酶解時間對羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物抗氧化活性的影響

王晴, 石程宇, 錢玉梅, 李紅俠, 陳紅玲, 陳嶍嶍, 曹穩(wěn)根

酶解時間對羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物抗氧化活性的影響

王晴, 石程宇, 錢玉梅, 李紅俠, 陳紅玲, 陳嶍嶍, 曹穩(wěn)根

(宿州學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院,安徽 宿州, 234000)

為了探究酶解時間對羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物抗氧化活性的影響, 采用酸法提取羅非魚魚皮膠原蛋白, 胃蛋白酶酶解3、6、9、12和24 h制備酶解物, 進(jìn)行紫外光譜掃描, 水解度測定, 以DPPH·、·OH和O2-·清除率為指標(biāo)評價抗氧化活性。結(jié)果表明: 最大紫外吸收峰相似, 水解度與酶解時間呈正相關(guān); 9 h酶解物對三種自由基清除效果最好; 羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物抗氧化活性與酶解時間有關(guān), 為羅非魚魚皮進(jìn)一步加工利用提供理論依據(jù)。

羅非魚魚皮; 膠原蛋白; 酶解; 抗氧化活性

魚類來源膠原蛋白相比于哺乳動物來源的膠原蛋白具有生物安全性更高、材料來源更廣、生產(chǎn)成本更低廉等優(yōu)勢[1], 因此近年來人們對膠原蛋白來源的研究逐漸從哺乳動物轉(zhuǎn)移到魚類上。羅非魚俗稱非洲鯽魚、越南魚等, 屬鱸形目麗魚科羅非魚屬。該屬種類眾多, 共有600多個品種, 到如今人工養(yǎng)殖的大約有十五種。我國從1957年起逐漸引進(jìn)了十多個品種的羅非魚, 如: 紅羅非魚, 奧里亞羅非魚, 尼羅羅非魚和莫桑比克羅非魚等。羅非魚日益受到大眾的歡迎, 它的消費(fèi)量增加迅速[2]。中國是世界上最大的羅非魚養(yǎng)殖國, 也是最大的羅非魚出口國, 羅非魚及其加工制品已經(jīng)成為我國沿海地區(qū)的主要淡水產(chǎn)品。其中, 冷凍羅非魚片、魚排的出口增長尤其迅速, 由此也產(chǎn)生了大量魚皮、魚骨、魚鱗、內(nèi)臟等副產(chǎn)物[3], 其中羅非魚魚皮中膠原蛋白含量高且脂肪含量低, 具有較高利用價值。

膠原蛋白酶解產(chǎn)物中有大量膠原蛋白活性肽。肽是由氨基酸組成的蛋白質(zhì)亞單位, 通常含10個以上氨基酸殘基(<50個)的肽被稱為多肽, 而含10個以下的稱為寡肽或低聚肽[4–5]?；钚噪氖且磺Ф喾N含生理功能的肽的總稱, 其分子相對于蛋白質(zhì)小得多故人體的消化吸收率達(dá)到99%以上。膠原蛋白活性肽主要有抗氧化、清除自由基, 提高機(jī)體免疫力, 維持內(nèi)分泌系統(tǒng)穩(wěn)定性, 促進(jìn)腦細(xì)胞修復(fù)與營養(yǎng), 抗高血壓和高血脂等生理功能[6]。同時膠原蛋白活性肽還具有較好的穩(wěn)定性可以作為食品、藥品及化妝品等的功能因子。

張寒俊[7]等用堿性蛋白酶酶解羅非魚魚皮, 并測定了酶解液對羥自由基的清除能力, 結(jié)果表明, 當(dāng)水解度大于4%時, 清除率超過80%; 王成成[8]等用5種蛋白酶酶解羅非魚魚皮膠原蛋白60 min及120 min制成明膠肽, 綜合評價后發(fā)現(xiàn)酶解60 min的明膠肽活性大于酶解120 min的明膠肽的活性; 朱靜靜[9]等對膠原蛋白進(jìn)行二次酶解, 發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶經(jīng)二次酶解所得產(chǎn)物抗氧化活性較好。綜上表明, 膠原蛋白酶解產(chǎn)物的抗氧化活性跟其酶解條件有關(guān), 其中關(guān)于酶解時間對膠原蛋白酶解物抗氧化活性的影響尚未見報告。

