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    hVEGFR2-KI小鼠血液生理生化參數(shù)的測定與分析*

    2021-01-22 08:15:06光姣娜劉甦蘇賈松華范昌發(fā)岳秉飛
    實驗動物科學 2020年1期
    關鍵詞:百分率周齡生理

    光姣娜 魏 杰 王 洪 劉甦蘇 熊 芮 賈松華 范昌發(fā) 岳秉飛

    (中國食品藥品檢定研究院,北京 102600)

    腫瘤作為一種極大危害公眾健康的疾病,近年來引發(fā)越來越多人們的關注。腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程主要包括正常組織細胞發(fā)生突變,異常增生,形成血管,腫瘤腫塊,腫瘤遷移。由上可見,血管的形成尤為重要。血管內皮生長因子受體-2(vascular endothelial growth factorreceptor,VEGFR-2),又稱激酶功能區(qū)受體(KDR)在正常人體中低水平表達,而晚期腫瘤患者體內高水平表達[1]。KDR和血管內皮生長因子(VEGF)相互結合在胚胎血管形成以及血管修復方面有重要作用。有研究發(fā)現(xiàn),KDR的編碼基因flk-1呈雜合子類型時不會影響血管的原始循環(huán)。同時flk-1產(chǎn)生的KDR在血管形成中是必須的[2-3]。這就使hVEGFR2-KI小鼠被應用在腫瘤研究領域成為可能。

    實驗小鼠的表現(xiàn)型是遺傳物質和外部環(huán)境的共同作用結果。血液學參數(shù)能夠提供小鼠的基本背景信息,其在一定程度上反映了實驗動物的狀態(tài)[4-5]。作為重要的生物學指標,血液學參數(shù)也是藥物反應監(jiān)測中必須檢測的指標[6-7]。目前還沒有hVEGFR2-KI小鼠的生物學數(shù)據(jù)報道,本研究進行了不同周齡、性別hVEGFR2-KI小鼠的生理生化指標測定,為相關研究應用提供基礎數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物及處理

    hVEGFR2-KI小鼠由本單位自主構建,通過將人類KDR基因敲入到C57BL/6小鼠一條染色體上構建而成。

    分別取4周齡、8周齡各20只hVEGFR2-KI小鼠雌雄各半,禁食12 h后,取20 μL靜脈血測生理指標。全血離心后取上清測生化指標。所有實驗操作均按照實驗動物福利倫理原則進行。實驗動物生產(chǎn)證號SCXK(京)2017-0005。實驗動物使用證號SYXK(京)2017-0013。

    1.2 主要儀器及設備

    日本光電Mek722 2血細胞分析儀,奧林巴斯AU400全自動生化分析儀。

    1.3 試劑

    測生理指標所用的清洗液DH520、清洗液DH620、稀釋液DH640、溶血劑DH910和溶血劑DH680來自上海東湖生物醫(yī)學有限公司。檢測生化指標所用到的試劑來自中生北控生物科技股份有限公司。

    1.4 測定項目及方法

    根據(jù)說明書用日本光電Mek722 2血細胞分析儀測定紅細胞計數(shù)(RBC)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血紅蛋白濃度(HGB)、白細胞計數(shù)(WBC)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞分布寬度(RDW)、血小板計數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板壓積(PCT)、血小板分布寬度(PDW)、淋巴細胞絕對值(LYM)、單核細胞絕對值(MON)、中性粒細胞絕對值(NEUT)、嗜酸性粒細胞絕對值(EOS)、嗜堿性粒細胞絕對值(BAS)、淋巴細胞百分率(LYM%)、單核細胞百分率(MON%)、中性粒細胞百分率(NEUT%)、嗜酸性粒細胞百分率(EOS%)和嗜堿性粒細胞百分率(BAS%)。共計22項指標。

    按照說明書用奧林巴斯AU400全自動生化分析儀測定總蛋白(TP)、總膽固醇(CHO)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、磷(P)和甘油三酯(TG),共計11項生化指標。

    1.5 統(tǒng)計方法

    2 結果

    2.1 不同性別的4周齡hVEGFR2-KI小鼠血液生理生化參數(shù)的比較

    在22項生理學指標以及11項生化指標中,RBC、HCT、MCH、MCHC共4項結果有極顯著差異(P<0.01),HGB、TP、CHO共3項指標差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其余各項之間的差異無統(tǒng)計學意義,見表1。

