• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    苜蓿質(zhì)膜內(nèi)在蛋白編碼基因MsPIPs家族的密碼子偏好性分析

    2021-01-29 10:44:14張海霞,王玉道,許雪妮
    江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報 2021年6期
    關(guān)鍵詞:突變

    張海霞,王玉道,許雪妮

    摘要:利用CodonW軟件分析苜蓿質(zhì)膜內(nèi)在蛋白編碼基因(MsPIPs)的密碼子組成,發(fā)現(xiàn)它們的密碼子在堿基使用中存在偏倚,偏好使用以T/A結(jié)尾的密碼子,其中T結(jié)尾的密碼子出現(xiàn)頻率為47%。MsPIPs密碼子的平均有效密碼子數(shù)(ENC)為45.47個,偏好性較弱。通過主成分分析(PCA)、對應(yīng)性分析(COA)、偏倚分析(PR2)、有效密碼子數(shù)分析(ENC plot)和中性分析等多重分析方法對苜蓿MsPIPs密碼子偏好性的成因進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)苜蓿MsPIPs的偏好性主要受自然選擇的影響。

    關(guān)鍵詞:質(zhì)膜內(nèi)在蛋白;密碼子偏好性;自然選擇;突變

    中圖分類號:S551+.7文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1000-4440(2021)06-1393-07

    Codon usage bias analysis of MsPIPs gene family which encode plasma membrane intrinsic proteins in alfalfa

    ZHANG Hai-xia,WANG Yu-dao,XU Xue-ni

    (Forestry Technology Popularization Station of Minqin County in Gansu Province, Minqin 733300, China)

    Abstract:By using software CodonW to analyze the codon composition of plasma intrinsic protein encoded by MsPIPs gene in alfalfa, it was found that the codons showed bias in nucleobase use, the codons of MsPIPs preferred T/A endings, and the frequency of occurrence of T-ending codons was 47%. The average effective number of codons (ENC) of MsPIPs codons was 45.47, which had a weak codon bias. Through multivariate analytical methods combined by principal component analysis (PCA), corresponding analysis (COA), parity rule 2 plot mapping analysis (PR2), ENC plot analysis and neutrality plot analysis, the reason of the codon bias of the MsPIPs gene in alfalfa was analyzed, and it was found that the bias of MsPIPs in alfalfa might be driven by natural selection.

    Key words:plasma membrane intrinsic proteins;codon usage bias;natural selection;mutation

    密碼子在遺傳信息傳遞過程中起著至關(guān)重要的作用[1]。編碼不同氨基酸的密碼子的準(zhǔn)確識別是保證基因信息準(zhǔn)確表達(dá)的關(guān)鍵[2]。除了甲硫氨酸(Met)和色氨酸(Trp)由唯一的密碼子編碼外,大部分氨基酸均由2~6個同義密碼子編碼,同義密碼子在不同植物體內(nèi)的使用頻率有差異,形成了密碼子使用偏性[3]。密碼子使用偏性受群體中突變壓力、選擇壓力和基因漂變的影響,對研究基因功能、物種進(jìn)化等具有重要科學(xué)意義[4]。

    質(zhì)膜內(nèi)在蛋白(Plasma membrane intrinsic proteins,PIPs)定位在質(zhì)膜上,是水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)的亞家族成員,屬于主要內(nèi)在膜蛋白(Major intrinsic protein, MIP)家族[5]。目前,研究者們已經(jīng)從擬南芥、玉米和番茄等中分別鑒定到13個、13個和18個PIPs基因[6]。在植物生長發(fā)育過程中,PIPs主要負(fù)責(zé)植物體內(nèi)水分的吸收和運輸,也參與植物體內(nèi)營養(yǎng)及元素的運輸及細(xì)胞生長分化過程[7]。在干旱和鹽等非生物脅迫下,通過活性和表達(dá)情況的改變,PIPs在植物對非生物脅迫的應(yīng)答過程中發(fā)揮著重要作用[8]。對PIPs基因家族密碼子使用偏性的分析可為該家族編碼蛋白結(jié)構(gòu)和功能研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    2020年,苜蓿基因組全序列的公布[9]使得利用生物信息學(xué)手段在全基因組水平上研究苜蓿成為可能,但是苜蓿PIPs基因家族尚未見報道,且PIPs的密碼子使用偏性規(guī)律也不清楚。本研究以從苜?;蚪M中鑒定到的PIPs基因家族為基礎(chǔ),進(jìn)行密碼子偏好性分析,明確該基因家族的密碼子使用規(guī)律,為進(jìn)一步展開功能研究和苜??剐愿牧继峁├碚撘罁?jù)。