本文以羅非魚魚皮為原料, 采用酸法提取膠原蛋白, 利用胃蛋白酶分別酶解3、6、9、12 h和24 h制備酶解物。測定不同酶解時間下膠原蛋白酶解物的紫外吸收光譜與水解度, 通過DPPH·、·OH、O2-·清除率探究酶解時間對羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物抗氧化活性的影響, 以期為羅非魚魚皮商業(yè)價值開發(fā)與羅非魚魚皮膠原蛋白的進(jìn)一步利用提供一些理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

羅非魚魚皮(江蘇省連云港市非凡水產(chǎn)公司); 胃蛋白酶、羥脯氨酸, 分析純(安徽省合肥市博美生物科技有限公司); DPPH(福建省福州市飛凈生物科技有限公司); 磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯胺T、對二甲氨基苯甲醛、氫氧化鈉、胃蛋白酶、硫酸亞鐵、鄰菲羅啉、焦性沒食子酸、甘氨酸、酪蛋白、乙酸、過氧化氫、無水乙醇、正丁醇, 均為分析純(上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-2恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司); FA1104B電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司); SP-723紫外—分光光度計(上海光譜儀器有限公司); SC-3612臺式離心機(jī)(江蘇榮華儀器制造有限公司); SHZ_D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限公司); FD-1C-50真空冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 羅非魚魚皮預(yù)處理

將羅非魚魚皮剪成2 cm × 2 cm的小塊, 去除雜質(zhì)并粉碎。將處理后的魚皮用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液浸泡24 h, 純水清洗至中性。后使用體積分?jǐn)?shù)為10%的正丁醇溶液浸泡24 h, 純水清洗至中性。最后使用75%乙醇溶液浸泡24 h, 純水清洗, 烘干備用。

1.3.2 魚皮膠原蛋白提取

采用酸法提取羅非魚魚皮膠原蛋白[10–11]。按照1︰20的料液比將經(jīng)預(yù)處理的魚皮于0.5 mol/L乙酸溶液中浸泡24 h, 將上述浸提液6 000 r/min離心20 min, 舍棄沉淀。取上清液于10倍體積0.1 mol/L的乙酸溶液中透析48 h, 每8 h更換1次透析液。再以10倍體積的蒸餾水透析24 h, 每8 h更換1次透析液, 透析至中性。所得膠原蛋白提取液冷凍干燥得羅非魚魚皮膠原蛋白, 于4 ℃封閉冷藏備用。

1.3.3 羅非魚魚皮膠原蛋白含量測定

羥脯氨酸為膠原蛋白所獨(dú)有的氨基酸, 一般其含量約為膠原蛋白干重14%。若膠原蛋白來源為陸生動物, 則換算系數(shù)為7.1, 若來源為水生動物換算系數(shù)為11.1。本文采用羥脯氨酸比色法測定膠原蛋白含量[12]。

(1) 羥脯氨酸標(biāo)曲繪制。吸取羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液加蒸餾水定容稀釋至不同濃度。取上述標(biāo)準(zhǔn)工作液4 mL加2 mL 0.05 mol/L的氯胺T溶液, 于室溫下靜置20 min。再加入2 mL對二甲氨基苯甲醛, 均勻混合后加塞, 于60 ℃水浴鍋中顯色20 min。取出冷水浴至室溫, 再次靜置30 min后在560 nm處測定吸光度, 以純水作空白管。以濃度為橫坐標(biāo), 以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得到回歸方程。