    2.2 不同性別的8周齡hVEGFR2-KI小鼠生理生化參數(shù)的比較

    如表2所示,由不同性別8周齡hVEGFR2-KI小鼠的血液生化指標檢測結果可得,共有11項生理生化指標有極顯著差異,分別是RBC、HCT、HGB、PLT、PCT、NEUT、MON%和CHO、ALP、GLU、TG;共有5項指標具有顯著差異,即LYM%、NEUT%、TP、BUN和P。

    2.3 不同年齡的hVEGFR2-KI小鼠之間的生理生化指標的比較

    如表3所示,4周齡和8周齡在生理生化指標方面,有RBC、HCT、MCH、HGB、WBC、MCV、RDW、MPV、PDW、LYM、MON%、TP、CHO、ALB、ALP、CREA、GLU、P共18項極顯著差異指標;以及PLT、LYM%、NEUT%、ALT、TG共5項具有顯著差異指標。

    3 討論

    3.1 性別對于hVEGFR2-KI小鼠的影響

    在檢測到的22項生理學指標以及11項生化指標中,從4周齡和8周齡hVEGFR2-KI小鼠不同性別之間各自比較的結果來看,4周齡小鼠雌雄之間主要是在紅細胞以及膽固醇方面有極顯著或顯著差異,涉及紅細胞數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積、平均紅細胞血紅蛋白及其濃度、總蛋白和總膽固醇7項,其余各項均無明顯差異。因此進行非紅細胞或膽固醇方面研究時可考慮減少對于性別差異的關注。

    而8周齡小鼠除了紅細胞方面在血小板,中性粒細胞,單核細胞,淋巴細胞百分率,堿性磷酸酶,葡萄糖,甘油三脂,尿素各個方面也具有顯著差異,綜合來看,這可能提示8周齡小鼠雌雄之間的免疫情況有所差異。

    表1 不同性別的4周齡hVEGFR2-KI小鼠的血液生理生化參數(shù)

    表2 不同性別8周齡hVEGFR2-KI小鼠的血液生化指標

    表3 不同年齡的hVEGFR2-KI小鼠之間的生理生化指標差異

    3.2 年齡對與hVEGFR2-KI小鼠的影響

    縱向來看,不同周齡的hVEGFR2-KI小鼠所測得的22項生理指標和11項生化指標中有18項具有極顯著差異,5項結果具有顯著差異。生理指標中除了平均紅細胞血紅蛋白濃度以及血小板壓積這兩項外均有極顯著或顯著差異;各項免疫細胞的指標中淋巴細胞的絕對值和單核細胞的百分率有顯著性差異,淋巴細胞的百分率、中性粒細胞百分率這2項結果差異具有統(tǒng)計學意義。生化指標中差異范圍更大,除尿素和天冬氨酸氨基轉移酶之外其余各項指標差異均有統(tǒng)計學意義,這其中除了甘油三酯之外都有顯著性差異。綜合來看,不同年齡的hVEGFR2-KI小鼠之間生理生化上具有明顯的差異。在平行實驗中宜選取相同年齡段小鼠進行實驗。

    3.3 hVEGFR2-KI小鼠的選擇特性

    形成血管是腫瘤的發(fā)生發(fā)展中必不可少的一部分,已有研究發(fā)現(xiàn)機體內的VEGF和KDR相結合,在后期的血管形成和血管修復中有重要作用,并且以KDR為靶點治療癌癥[8-10]。用到KDR基因敲除小鼠自然不可避免,而純合的KDR敲除小鼠的成活率很低。因此我們檢測hVEGFR2-KI小鼠的血液生理生化指標,并分析了年齡和性別對于該品系小鼠的影響。發(fā)現(xiàn)4周齡hVEGFR2-KI小鼠雌雄之間差距相對較小,主要集中在紅細胞和膽固醇方面。8周齡hVEGFR2-KI雌雄小鼠差異相對明顯,在免疫方面也有顯著差異。不同周齡小鼠生理生化的很多方面都有極顯著或顯著差異。本研究所提供hVEGFR2-KI小鼠的生理生化數(shù)據(jù),為科研工作者進行實驗研究選擇動物方面提供一定參考。

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