    1材料和方法

    1.1數(shù)據(jù)來源

    在苜?;蚪M的Swissprot數(shù)據(jù)庫[9]中搜索包含“PIP”和編碼序列(CDS)長度大于300 bp的序列,并在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行這些序列的BLAST搜索,進(jìn)一步鑒定PIP序列。篩選出的26個MsPIPs基因序列按照MsPIP1~MsPIP26進(jìn)行命名(表1)。

    1.2苜蓿PIPs基因家族密碼子組成分析

    采用CondonW 1.3軟件(https://sourceforge.net/projects/codonw/)分析計算苜蓿PIPs基因家族基因的密碼子組成,包括同義密碼子相對使用度(Relative synonymous codon usage value,RSCU)值、有效密碼子數(shù)(Effective number of codons,ENC)、G+C含量、第3位堿基組成(A3S、T3S、G3S和C3S)等指標(biāo)[10]。第1位堿基的G+C含量(GC1)、第2位堿基的G+C含量(GC2)、第3位堿基的G+C含量(GC3)及第1和2位堿基的G+C含量(GC12)通過EMBOSS (http://imed.med.ucm.es/cgi-bin/emboss.pl?_action=input&_app=cusp)的Cusp功能計算得到[11]。

    1.3最優(yōu)密碼子的確定

    以ENC值為標(biāo)準(zhǔn)對上述篩選出的PIPs序列進(jìn)行排序,從排序結(jié)果的兩端各選取5%的基因建立高低偏性庫,計算高低偏性庫的△RSCU值,計算公式為:△RSCU=RSCU高偏性-RSCU低偏性。具有最高RSCU值的密碼子被稱為高頻密碼子,具有最大△RSCU值的密碼子被稱為高表達(dá)密碼子,同時滿足最高RSCU值和最大△RSCU值的密碼子被確定為最優(yōu)密碼子[12]。

    1.4苜蓿MsPIPs基因家族密碼子的偏好性分析

    按照Wei等[13]的方法進(jìn)行主成分分析(Principal component analysis,PCA),將密碼子的使用頻率分布在一個59維的向量空間中。利用對應(yīng)性分析(Corresponding analysis,COA),比較2個或更多類別的變量數(shù)據(jù),為密碼子使用趨勢和基因的主要變化研究提供直觀結(jié)果。利用偏倚分析(Parity rule 2 plot mapping analysis,PR2)分析各個密碼子第3位堿基組成(A3S、T3S、G3S和C3S)的情況。利用ENC-plot分析展示ENC和GC3的函數(shù)關(guān)系,使用中性分析(Neutrality plot mapping analysis)展示GC12和GC3的函數(shù)關(guān)系。

    1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    使用Excel 2016制圖。

    2結(jié)果與分析

    2.1苜蓿MsPIPs家族基因CDS序列的密碼子組成

    從苜?;蚪M中篩選到26條MsPIPs基因,總GC含量為38%~50%,平均值為45%(表1)。MsPIPs的密碼子第3位堿基上A、T、C、G出現(xiàn)的平均頻率分別為28%、47%、26%和17%,表明苜蓿MsPIPs偏好使用以T/A結(jié)尾的密碼子。MsPIPs的ENC為38.87~49.54個,平均值為45.47個,表明苜蓿MsPIPs對密碼子使用的偏好性較弱。