(2) 膠原蛋白含量測定。準(zhǔn)確稱取待測樣品1 g于圓底燒瓶, 加入50 mL6 mol/L鹽酸, 于120 ℃干燥箱中水解16 h。利用濾紙將水解產(chǎn)物濾至100 mL容量瓶, 加純水定容。再取其中1 mL, 定容至100 mL, 調(diào)節(jié)pH = 6.0, 搖勻備用。按上述標(biāo)曲繪制步驟, 測定樣品吸光度, 帶入回歸方程可得稀釋后的羥脯氨酸濃度。即得樣品中得膠原蛋白含量(%) = (羥脯氨酸濃度× 稀釋倍數(shù)× 11.1/樣品質(zhì)量) × 100。

(3) 膠原蛋白提取率測定。膠原蛋白提取率(%) = (1×1/(2×2)) × 100。其中:1為成品質(zhì)量(g);2為原材料質(zhì)量(g);1為成品膠原蛋白含量(%);2為原材料膠原蛋白含量(%)。

1.3.4 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物的制備

稱取羅非魚魚皮膠原蛋白, 溶解于磷酸鹽緩沖溶液, 制成底物質(zhì)量濃度為0.05 g/mL膠原蛋白溶液。在37 ℃、pH值為5.0、加酶量5%的條件下, 使用胃蛋白酶分別酶解時間3、6、9、12、24 h。然后于90 ℃滅酶10 min, 冷卻后再次冷凍干燥, 即得不同酶解時間下的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物, 于4 ℃貯藏備用。

1.3.5 紫外吸收光譜掃描

紫外吸收光譜法是一種常用的有機(jī)分析方法, 廣泛地應(yīng)用于有機(jī)化合物定性、定量或結(jié)構(gòu)鑒定。其具體操作為, 在室溫條件下取0.1 g不同酶解時間的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物溶解于200 mL 0.5 mol/L醋酸溶液中, 于紫外—可見光分光光度計上測定樣品在200~400 nm范圍內(nèi)的吸光度, 繪制紫外吸收曲線。

1.3.6 測定不同酶解時間膠原蛋白酶解物水解度

采用茚三酮比色法測定不同酶解時間下羅非魚魚皮膠原蛋白酶解的水解度DH[8]。其原理是蛋白質(zhì)或多肽中游離氨基可與水合茚三酮共熱產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物, 且在一定濃度范圍內(nèi)其顏色的深淺與游離氨基酸含量成正比。其具體操作為, 首先以甘氨酸為標(biāo)準(zhǔn)氨基酸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 然后取0.4 mL稀釋一定倍數(shù)的酶解液加蒸餾水1.6 mL、茚三酮1 mL均勻混合后于水浴鍋中沸水浴15 min, 最后取出冷水浴至室溫, 于570 nm處測定吸光度, 參考標(biāo)準(zhǔn)曲線計算游離氨基含量H(%) = ((-)/) × 100。其中:為酶解液中游離氨基含量;為膠原蛋白溶液中游離氨基含量;為強(qiáng)酸水解膠原蛋白溶液后游離氨基含量。

1.3.7 不同酶解時間膠原蛋白酶解物抗氧化活性

(1) 羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物對DPPH·的清除能力。參考尹利端等[13]的測定方法, 并在其基礎(chǔ)上適當(dāng)改動。取不同酶解時間的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物用磷酸鹽緩沖液配制成質(zhì)量濃度為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL的溶液作為樣品組。取2 mL樣品溶液加入2 mL的DPPH·無水乙醇溶液(2 mmol/L)于具塞試管中迅速搖勻, 室溫條件下避光反應(yīng)30 min。樣品液于517 nm處測定吸光度, 記為S。以同體積純水與同體積DPPH·無水乙醇溶液混合液測得吸光度A0。同時, 以同體積純水與同體積無水乙醇混合液測得吸光度B。樣品清除DPPH自由基的能力以吸光度值的變化作為判斷依據(jù)[14]。每組試驗(yàn)重復(fù)3次, 所得數(shù)據(jù)代入計算DPPH清除率=[1-(S-B)/0] × 100%。

