 ℃；噻嗪酮定性定量離子對(duì)：m/z306.2(106.1*，116.1)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用色譜純乙腈作為溶劑，配制得到100 mg/L噻嗪酮母液，再依次稀釋為500.0、200.0、100.0、50.0、10.0、5.0、1.0、0.50 μg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述儀器檢測(cè)條件下進(jìn)行測(cè)定，以監(jiān)測(cè)離子峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5 添加回收率測(cè)定

在空白的茭白和茭白植株樣品中分別添加噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，茭白中添加水平為0.020、0.50、5.0 mg/kg，茭白植株樣品中添加水平為 0.020、0.50、5.0、20 mg/kg，每個(gè)添加水平濃度重復(fù)5次，用上述檢測(cè)方法測(cè)定添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

在流動(dòng)相為乙腈和水(50∶50，體積比)，進(jìn)樣體積為1 μL，流速0.2 mL/min的條件下，將質(zhì)量濃度為1.0 mg/L噻嗪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過蠕動(dòng)泵進(jìn)樣，分別在電噴霧電離負(fù)離子模式(ESI－)和正離子模式(ESI+)下，m/z 100～500范圍內(nèi)對(duì)母離子進(jìn)行全掃描。結(jié)果表明，噻嗪酮在ESI+下電離效果最好，信號(hào)強(qiáng)度比在ESI－下高，得到了m/z306.2的[M+H]+準(zhǔn)分子離子峰。二級(jí)質(zhì)譜掃描[M+H]+準(zhǔn)分子離子峰，獲得了碎片離子，分別選擇m/z306.2/116.1和m/z306.2/106.1作為定性離子對(duì)和定量離子對(duì)，用18 eV的能量碰撞時(shí)，m/z106.1碎片離子的響應(yīng)值更高，故選定m/z106.1為定量離子。

2.2 提取劑的選擇

提取劑的選擇是得到較高添加回收率的重點(diǎn)，通過待測(cè)物的樣品類型和理化性質(zhì)選定提取劑。依照樣品的性質(zhì)和噻嗪酮的理化特性，在 0.50 mg/kg加標(biāo)濃度條件下，考察了乙腈、甲醇和乙酸乙酯對(duì)茭白和茭白植株中噻嗪酮的提取效率。結(jié)果表明，乙腈和乙酸乙酯對(duì)茭白和茭白植株中噻嗪酮的提取效率較高，甲醇的提取效率較低，且難與水發(fā)生鹽析，而乙酸乙酯共提物的雜質(zhì)較多，都加大了后續(xù)凈化處理的難度。因此，選擇乙腈作為測(cè)定噻嗪酮在茭白和茭白植株中殘留的提取劑，同時(shí)在樣品中添加少量水，既減少共提物的基質(zhì)效應(yīng)，又提高提取效率。

2.3 方法線性范圍、檢出限與定量限

在上述分析條件下，以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，考察噻嗪酮的線性關(guān)系。結(jié)果表明，在0.5～500 μg/L范圍內(nèi)，噻嗪酮的峰面積與質(zhì)量濃度表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=69 664.988 0x+553 363.735 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.995 2。按信噪比(S/N)為3計(jì)，噻嗪酮的檢出限為5.0×10-13g，以低檔添加濃度為準(zhǔn)，噻嗪酮在茭白和茭白植株中的定量限為0.02 mg/kg。

2.4 添加回收率和精密度

在優(yōu)化的樣品前處理?xiàng)l件和儀器條件下，進(jìn)行空白基質(zhì)加標(biāo)回收試驗(yàn)，在各添加濃度下，結(jié)果見表2。噻嗪酮在茭白中添加濃度為0.020～5.0 mg/kg時(shí)，平均添加回收率為 98%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為7.4%～10.8%；在茭白植株中添加濃度為0.020～20.0 mg/kg時(shí)，平均添加回收率為 84%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.2%～10.6%。圖1～5為噻嗪酮標(biāo)樣、茭白基質(zhì)空白、茭白添加、茭白植株基質(zhì)空白和茭白植株添加噻嗪酮的典型譜圖。

表2 噻嗪酮在茭白和茭白植株中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖1 0.01mg/L噻嗪酮溶劑標(biāo)樣色譜圖

圖2 茭白基質(zhì)空白色譜圖

圖3 茭白中添加0.02mg/kg噻嗪酮色譜圖

圖4 茭白植株基質(zhì)空白色譜圖

圖5 茭白植株中添加0.02mg/kg噻嗪酮色譜圖

3 結(jié) 論

茭白和茭白植株樣品用乙腈提取，弗羅里硅土層析柱凈化，在正離子和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下，通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，建立了茭白和茭白植株中噻嗪酮?dú)埩袅康臋z測(cè)方法。在優(yōu)化條件下，噻嗪酮在茭白和茭白植株中的添加回收率為84%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2%～10.8%，最低檢測(cè)濃度為0.02mg/kg。該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，達(dá)到農(nóng)藥殘留分析要求，適用于噻嗪酮在茭白中的殘留抽檢監(jiān)測(cè)。