    2.2苜蓿MsPIPs的最優(yōu)密碼子

    將苜蓿MsPIPs各成員氨基酸對應(yīng)密碼子的RSCU值整理求平均值后,得到MsPIPs家族密碼子的RSCU分析結(jié)果。各氨基酸中具有最高RSCU值的20個密碼子被確定為高頻密碼子(表2)。27個密碼子被確定為高表達(dá)密碼子(△RSCU>0.08)(表3)。10個密碼子被確定為最優(yōu)密碼子,分別是UUU、GUU、CCA、ACU、GCU、UAC、CAA、AAA、UGU和GGU。

    2.3苜蓿MsPIPs密碼子的偏好性

    基于RSCU值的PCA結(jié)果顯示,26個MsPIPs的密碼子使用頻率分布在25個軸上,向量軸1~4分別解釋了20.65%、16.18%、14.57%和13.81%的軸貢獻(xiàn),累計貢獻(xiàn)率為65.21%,表明向量軸1~4對密碼子偏好性有重要影響(圖1)。以第1和第2向量軸將MsPIPs分布在圖上,可以看出大部分成員分布在向量軸1的右半軸上(圖2)。進(jìn)一步通過COA分別分析了G+C含量(GC)、ENC值、GC3S和向量軸1~4的相關(guān)性。結(jié)果表明,GC3S與向量軸1和軸3呈極顯著負(fù)相關(guān),ENC值與向量軸2和軸4呈顯著或極顯著正相關(guān),G+C含量與向量軸3也呈顯著負(fù)相關(guān)(表4)。

    T3S:第3位堿基上T出現(xiàn)的頻率;C3S:第3位堿基上G出現(xiàn)的頻率;A3S:第3位堿基上A出現(xiàn)的頻率;G3S:第3位堿基上G出現(xiàn)的頻率;GC3S:第3位堿基上G+C出現(xiàn)的頻率;GC:G+C含量;ENC:有效密碼子數(shù)。

    GCG150.06TER:終止子;Phe:苯丙氨酸;Leu:亮氨酸;Ile:異亮氨酸;Met:甲硫氨酸;Val:纈氨酸;Ser:絲氨酸;Tyr:酪氨酸;His:組氨酸;Gln:谷氨酰胺;Asn:天冬酰胺;Lys:賴氨酸;Asp:天冬氨酸;Glu:谷氨酸;Cys:半胱氨酸;Pro:脯氨酸;Thr:蘇氨酸;Ala:丙氨酸;Trp:色氨酸;Arg:精氨酸;Gly:甘氨酸。

    通過PR2分析組成MsPIPs氨基酸的第3位密碼子中A/G和T/C的關(guān)系(圖3)。除MsPIP17和MsPIP21分布在第4象限,MsPIP6分布在中軸線上,其余MsPIPs均分布在第3象限,表明MsPIPs的密碼子組成存在偏倚,且大部分MsPIPs結(jié)尾T的使用頻率高于A,C的使用頻率高于G。

    如果基因密碼子的組成完全受突變的影響,則ENC的分析圖中,所有基因應(yīng)該落在標(biāo)準(zhǔn)曲線上。但是從ENC的分析結(jié)果可見,MsPIPs的所有基因成員均分布在預(yù)期ENC值的下方(圖4),表明MsPIPs的密碼子偏好受其他因素影響。此外,由表4可見,ENC和GC3s之間并無顯著相關(guān)性(r=0.113),表明第3位堿基上的G/C含量對密碼子的使用模式影響較小。

    中性分析圖將GC12和GC3的關(guān)系可視化,并可進(jìn)一步幫助評估密碼子組成受突變和選擇壓力影響的程度。由圖5可見,MsPIPs的所有基因成員均分布在對角線上方。

    A3/(A3+T3):第3位堿基上A的組成占第3位堿基上A、T組成的百分比;G3/(G3+C3):第3位堿基上G的組成占第3位堿基上G、C組成的百分比。

    ENC:有效密碼子數(shù);GC3S:第3位堿基上G、C的組成。

    GC12:第1和2位堿基的G+C含量;GC3:第3位堿基的G+C含量。

    3討論

    密碼子偏好性是多因素共同作用的結(jié)果,受自然選擇、堿基組成、基因表達(dá)水平、蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)等因素的影響[14-16],其中自然選擇和突變是主導(dǎo)密碼子偏好性的2類主要因素。楊國鋒等[17]發(fā)現(xiàn)蒺藜苜蓿葉綠體基因組的密碼子偏好性主要受到突變的影響。屈蒙蒙等[18]對香蕉質(zhì)膜內(nèi)在蛋白(PIPs)的密碼子偏好性分析結(jié)果表明,該家族基因受自然選擇的影響較大。可見,不同物種、不同基因類型的同義密碼子偏好性不同。