(2) 羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物對·OH的清除能力。參考文獻(xiàn)[15]的測定方法, 并在其基礎(chǔ)上適當(dāng)改動, 取不同酶解時間的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物以磷酸鹽緩沖液配制成質(zhì)量濃度為2、4、6、8、10 mg/mL的溶液作為樣品組。將0.3 mL鄰菲羅啉溶液(1.5 mmol/L), 0.6 mL磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L, pH=8), 0.3 mL純水與0.3 mL硫酸亞鐵溶液(0.75 mmol/L)加入試管中, 充分混勻。再加入0.3 mL過氧化氫溶液(2 mmol/L), 于室溫下反應(yīng)45 min。再536 nm下測定吸光度, 記為B。用等體積純水代替過氧化氫溶液為空白組, 測得吸光度0。用等體積樣品溶液代替純水, 測得吸光度記S。每組試驗(yàn)重復(fù)3次, 所得羥自由基清除率=(S-0)/(B-0) × 100%。

(3) 羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物對O2-·的清除能力。參考張韞等[16]的測定方法, 并在其基礎(chǔ)上適當(dāng)改動。將不同酶解時間的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物用磷酸鹽緩沖液配制成質(zhì)量濃度為5、10、15、20、25 mg/mL的溶液作為樣品組。取1 mL樣品溶液與4.5 mL Tris-HCl緩沖液(0.1 mol/L, pH=8.0)混合, 置于25 ℃水浴鍋中預(yù)熱20 min。后加入同樣25 ℃預(yù)熱的焦性沒食子酸溶液(45 mmol/L) 0.4 mL, 充分混合后再置于25 ℃水浴鍋中反應(yīng)5 min。加入0.1 mL鹽酸(8 mmol/L)作為反應(yīng)終止劑。樣品液于320 nm下測定吸光度為1。以等體積純水代替樣品液作為空白組測得吸光度為0。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。按下列公式計算超氧自由基清除率(%) = (0-1)/0× 100。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅非魚魚皮中膠原蛋白含量及提取率

通過羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)計算得表1, 膠原蛋白提取率= (15.159 × 86.43)/(30.015 × 57.12%) × 100% = 76.42%。該數(shù)據(jù)表明, 干燥后得羅非魚魚皮中膠原蛋白含量達(dá)57.12%, 是一種較好的膠原蛋白提取原材料。使用酸法提取羅非魚魚皮膠原蛋白純度較高達(dá)86.43%, 其提取率約為76.42%。

圖1 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 膠原蛋白含量

2.2 紫外吸收光譜分析

通常, 膠原蛋白肽中的氨基酸殘基或其他次級鍵可在210~250 nm的波長范圍內(nèi)產(chǎn)生吸收峰, 肽鍵可在210 nm以下波長范圍產(chǎn)生吸收峰, 芳香族氨基酸殘基可在250~280 nm波長范圍內(nèi)產(chǎn)生吸收峰[17]。由圖2羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物的紫外吸收光譜可知, 這5組樣品的吸收峰均處于225 nm 左右。其中酶解時間為24 h組吸收峰出現(xiàn)在220 nm 處, 12 h組吸收峰出現(xiàn)在224 nm處, 9 h和6 h組吸收峰出現(xiàn)在225 nm處, 3 h組的最大紫外吸收峰在228 nm處。已知色氨酸和酪氨酸最大紫外吸收峰分別在280 nm左右, 苯丙氨酸最大紫外吸收峰在250 nm左右, 膠原蛋白幾乎不含色氨酸。由上述結(jié)果可推斷本試驗(yàn)提取得羅非魚魚皮膠原蛋白純度較高, 為典型膠原蛋白。

圖2 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物紫外吸收光譜

2.3 不同酶解時間膠原蛋白酶解物水解度

蛋白質(zhì)水解度DH是大分子蛋白質(zhì)受生物或化學(xué)因素影響而被水解的肽鍵占分子總肽鍵的百分比。由圖3可知, 隨著酶解時間的增長羅非魚膠原蛋白水解度不斷增長, 且增長趨勢逐漸趨于平緩。酶解時間從長到短, 這5組樣品組的水解度分別為: 0.96%、2.37%、5.13%、5.61%、5.95%。

