新改良白膜法制備血小板的質(zhì)量分析

王海燕,楊小羅,熊志高

(株洲市中心血站,湖南 株洲412007)

隨著臨床輸血技術的迅速發(fā)展,單采血小板、濃縮血小板的制備技術取得了長足的進步.我國的單采血小板由于使用單采血細胞分離機及血袋,和國際先進水平基本保持了同步[1].單采血小板因其濃縮高、純度大、臨床輸注效果好、白細胞污染少、不良反應少等優(yōu)點被廣泛應用于臨床.傳統(tǒng)手工方法制備的血小板人工操作的誤差較大,血小板回收率不高,質(zhì)量不穩(wěn)定,在臨床應用上也因具有多人輸注風險而不被接受.結(jié)果,一方面臨床上機采血小板供不應求,另一方面無償獻血全血中寶貴的血小板資源被大量浪費.因此,改進濃縮血小板的制備方法對于緩解目前血小板供需矛盾具有重要意義.

1 材料與方法

1.1 血液

隨機抽取120 袋6 h 內(nèi)采集22 ±2 ℃保存運輸?shù)?00 mL 全血,隨機分成對照組和靜置組A、B、C 共4 組,每組各30 袋.

1.2 設備與血袋

大容量離心機(德國Thermo CRYOFUGE 16)、全自動血液成分分離機(德國Compomat G5)、血小板恒溫保存箱(去除振蕩,中科都菱MDC-10PE)、全自動血液分析儀(日本XS-800i)、PT-Q-400 全血六聯(lián)血袋(山東威高).

1.3 制備方法與分組

(1)白膜法(對照組)

①全血離心:400 mL 于6 h 內(nèi)采集22 ±2 ℃保存和運輸?shù)牧?lián)袋全血,以1993 g、16 min、22 ℃、加速7、減速4 離心.②分離白膜:離心后將血液懸掛于血液成分分離機上,選擇相應分離程序,分離出白膜三聯(lián)袋.③白膜離心:將白膜單袋用自制模板平整裝杯并用其它聯(lián)袋和塑料軟片適當填充以避免袋體產(chǎn)生褶皺,以163 g、10 min、22 ℃、加速7、減速4 離心.④分離血小板:離心后將白膜袋懸掛于血液成分分離機上,選擇相應分離程序,分離出濃縮血小板,核對重量后取下血袋.

(2)新改良白膜法(靜置組)

三種靜置方法均使用與白膜法相同的離心方法:將全血以1993 g、16 min、22℃、加速7、減速4 離心分離出白膜;將白膜以163 g、10 min、22 ℃、加速7、減速4 離心分離岀血小板,具體操作方法與白膜法相同.①靜置組A:先將全血置22 ± 2℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,然后按白膜法離心分離制備血小板.②靜置組B:先將全血按白膜法離心分離出白膜三聯(lián)袋,然后將白膜三聯(lián)袋置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,再以同樣方法離心白膜袋分離岀血小板.③靜置組C:將全血置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h,按白膜法離心分離出白膜三聯(lián)袋,再將白膜三聯(lián)袋置22 ±2 ℃血小板恒溫保存箱靜置2 h 以上,然后用同樣方法離心分離出濃縮血小板.

1.4 指標檢測

將血小板充分混勻后留取2 mL 標本,用XS-800i 全自動血液分析儀做血常規(guī)計數(shù),檢測血小板計數(shù);稱量血小板重量,折算血小板容量.

1.5 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS17.0 軟件進行統(tǒng)計學處理,采用單因素方差分析,以p＜0.05為有統(tǒng)計學意義.

2 結(jié)果

四組分離方法制備的手工濃縮血小板中的血小板容量、濃度、含量等見表1～4.對照組和靜置組A、B、C的濃縮血小板均數(shù)見表5.應用新改良白膜法制備的濃縮血小板,各項質(zhì)控指標均能達到全血及成分血質(zhì)量要求(國標GB18469-2012).靜置組三組的血小板計數(shù)均較對照組的計數(shù)高.其中將全血和白膜均靜置的C 組血小板計數(shù)最高.靜置組C 組與其他組的均數(shù)差別均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05).