    本研究結(jié)果表明,苜蓿MsPIPs家族基因的密碼子多以T/A結(jié)尾。在得到的10個最優(yōu)密碼子中,有9個也是以T/A結(jié)尾。通過PR2分析,進(jìn)一步證實密碼子的第3位堿基組成存在偏倚。本研究結(jié)果與其他學(xué)者在翠雀[1]、沙棗[12]、蒺藜苜蓿[17]等植物中的研究結(jié)果一致。ENC值直接反映密碼子偏好性,以35為界,ENC值≤35表示密碼子偏好性強,ENC值>35則表示密碼子偏好性弱[19]。苜蓿MsPIPs密碼子的平均ENC值為45.47,表明MsPIPs存在密碼子偏好性,只是程度較弱。

    通過PCA、COA、ENC-plot和中性分析,進(jìn)一步分析造成MsPIPs密碼子偏好性的主要原因。從PCA和COA的結(jié)果可見,MsPIPs的成員主要分布在軸1的右半軸上,而軸1與GC3s呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系,這表明第3位堿基組成(主要是A/T結(jié)尾)對MsPIPs的密碼子偏好性有影響。軸1僅解釋20.65%的密碼子使用頻率差異,可見除堿基組成外,還有其他因素對MsPIPs的密碼子偏好性產(chǎn)生影響。ENC-plot分析能通過基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分布關(guān)系直接反映自然選擇和突變因素中的主導(dǎo)因素,如果基因落在標(biāo)準(zhǔn)曲線上,則表明基因的密碼子偏好性完全受突變的影響,反之則主要受自然選擇的影響[20]。本研究結(jié)果表明,MsPIPs所有成員均落在標(biāo)準(zhǔn)曲線下方,表明它們可能主要受到自然選擇的影響。這一推測也被中性分析進(jìn)一步證實。中性分析能有效地比較自然選擇和突變對密碼子偏好性的影響程度,當(dāng)GC12和GC3數(shù)值相同時,基因會分布在回歸曲線上,且該基因不同位置的堿基組成無差異,密碼子使用更多地受突變影響,反之則主要受自然選擇的影響[21]。MsPIPs的中性分析中,所有基因均分布在回歸曲線的上方,表明所有成員主要受到自然選擇的影響。

    4結(jié)論

    苜蓿質(zhì)膜水通道蛋白家族編碼基因(MsPIPs)的密碼子偏好性較弱,堿基使用存在偏倚,偏好使用以A/T結(jié)尾的密碼子,且偏好性主要受自然選擇的影響。本研究結(jié)果可為通過密碼子改造MsPIPs提供理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]DUAN H R, ZHANG Q, WANG C M, et al. Analysis of codon usage patterns of the chloroplast genome in Delphinium grandiflorum L. reveals a preference for AT-ending codons as a result of major selection constraints [J]. PeerJ, 2021, 9(6): e10787.

    [2]SAU K, GUPTA S K, SAU S, et al. Factors influencing synonymous codon and amino acid usage biases in Mimivirus [J]. Biosystems, 2006, 85: 107-113.

    [3]GUAN D L, MA L B, KHAN M S, et al. Analysis of codon usage patterns in Hirudinaria manillensis reveals a preference for GC-ending codons caused by dominant selection constraints [J]. BMC Genomics, 2018, 19: 542.

    [4]BULMER M. The selection mutation drift theory of synonymous codon usage [J]. Genetics, 1991, 129: 897-907.

    [5]AYADI M, BRINI F, MASMOUDI K. Overexpression of a wheat aquaporin gene, TdPIP2;1, enhances salt and drought tolerance in transgenic durum wheat cv. Maali [J]. International Journal of Molecular Sciences, 2019, 20(10): 2389.