圖3 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白水解度

2.4 不同酶解時間膠原蛋白酶解物抗氧化活性

2.4.1 DPPH·清除能力

由圖4可知, 這5組酶解時間不同的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物都具備一定的DPPH自由基清除能力, 且其對DPPH自由基的清除能力與樣液質(zhì)量濃度成正相關(guān), 各樣品組均于試驗(yàn)最大濃度質(zhì)量處達(dá)到最大清除率。其中, 以酶解時間為9 h制備的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除效果最好, 當(dāng)質(zhì)量濃度為3.0 mg/mL時, 其對DPPH自由基的清除率達(dá)到了80.05%。酶解時間為3 h組與12 h組清除效果相近, 在質(zhì)量濃度為3.0 mg/mL時清除率分別為64.44%和68.55%, 同時這兩組在質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL時出現(xiàn)重合。5種不同酶解時間制備的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除DPPH·能力由大到小依次為: 9 h>6 h>24 h>12 h>3 h。

圖4 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除DPPH·的能力

圖5 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除·OH的能力

2.4.2 ·OH清除能力

羥自由基是活性最強(qiáng)的氧自由基, 它能夠降解DNA、損傷細(xì)胞膜、殺死紅細(xì)胞, 從而引起衰老癌癥及其他多種病變, 因此清除羥自由基對疾病預(yù)防有重要意義[18]。由圖5可知, 試驗(yàn)中5組不同酶解時間的羅非魚膠原蛋白酶解物均具備一定清除羥自由基能力, 且其清除羥自由基能力隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng), 各樣品組均于試驗(yàn)最大濃度10 mg/mL處達(dá)到最大清除率。其中, 酶解時間為9 h組清除效果最好, 且線性相關(guān)性強(qiáng), 當(dāng)試驗(yàn)濃度為10 mg/mL時, 羥自由基清除率達(dá)到77.14%。酶解時間為24 h組, 清除率波動最大, 其清除能力與濃度不具備良好的線性相關(guān)性, 當(dāng)質(zhì)量濃度為10 mg/mL時達(dá)到最大清除率71.42%。5種不同酶解時間制備的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除·OH能力由大到小依次為: 9 h>12 h>6 h>3 h>24 h。

2.4.3 O2-·自由基清除能力

由圖6可知, 5組不同酶解時間的羅非魚魚皮膠原蛋白均具有一定清除超氧自由基能力, 在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對超氧自由基清除率呈增長趨勢, 在20 mg/mL質(zhì)量濃度左右各樣品組清除率達(dá)最大值, 超出該范圍后略有下降趨勢。其中, 仍以酶解時間為9 h組清除效果最好, 在質(zhì)量濃度為20 mg/mL時超氧自由基清除率為62.75%。其次為酶解時間為6 h組, 在質(zhì)量濃度達(dá)到20 mg/mL時, 其清除率為53.4%, 該組各質(zhì)量濃度時超氧自由基清除率都低于9 h組而優(yōu)于其他各樣品組。酶解時間24 h組在質(zhì)量濃度為15 mg/mL時超氧自由基清除率最大為50.04%, 而后隨著濃度增加超氧自由基清除率略有下降。5種不同酶解時間制備的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除O2-·能力由大到小依次為: 9 h>6 h>12 h>24 h>3 h。