表1 白膜法對照組實驗數(shù)據(jù)

表2 新改良白膜法靜置組A 實驗數(shù)據(jù)

表3 新改良白膜法靜置組B 實驗數(shù)據(jù)

表4 新改良白膜法靜置組C 實驗數(shù)據(jù)

表5 不同方法制備濃縮血小板的質(zhì)量控制結(jié)果(± s,n＝30)

表5 不同方法制備濃縮血小板的質(zhì)量控制結(jié)果(± s,n＝30)

制備方法 血小板計數(shù)(×1010／袋)白膜法對照組 3.99 ± 0.97新改良白膜法靜置組A 4.13 ± 0.83新改良白膜法靜置組B 4.26 ± 0.80新改良白膜法靜置組C 4.98 ± 1.20

3 討論

手工分離血小板的質(zhì)量,除了與制備方法有關外,還受多種因素影響[2],如全血獻血者個體因素、血液運輸及儲存的條件和溫度、血液離心及分離的設備和方法等.株洲市中心血站自1996年開展?jié)饪s血小板制備以來,在實際工作中不斷摸索總結(jié),于2002年采用400mL 全血富漿法分離制備濃縮血小板[3].2018年起,將改良白膜法[4]改進成新改良白膜法,簡化了離心分離步驟,增加了全血及白膜恒溫靜置環(huán)節(jié),使用全自動血液成分分離機制備濃縮血小板,進一步提升了手工制備濃縮血小板的質(zhì)量,并將多袋濃縮血小板匯集后再進行去白細胞過濾,制備成混合濃縮血小板.

本文中四種方法制備的血小板,均在采血當日分離出白膜.靜置組A 是參照文[5]的研究,先將全血22 ±2 ℃恒溫靜置2 h,充分發(fā)揮全血中白細胞吞噬細菌的作用,分離出富含血小板的白膜,提高血小板計數(shù)及質(zhì)量.靜置組B 依據(jù)文[6]的研究,將白膜室溫靜置2 h,使白膜里的血小板和白細胞形成微聚體解聚,分離制備的濃縮血小板回收率更高.朱仕清[7]等探討用新白膜法制備濃縮血小板,研究出將白膜放置12 h及26 h 制備的濃縮血小板,其含量也超過國家標準.靜置組C 嘗試綜合利用全血靜置和白膜靜置研究結(jié)果,參照新白膜法和改良白膜法,實驗過程中將全血置22 ±2 ℃恒溫保存箱靜置1～2h,分離出白膜后將白膜以同樣條件恒溫靜置2 h 以上,但不超過采集后24 h.同時,優(yōu)化新白膜法離心參數(shù),簡化改良白膜法離心分離步驟,以提高血小板計數(shù)及回收率.從檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),將全血和白膜均靜置的新改良白膜法制備的血小板計數(shù)最高.本結(jié)果與國內(nèi)將全血靜置及白膜靜置制備血小板的相關研究結(jié)果相符.

在實際工作中,本站還采用多方舉措提高濃縮血小板的質(zhì)量,如采血點和成分制備科配置22 ± 2℃恒溫血液保存箱,確保制備血液溫度恒定在要求范圍內(nèi);配備專用運輸汽車,減少血液振蕩;采用全自動血液成分分離機制備濃縮血小板,減少人工操作誤差;離心裝杯時自制定型模板,避免袋體產(chǎn)生褶皺.此外,為減少對血小板的損傷,逐步調(diào)整全血和白膜的離心力,最終確認全血以1993 g 離心16 min、白膜以163 g離心10 min 所制備的濃縮血小板計數(shù)最高.但血小板功能及在保存過程中質(zhì)量的穩(wěn)定還有待進一步研究與評價.

新改良白膜法充分利用現(xiàn)有條件,不需要特殊設備,采用兩次恒溫靜置,操作簡便易學,適用于血站常規(guī)制備濃縮血小板.筆者認為,新改良白膜法能大幅提高濃縮血小板的質(zhì)量,值得臨床推廣應用.