    [6]孫天旭, 李玉花, 張旸. 逆境條件下水孔蛋白PIPs作用的研究進(jìn)展[J]. 植物生理學(xué)報, 2014, 50(6): 749-757.

    [7]劉海莉. 蘋果質(zhì)膜水通道蛋白基因PIP2;1的耐旱及耐鹽性功能分析[D]. 楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué), 2019.

    [8]王星,張紀(jì)龍,馮秀秀,等. 植物質(zhì)膜水通道蛋白轉(zhuǎn)運及逆境脅迫響應(yīng)的分子調(diào)控機制[J]. 遺傳, 2017, 39(4): 293-301.

    [9]CHEN H T, ZENG Y, YANG Y Z, et al. Allele-aware chromosome-level genome assembly and efficient transgene-free genome editing for the autotetraploid cultivated alfalfa [J]. Nature Communications, 2020, 11: 2494.

    [10]ZHANG Y Y, SHI E, YANG Z P, et al. Development and application of genomic resources in an endangered palaeoendemic tree, Parrotia subaequalis (Hamamelidaceae) from eastern China[J]. Frontiers in Plant Science, 2018, 9: 246.

    [11]CUI G X, WANG C M, WEI X X, et al. Analysis of synonymous codon usage of the complete chloroplast genome in Phleum pratense cv. Minshan[J]. International Journal of Agriculture & Biology, 2020, 24(2): 352-358.

    [12]王婧,王天翼,王羅云,等. 沙棗葉綠體全基因組序列及其使用密碼子偏性分析[J]. 西北植物學(xué)報, 2019, 39(9): 1559-1572.

    [13]WEI L, HE J, JIA X, et al. Analysis of codon usage bias of mitochondrial genome in Bombyx mori and its relation to evolution [J]. BMC Evolutionary Biology, 2014, 14: 262.

    [14]惠小涵,程婷婷,柯衛(wèi)東,等. 蓮藕PPO基因密碼子偏好性特征分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2020,36(2):438-446.

    [15]張玉波,周正湘,吳小玉,等. 基于轉(zhuǎn)錄組的大頭金蠅密碼子的偏好性分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2019,47(11):78-81.

    [16]趙森,鄧力華,陳芬. 不同植物FERONIA基因密碼子使用偏好性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2020,36(5):1073-1081.

    [17]楊國鋒,蘇昆龍,趙怡然,等. 蒺藜苜蓿葉綠體密碼子偏好性分析[J]. 草業(yè)學(xué)報, 2015, 24(12): 171-179.

    [18]屈蒙蒙,孫雪麗,郝向陽,等. 香蕉水通道蛋白基因家族的密碼子偏好性分析[J]. 園藝與種苗, 2018(5): 4-10.

    [19]SONG H, LIU J, CHEN T, et al. Synonymous codon usage pattern in model legume Medicago truncatula[J]. Journal of Integrative Agriculture, 2018, 17: 2074-2081.

    [20]WRIGHT F. The effective number of codons used in a gene[J]. Gene, 1990, 87: 23-29.

    [21]ZHANG D S, HU P, LIU T G, et al. GC bias lead to increased small amino acids and random coils of proteins in coldwater fishes[J]. BMC Genomics, 2018, 19: 315.

    (責(zé)任編輯:張震林)