圖6 不同酶解時間羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物清除O2-·的能力

3 結(jié)論

本文對使用胃蛋白酶酶解羅非魚魚皮膠原蛋白3、6、9、12 h及24 h下的酶解物抗氧化活性進(jìn)行探究, 測定了各樣品組的紫外吸收光譜、水解度DH及在一定濃度范圍內(nèi)對DPPH·、·OH和O2-·清除率, 結(jié)果表明: 不同酶解時間下的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物的最大紫外吸收峰均出現(xiàn)在波長為225 nm左右, 其紫外吸收光譜特性符合典型膠原蛋白的紫外吸收特性; 酶解時間越長羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物的水解度越高, 但其自由基清除能力并不隨之增高, 故水解度與抗氧化活性相關(guān)性低; 不同酶解時間下的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解產(chǎn)物對不同的自由基清除能力各有高低, 但都在一定濃度范圍內(nèi)隨著濃度的增高清除率呈上升趨勢而后趨于平緩或下降。其中, 酶解時間為9 h制備的羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物對DPPH自由基、羥自由基和超氧自由基的清除效果都最好, 清除率分別達(dá)到80.05%、77.14%和62.75%。隨著酶解的進(jìn)行, 羅非魚魚皮膠原蛋白水解程度不斷變化, 其中有部分大分子基團(tuán)逐漸分解成抗氧化多肽, 同時也有部分抗氧化多肽等活性物質(zhì)被分解而失去抗氧化活性[19], 以致酶解時間9 h組清除DPPH·、·OH和O2-·自由基能力最優(yōu); 二是活性肽的抗氧化活性與其特定的氨基酸組成、氨基酸序列、空間結(jié)構(gòu)及分子質(zhì)量等因素密切相關(guān)[20–21], 同種活性肽清除不同自由基的能力也不同, 故各樣品組清除DPPH自由基、羥自由基和超氧自由基能力各有高低。本文證明了羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物的抗氧化活性與酶解時間有關(guān)。在一定條件下制備的羅非魚皮膠原蛋白酶解物具有良好的清除DPPH·、·OH和O2-·自由基能力, 這種能夠抗衰老和預(yù)防重大疾病的生理功能使羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物擁有廣闊的應(yīng)用范圍和商業(yè)價值, 譬如作為美容護(hù)膚品、功能保健品、食品和藥品的有效成分。在此前提下, 無論是對羅非魚魚皮膠原蛋白酶解物功效或最佳工藝的深入研究, 或以此為參考開發(fā)魚骨、魚鱗、內(nèi)臟等其它副產(chǎn)物的功能, 都能帶來巨大的社會效益與經(jīng)濟(jì)效益。

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Effects of hydrolysis time on antioxidant activity of tilapia skin collagen proteolytic

Wang Qing, Shi Chengyu, Qian Yumei, Li Hongxia, Chen Hongling, Cao Wengen, Zang Feng

(School of Biology and Food Engineering, Suzhou University, Suzhou 234000 China)

To investigate the effect of enzymolysis time on the antioxidant activity of collagen protein hydrolysate of tilapia fish skin. Acidic extraction of tilapia fish skin collagen, pepsin enzymolysis for 3, 6, 9, 12 and 24 h to prepare enzymatic hydrolysate, UV spectrum scanning, hydrolysis degree determination, using DPPH, OH and O2-·.The clearance rate is an index to evaluate antioxidant activity. The maximum UV absorption peak was similar, and the degree of hydrolysis was positively correlated with the enzymolysis time. 9 h enzyme hydrolysate has the best effect on scavenging three free radicals. Conclusion: The antioxidant activity of collagen proteolytic products of tilapia fish skin is related to the time of enzymolysis, which provides a theoretical basis for further processing and utilization of tilapia fish skin.

tilapia skin; collagen; enzymatic hydrolysis; antioxidant activity

10.3969/j.issn.1672–6146.2021.01.008

TS 254.9

A

1672–6146(2021)01–0036–06

王晴,szxywangqing@163.com。

2020–06–01

安徽省自然科學(xué)基金項目(1908085MC100); 安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項目(KJ2018A0443, KJ2017A- 441); 安徽省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項目(201910379125); 宿州學(xué)院學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人項目(2016XJXS06); 宿州學(xué)院教授(博士)科研啟動基金項目(2016jb02); 宿州學(xué)院科研平臺開放課題(2017ykf05, 2019ykf28)。

(責(zé)任編校: 劉剛毅)