    收稿日期:2021-03-29

    作者簡介:張海霞(1975-),女,甘肅民勤人,本科,高級工程師,研究方向為林草有害生物防治。(E-mail)1098149863@qq.com

    通訊作者:王玉道,(E-mail)1602239412@qq.com

    猜你喜歡
    突變
    精子線粒體與男性不育的相關(guān)性研究進(jìn)展
    兩種檢測方法對71例非綜合征型耳聾患者基因檢測結(jié)果的對比分析
    黔西南州日照時數(shù)變化分析
    例析應(yīng)對體育教學(xué)環(huán)境突變的教學(xué)策略
    關(guān)于分析皮帶傳送中的摩擦力突變問題
    考試周刊(2016年76期)2016-10-09 09:47:35
    快速PCR介導(dǎo)的NeuroD—3′UTR的定點突變研究
    抑癌基因p16在燃煤型砷中毒患者中突變及甲基化的情況與意義
    北約防長開會應(yīng)對東歐“突變”
    遼寧朝陽地區(qū)氣溫變化特征分析
    G蛋白偶聯(lián)受體突變分析的生物信息學(xué)方法及其資源研究
    亚洲欧美精品综合一区二区三区| av片东京热男人的天堂| √禁漫天堂资源中文www| 在线观看66精品国产| 午夜激情久久久久久久| 在线看a的网站| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲熟女毛片儿| 日日爽夜夜爽网站| 桃花免费在线播放| 欧美日韩视频精品一区| videosex国产| 久久亚洲精品不卡| 真人做人爱边吃奶动态| 麻豆国产av国片精品| 午夜福利在线免费观看网站| 涩涩av久久男人的天堂| 久9热在线精品视频| 国产高清激情床上av| 中文字幕高清在线视频| 久久精品成人免费网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 青青草视频在线视频观看| 我要看黄色一级片免费的| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 免费黄频网站在线观看国产| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 午夜免费成人在线视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久香蕉激情| 国产高清激情床上av| 曰老女人黄片| 亚洲欧洲日产国产| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧美色中文字幕在线| 热re99久久国产66热| 两人在一起打扑克的视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一个人免费看片子| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| av网站免费在线观看视频| 日韩视频在线欧美| 飞空精品影院首页| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 看免费av毛片| 香蕉国产在线看| 久久久欧美国产精品| 久久久久久久国产电影| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲精品一区二区www | 少妇粗大呻吟视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 手机成人av网站| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲综合色网址| 9色porny在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 丝袜美足系列| 一区二区三区激情视频| 国产一区二区三区视频了| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲,欧美精品.| 91成年电影在线观看| 国产成人精品无人区| 99香蕉大伊视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 9191精品国产免费久久| 一区二区三区激情视频| 蜜桃在线观看..| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美乱妇无乱码| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美大码av| 亚洲专区国产一区二区| 新久久久久国产一级毛片| 天堂动漫精品| 青草久久国产| 中文字幕色久视频| 人人澡人人妻人| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 满18在线观看网站| 欧美日韩视频精品一区| 午夜激情久久久久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美激情高清一区二区三区| 久久毛片免费看一区二区三区| 在线观看免费视频日本深夜| 午夜激情av网站| 在线观看66精品国产| 中文字幕高清在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品久久蜜臀av无| 成人国语在线视频| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av美国av| 999精品在线视频| 曰老女人黄片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 中文字幕色久视频| 高清毛片免费观看视频网站 | 看免费av毛片| 亚洲综合色网址| 国产片内射在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲精品一二三| 91九色精品人成在线观看| 黄频高清免费视频| 久久人妻熟女aⅴ| 中文字幕人妻丝袜制服| 啦啦啦 在线观看视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄片大片在线免费观看| 精品第一国产精品| 精品福利观看| 在线观看免费视频网站a站| 另类亚洲欧美激情| 亚洲精品一二三| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产91精品成人一区二区三区 | 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 日本wwww免费看| 亚洲人成电影观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品第一国产精品| 久久久国产一区二区| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 人妻一区二区av| 欧美黑人欧美精品刺激| 女人久久www免费人成看片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 美女国产高潮福利片在线看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲精品在线观看二区| av一本久久久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产日韩欧美亚洲二区| av国产精品久久久久影院| 在线天堂中文资源库| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 人妻久久中文字幕网| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产午夜精品久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 视频在线观看一区二区三区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 免费在线观看黄色视频的| 中国美女看黄片| 久久性视频一级片| 久久久国产成人免费| 国产有黄有色有爽视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一进一出好大好爽视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久国产精品影院| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲成人国产一区在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美黄色片欧美黄色片| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲欧美激情在线| 国产一区二区三区视频了| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产真人三级小视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| e午夜精品久久久久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 中文亚洲av片在线观看爽 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄色视频,在线免费观看| 视频区图区小说| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 黄色视频,在线免费观看| 成人三级做爰电影| 91九色精品人成在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 69av精品久久久久久 | 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 怎么达到女性高潮| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 婷婷成人精品国产| 乱人伦中国视频| 极品教师在线免费播放| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 2018国产大陆天天弄谢| 色94色欧美一区二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 91av网站免费观看| 亚洲精华国产精华精| 操出白浆在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美成人免费av一区二区三区 | www.自偷自拍.com| 亚洲第一av免费看| 黄色成人免费大全| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久久免费视频了| 国产一区二区 视频在线| 国产免费福利视频在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产成人免费观看mmmm| 2018国产大陆天天弄谢| av天堂久久9| 久久精品国产综合久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久久久久久久国产电影| 国产精品久久久av美女十八| 久久久精品免费免费高清| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美中文综合在线视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产真人三级小视频在线观看| 男女边摸边吃奶| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲中文字幕日韩| 欧美黄色片欧美黄色片| 久9热在线精品视频| 久久 成人 亚洲| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 91精品国产国语对白视频| 国产xxxxx性猛交| 欧美日韩成人在线一区二区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 最黄视频免费看| 超碰成人久久| 99在线人妻在线中文字幕 | 久久精品国产综合久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 日本av免费视频播放| 在线观看舔阴道视频| 国产野战对白在线观看| 国产av精品麻豆| 婷婷丁香在线五月| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 少妇精品久久久久久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| av片东京热男人的天堂| 亚洲欧美一区二区三区久久| 搡老岳熟女国产| 人成视频在线观看免费观看| 国产高清videossex| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲第一青青草原| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲国产av影院在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲黑人精品在线| 操出白浆在线播放| 日韩中文字幕视频在线看片| bbb黄色大片| 最新的欧美精品一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看 | 午夜免费成人在线视频| 韩国精品一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 午夜日韩欧美国产| 热re99久久国产66热| 男人操女人黄网站| av福利片在线| 国产精品免费大片| 老司机亚洲免费影院| 日韩欧美国产一区二区入口| 91成人精品电影| 乱人伦中国视频| 搡老岳熟女国产| 性色av乱码一区二区三区2| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 女人精品久久久久毛片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 女性被躁到高潮视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 18禁国产床啪视频网站| 91av网站免费观看| 香蕉国产在线看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 麻豆av在线久日| 中文字幕色久视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 飞空精品影院首页| 99re在线观看精品视频| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美乱妇无乱码| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产国语露脸激情在线看| 我的亚洲天堂| 在线观看免费视频日本深夜| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 老司机深夜福利视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品一区二区在线不卡| 少妇粗大呻吟视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美国产精品一级二级三级| 男人舔女人的私密视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产午夜精品久久久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品一区二区在线观看99| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲熟女精品中文字幕| 男女高潮啪啪啪动态图| 岛国在线观看网站| videos熟女内射| 成在线人永久免费视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产xxxxx性猛交| cao死你这个sao货| tocl精华| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产av又大| 亚洲欧洲日产国产| 欧美人与性动交α欧美软件| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 无遮挡黄片免费观看| 少妇精品久久久久久久| 免费在线观看完整版高清| 五月开心婷婷网| 一个人免费看片子| kizo精华| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精华国产精华精| 成年女人毛片免费观看观看9 | 精品人妻1区二区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 国产精品久久久久久精品古装| 天天影视国产精品| 18禁国产床啪视频网站| 久久国产精品大桥未久av| 国产欧美日韩一区二区精品| 青青草视频在线视频观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 最黄视频免费看| bbb黄色大片| 最近最新中文字幕大全电影3 | 人人妻人人澡人人看| 国产av又大| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲中文字幕日韩| 丝袜喷水一区| 国产亚洲一区二区精品| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 精品久久久久久电影网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久人妻av系列| 亚洲一区二区三区欧美精品| 电影成人av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 在线av久久热| 高清av免费在线| 男男h啪啪无遮挡| 久久久精品区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久久国产一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 日韩免费av在线播放| 十八禁网站网址无遮挡| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 99国产极品粉嫩在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线av久久热| 青青草视频在线视频观看| 999精品在线视频| 亚洲第一青青草原| 高清毛片免费观看视频网站 | 欧美成人性av电影在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 麻豆成人av在线观看| 在线播放国产精品三级| 在线播放国产精品三级| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 两个人视频免费观看高清| av女优亚洲男人天堂 | 精品国产三级普通话版| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日韩三级视频一区二区三区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产亚洲欧美98| 首页视频小说图片口味搜索| www.精华液| 亚洲国产精品合色在线| 精品人妻1区二区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 性色avwww在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产毛片a区久久久久| 丁香欧美五月| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜影院日韩av| 国产一区二区在线av高清观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 99久久精品国产亚洲精品| 中文字幕av在线有码专区| 国产极品精品免费视频能看的| 色综合婷婷激情| 国产成人精品久久二区二区免费| 免费无遮挡裸体视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产三级黄色录像| 欧美zozozo另类| 亚洲欧美精品综合久久99| 脱女人内裤的视频| 好男人电影高清在线观看| 黄片小视频在线播放| 欧美色视频一区免费| 99热这里只有是精品50| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产精品999在线| 色综合站精品国产| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 免费搜索国产男女视频| 男女那种视频在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久九九热精品免费| 久久人妻av系列| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产黄片美女视频| 宅男免费午夜| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产高清videossex| 丁香六月欧美| 精品人妻1区二区| 制服丝袜大香蕉在线| 99热这里只有精品一区 | 99国产精品一区二区三区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 九九热线精品视视频播放| 欧美日韩一级在线毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久人人精品亚洲av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美不卡视频在线免费观看| 免费电影在线观看免费观看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲av成人精品一区久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 人人妻人人澡欧美一区二区| 18禁美女被吸乳视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 身体一侧抽搐| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲精品456在线播放app | 国产av不卡久久| 日本 欧美在线| 精品日产1卡2卡| 九九在线视频观看精品| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 人人妻人人看人人澡| 成人av一区二区三区在线看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲五月婷婷丁香| 99热精品在线国产| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 俺也久久电影网| 色综合欧美亚洲国产小说| 女同久久另类99精品国产91| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日韩高清综合在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91麻豆av在线| 无限看片的www在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久中文字幕一级| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲精品色激情综合| 1024手机看黄色片| 国产 一区 欧美 日韩| 1000部很黄的大片| ponron亚洲| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久精品影院6| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜亚洲福利在线播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产99白浆流出| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产亚洲精品久久久com| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美激情在线99| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 草草在线视频免费看| 99精品久久久久人妻精品| 在线国产一区二区在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 老司机午夜福利在线观看视频| 悠悠久久av| 天天躁日日操中文字幕| www日本在线高清视频| 丁香欧美五月| bbb黄色大片| 国产精品一区二区精品视频观看| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲第一电影网av| 久久久久久人人人人人| 在线观看午夜福利视频| 成人精品一区二区免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线观看日韩欧美| 成年版毛片免费区| 精华霜和精华液先用哪个| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲av五月六月丁香网| 国产成年人精品一区二区| 成熟少妇高潮喷水视频| 九九在线视频观看精品| 日本a在线网址| 国产av一区在线观看免费| 国产男靠女视频免费网站| 欧美成人性av电影在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 美女午夜性视频免费| 国产成人aa在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久精品国产清高在天天线| 老鸭窝网址在线观看| 久久人妻av系列| 久久国产精品影院| 观看美女的网站| 成人三级黄色视频| 一进一出抽搐动态| 国产精品久久久久久久电影 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品日产1卡2卡| 午夜福利18| 亚洲欧美日韩高清专用| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 成人无遮挡网站| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产精品,欧美在线| 日本三级黄在线观看| avwww免费| 欧美3d第一页| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久久色成人| 全区人妻精品视频| 午夜免费激情av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 中亚洲国语对白在线视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 成人特级av手机在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久久久国产a免费观看| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲国产欧美人成| 精品国产乱子伦一区二区三区|